Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth10_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth10_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Created output directory Mcap_test06-rutgers/! Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-rutgers/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ chr 1 (3259165 bp) chr 2 (3468816 bp) chr 3 (700192 bp) chr 4 (2934407 bp) chr 5 (2430108 bp) chr 6 (2758956 bp) chr 7 (2199593 bp) chr 8 (63180 bp) chr 9 (2265284 bp) chr 10 (2133031 bp) chr 11 (321139 bp) chr 12 (2060969 bp) chr 13 (2130412 bp) chr 14 (1997637 bp) chr 15 (2070015 bp) chr 16 (1944206 bp) chr 17 (2086788 bp) chr 18 (1961032 bp) chr 19 (2784121 bp) chr 20 (1774193 bp) chr 21 (1917492 bp) chr 22 (767896 bp) chr 23 (1953587 bp) chr 24 (1911142 bp) chr 25 (1913817 bp) chr 26 (1804681 bp) chr 27 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the input file Meth10_R1_001.fastq.gz to Meth10_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth10_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth10_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth10_R2_001.fastq.gz to Meth10_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth10_R2_001.fastq.gz to Meth10_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth10_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth10_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth10_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth10_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth10_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth10_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth10_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23204:1000_1:N:0:AACCTGAA+NTGGTGAG/1 77 * 0 0 * * 0 0 GNGTGTGAAGATGTGGAGTTTGTTTTTATTTTGTGGGGTGTTTTTGTTTGTATTTTTTTTAAAAATAAAGATATTGATAAATTGAAATTATTTTTGTTAATAGTTTTGGTTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATAATT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23204:1000_2:N:0:AACCTGAA+NTGGTGAG/2 141 * 0 0 * * 0 0 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F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23204:1000_2:N:0:AACCTGAA+NTGGTGAG/2 141 * 0 0 * * 0 0 TAATTAAAATTATTAATAAAAATAATTTTAATTTATTAATATTTTTATTTTTAAAAAAAATATAAATAAAAATATTTTATAAAATAAAAATAAATTTTATATTTTTATATATAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTTTAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,FFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFF,FF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF,FFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth10_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth10_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23204:1000_1:N:0:AACCTGAA+NTGGTGAG/1 77 * 0 0 * * 0 0 ANATATAAAAATATAAAATTTATTTTTATTTTATAAAATATTTTTATTTATATTTTTTTTAAAAATAAAAATATTAATAAATTAAAATTATTTTTATTAATAATTTTAATTAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACAACC F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23204:1000_2:N:0:AACCTGAA+NTGGTGAG/2 141 * 0 0 * * 0 0 TAATTAAAATTATTAATAAAAATAATTTTAATTTATTAATATTTTTATTTTTAAAAAAAATATAAATAAAAATATTTTATAAAATAAAAATAAATTTTATATTTTTATATATAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTTTAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,FFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFF,FF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF,FFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth10_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth10_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23204:1000_1:N:0:AACCTGAA+NTGGTGAG/1 77 * 0 0 * * 0 0 GNGTGTGAAGATGTGGAGTTTGTTTTTATTTTGTGGGGTGTTTTTGTTTGTATTTTTTTTAAAAATAAAGATATTGATAAATTGAAATTATTTTTGTTAATAGTTTTGGTTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATAATT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23204:1000_2:N:0:AACCTGAA+NTGGTGAG/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAACCAAAACTATTAACAAAAATAATTTCAATTTATCAATATCTTTATTTTTAAAAAAAATACAAACAAAAACACCCCACAAAATAAAAACAAACTCCACATCTTCACACACAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATCTCAC FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,FFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFF,FF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF,FFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth10_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth10_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth10_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9433 (94.33%) aligned concordantly 0 times 304 (3.04%) aligned concordantly exactly 1 time 263 (2.63%) aligned concordantly >1 times 5.67% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9410 (94.10%) aligned concordantly 0 times 351 (3.51%) aligned concordantly exactly 1 time 239 (2.39%) aligned concordantly >1 times 5.90% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9414 (94.14%) aligned concordantly 0 times 333 (3.33%) aligned concordantly exactly 1 time 253 (2.53%) aligned concordantly >1 times 5.86% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9426 (94.26%) aligned concordantly 0 times 315 (3.15%) aligned concordantly exactly 1 time 259 (2.59%) aligned concordantly >1 times 5.74% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth10_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth10_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth10_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth10_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 1303 Mapping efficiency: 13.0% Sequence pairs with no alignments under any condition: 8279 Sequence pairs did not map uniquely: 418 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 317 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 333 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 347 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 306 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 78016 Total methylated C's in CpG context: 1540 Total methylated C's in CHG context: 169 Total methylated C's in CHH context: 580 Total methylated C's in Unknown context: 20 Total unmethylated C's in CpG context: 11065 Total unmethylated C's in CHG context: 13685 Total unmethylated C's in CHH context: 50977 Total unmethylated C's in Unknown context: 84 C methylated in CpG context: 12.2% C methylated in CHG context: 1.2% C methylated in CHH context: 1.1% C methylated in unknown context (CN or CHN): 19.2% Bismark completed in 0d 0h 0m 22s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth11_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth11_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-rutgers/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ chr 1 (3259165 bp) chr 2 (3468816 bp) chr 3 (700192 bp) chr 4 (2934407 bp) chr 5 (2430108 bp) chr 6 (2758956 bp) chr 7 (2199593 bp) chr 8 (63180 bp) chr 9 (2265284 bp) chr 10 (2133031 bp) chr 11 (321139 bp) chr 12 (2060969 bp) chr 13 (2130412 bp) chr 14 (1997637 bp) chr 15 (2070015 bp) chr 16 (1944206 bp) chr 17 (2086788 bp) chr 18 (1961032 bp) chr 19 (2784121 bp) chr 20 (1774193 bp) chr 21 (1917492 bp) chr 22 (767896 bp) chr 23 (1953587 bp) chr 24 (1911142 bp) chr 25 (1913817 bp) chr 26 (1804681 bp) chr 27 (1851931 bp) chr 28 (1794943 bp) chr 29 (1682159 bp) chr 30 (1713494 bp) chr 31 (1624384 bp) chr 32 (1703322 bp) chr 33 (1697854 bp) chr 34 (1681457 bp) chr 35 (1704315 bp) chr 36 (1721755 bp) chr 37 (1579056 bp) chr 38 (1642316 bp) chr 39 (1597355 bp) chr 40 (1433356 bp) chr 41 (1582095 bp) chr 42 (1566444 bp) chr 43 (1583760 bp) chr 44 (1653614 bp) chr 45 (1587174 bp) chr 46 (1577616 bp) chr 47 (1582068 bp) chr 48 (1222503 bp) chr 49 (1471897 bp) chr 50 (1542380 bp) chr 51 (1424199 bp) chr 52 (1087915 bp) chr 53 (1509770 bp) chr 54 (1439035 bp) chr 55 (1535113 bp) chr 56 (1467872 bp) chr 57 (1372705 bp) chr 58 (1438549 bp) chr 59 (1557456 bp) chr 60 (1426376 bp) chr 61 (1458472 bp) chr 62 (1445116 bp) chr 63 (1399039 bp) chr 64 (1378723 bp) chr 65 (1416935 bp) chr 66 (1386521 bp) chr 67 (1432112 bp) chr 68 (1392272 bp) chr 69 (1372986 bp) chr 70 (1462355 bp) chr 71 (984453 bp) chr 72 (1297698 bp) chr 73 (1293992 bp) chr 74 (1357986 bp) chr 75 (1318972 bp) chr 76 (1367416 bp) chr 77 (1208092 bp) chr 78 (27441 bp) chr 79 (1327496 bp) chr 80 (1309361 bp) chr 81 (1341618 bp) chr 82 (1346785 bp) chr 83 (1333289 bp) chr 84 (1211459 bp) chr 85 (1283853 bp) chr 86 (1290567 bp) chr 87 (1192965 bp) chr 88 (1291894 bp) chr 89 (1260068 bp) chr 90 (1252728 bp) chr 91 (1271595 bp) chr 92 (1230537 bp) chr 93 (1237625 bp) chr 94 (1187499 bp) chr 95 (85829 bp) chr 96 (1221334 bp) chr 97 (1247042 bp) chr 98 (1216221 bp) chr 99 (1155919 bp) chr 100 (1199322 bp) chr 101 (1184412 bp) chr 102 (1192881 bp) chr 103 (82712 bp) chr 104 (1213056 bp) chr 105 (1209205 bp) chr 106 (1178971 bp) chr 107 (1185100 bp) chr 108 (1138319 bp) chr 109 (1182366 bp) chr 110 (1186349 bp) chr 111 (1196341 bp) chr 112 (1222398 bp) chr 113 (1182707 bp) chr 114 (1166526 bp) chr 115 (1117742 bp) chr 116 (1129122 bp) chr 117 (1155377 bp) chr 118 (1105652 bp) chr 119 (1033356 bp) chr 120 (1125959 bp) chr 121 (1081563 bp) chr 122 (1136263 bp) chr 123 (1129561 bp) chr 124 (1088222 bp) chr 125 (1134195 bp) chr 126 (1122153 bp) chr 127 (1090085 bp) chr 128 (1108877 bp) chr 129 (1069273 bp) chr 130 (81855 bp) chr 131 (1051189 bp) chr 132 (1107173 bp) chr 133 (1100872 bp) chr 134 (1069836 bp) chr 135 (1014124 bp) chr 136 (1077171 bp) chr 137 (1075285 bp) chr 138 (965987 bp) chr 139 (1064949 bp) chr 140 (972370 bp) chr 141 (1092226 bp) chr 142 (1076623 bp) chr 143 (1039113 bp) chr 144 (1056367 bp) chr 145 (1167597 bp) chr 146 (1057422 bp) chr 147 (1036731 bp) chr 148 (490519 bp) chr 149 (1032677 bp) chr 150 (1030587 bp) chr 151 (1016839 bp) chr 152 (890088 bp) chr 153 (923157 bp) chr 154 (1012331 bp) chr 155 (1019570 bp) chr 156 (1026825 bp) chr 157 (105424 bp) chr 158 (969835 bp) chr 159 (1008575 bp) chr 160 (1017669 bp) chr 161 (998356 bp) chr 162 (1111810 bp) chr 163 (980324 bp) chr 164 (997944 bp) chr 165 (976097 bp) chr 166 (22261 bp) chr 167 (997443 bp) chr 168 (986231 bp) chr 169 (990085 bp) chr 170 (1026670 bp) chr 171 (991344 bp) chr 172 (992414 bp) chr 173 (983620 bp) chr 174 (984199 bp) chr 175 (855127 bp) chr 176 (974323 bp) chr 177 (771339 bp) chr 178 (909260 bp) chr 179 (966406 bp) chr 180 (979842 bp) chr 181 (947336 bp) chr 182 (961385 bp) chr 183 (956308 bp) chr 184 (949239 bp) chr 185 (939692 bp) chr 186 (939789 bp) chr 187 (904200 bp) chr 188 (945029 bp) chr 189 (951017 bp) chr 190 (941056 bp) chr 191 (950888 bp) chr 192 (920528 bp) chr 193 (924255 bp) chr 194 (925527 bp) chr 195 (948614 bp) chr 196 (885086 bp) chr 197 (863395 bp) chr 198 (949918 bp) chr 199 (927707 bp) chr 200 (767822 bp) chr 201 (76909 bp) chr 202 (950804 bp) chr 203 (876878 bp) chr 204 (925796 bp) chr 205 (927892 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3005 (22398 bp) chr 3006 (22239 bp) chr 3007 (22223 bp) chr 3008 (22192 bp) chr 3009 (21962 bp) chr 3010 (21929 bp) chr 3011 (21769 bp) chr 3012 (21743 bp) chr 3013 (21724 bp) chr 3014 (21688 bp) chr 3015 (21590 bp) chr 3016 (21462 bp) chr 3017 (21378 bp) chr 3018 (21398 bp) chr 3019 (21226 bp) chr 3020 (21142 bp) chr 3021 (21088 bp) chr 3022 (21029 bp) chr 3023 (20978 bp) chr 3024 (20979 bp) chr 3025 (20911 bp) chr 3026 (20532 bp) chr 3027 (20919 bp) chr 3028 (20817 bp) chr 3029 (20652 bp) chr 3030 (20462 bp) chr 3031 (20791 bp) chr 3032 (20632 bp) chr 3033 (20540 bp) chr 3034 (20616 bp) chr 3035 (20535 bp) chr 3036 (20509 bp) chr 3037 (20511 bp) chr 3038 (20399 bp) chr 3039 (20437 bp) chr 3040 (20260 bp) chr 3041 (20304 bp) chr 3042 (20219 bp) chr 3043 (20160 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth11_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth11_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth11_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth11_R1_001.fastq.gz to Meth11_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth11_R1_001.fastq.gz to Meth11_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth11_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth11_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth11_R2_001.fastq.gz to Meth11_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth11_R2_001.fastq.gz to Meth11_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth11_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth11_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth11_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth11_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth11_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth11_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth11_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23095:1000_1:N:0:TCTCTACT+NGCGGTTC/1 77 * 0 0 * * 0 0 ANAAGGTATGGGTAAAGTAAGTTGTTAGTTGTGAATATTTTGTGAAAGAGTTGGTTTAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTTTTTATTATTTTGTATGTTGTTTTTTGTTTGAAAAGTGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG F#FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF,FFFFFFFFF,FFF::FFFFFFFF:,,::FFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23095:1000_2:N:0:TCTCTACT+NGCGGTTC/2 141 * 0 0 * * 0 0 AAACCAACTCTTTCACAAAATATTCACAACTAACAACTTACTTTACCCATACCTTTTAAATCAAAAAAACATCAAATAAAAACAAAATATAAACCACAATATAAATCTCAAAAAACACCATATCATTTCAATAAAAAAAAAAAAAAAAAA FFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF::FFFFFFFFFF:FFFFF:FF,FF,FFF,,FFFF:FFFF,FFFFFF,F,,F,:,,,:F,FF:,F,,F,,,:,,:,,,,,,::FFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth11_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth11_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23095:1000_1:N:0:TCTCTACT+NGCGGTTC/1 77 * 0 0 * * 0 0 ANAAAATATAAATAAAATAAATCATTAATCACAAATATTTTACAAAAAAATTAACCCAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACTCTCTACTATCTCATATACCATCTTCTACTTAAAAAACAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA F#FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF,FFFFFFFFF,FFF::FFFFFFFF:,,::FFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23095:1000_2:N:0:TCTCTACT+NGCGGTTC/2 141 * 0 0 * * 0 0 GGGTTAATTTTTTTGTAAAATATTTGTGATTAATGATTTATTTTATTTATATTTTTTAGATTGGAAGAGTGTTGGGTAGGGATAGAGTGTGAATTGTGGTGTAGGTTTTGGGGGGTGTTGTGTTGTTTTAATGGGGGGGGGGGGGGGGGG FFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF::FFFFFFFFFF:FFFFF:FF,FF,FFF,,FFFF:FFFF,FFFFFF,F,,F,:,,,:F,FF:,F,,F,,,:,,:,,,,,,::FFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth11_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth11_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23095:1000_1:N:0:TCTCTACT+NGCGGTTC/1 77 * 0 0 * * 0 0 ANAAAATATAAATAAAATAAATCATTAATCACAAATATTTTACAAAAAAATTAACCCAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACTCTCTACTATCTCATATACCATCTTCTACTTAAAAAACAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA F#FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF,FFFFFFFFF,FFF::FFFFFFFF:,,::FFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23095:1000_2:N:0:TCTCTACT+NGCGGTTC/2 141 * 0 0 * * 0 0 GGGTTAATTTTTTTGTAAAATATTTGTGATTAATGATTTATTTTATTTATATTTTTTAGATTGGAAGAGTGTTGGGTAGGGATAGAGTGTGAATTGTGGTGTAGGTTTTGGGGGGTGTTGTGTTGTTTTAATGGGGGGGGGGGGGGGGGG FFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF::FFFFFFFFFF:FFFFF:FF,FF,FFF,,FFFF:FFFF,FFFFFF,F,,F,:,,,:F,FF:,F,,F,,,:,,:,,,,,,::FFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth11_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth11_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23095:1000_1:N:0:TCTCTACT+NGCGGTTC/1 77 * 0 0 * * 0 0 ANAAGGTATGGGTAAAGTAAGTTGTTAGTTGTGAATATTTTGTGAAAGAGTTGGTTTAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTTTTTATTATTTTGTATGTTGTTTTTTGTTTGAAAAGTGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG F#FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF,FFFFFFFFF,FFF::FFFFFFFF:,,::FFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23095:1000_2:N:0:TCTCTACT+NGCGGTTC/2 141 * 0 0 * * 0 0 AAACCAACTCTTTCACAAAATATTCACAACTAACAACTTACTTTACCCATACCTTTTAAATCAAAAAAACATCAAATAAAAACAAAATATAAACCACAATATAAATCTCAAAAAACACCATATCATTTCAATAAAAAAAAAAAAAAAAAA FFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF::FFFFFFFFFF:FFFFF:FF,FF,FFF,,FFFF:FFFF,FFFFFF,F,,F,:,,,:F,FF:,F,,F,,,:,,:,,,,,,::FFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth11_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth11_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth11_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9271 (92.71%) aligned concordantly 0 times 402 (4.02%) aligned concordantly exactly 1 time 327 (3.27%) aligned concordantly >1 times 7.29% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9384 (93.84%) aligned concordantly 0 times 340 (3.40%) aligned concordantly exactly 1 time 276 (2.76%) aligned concordantly >1 times 6.16% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9376 (93.76%) aligned concordantly 0 times 329 (3.29%) aligned concordantly exactly 1 time 295 (2.95%) aligned concordantly >1 times 6.24% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9255 (92.55%) aligned concordantly 0 times 417 (4.17%) aligned concordantly exactly 1 time 328 (3.28%) aligned concordantly >1 times 7.45% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth11_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth11_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth11_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth11_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 1570 Mapping efficiency: 15.7% Sequence pairs with no alignments under any condition: 7977 Sequence pairs did not map uniquely: 453 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 361 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 435 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 439 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 335 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 93828 Total methylated C's in CpG context: 2256 Total methylated C's in CHG context: 189 Total methylated C's in CHH context: 714 Total methylated C's in Unknown context: 14 Total unmethylated C's in CpG context: 13448 Total unmethylated C's in CHG context: 16927 Total unmethylated C's in CHH context: 60294 Total unmethylated C's in Unknown context: 72 C methylated in CpG context: 14.4% C methylated in CHG context: 1.1% C methylated in CHH context: 1.2% C methylated in unknown context (CN or CHN): 16.3% Bismark completed in 0d 0h 0m 21s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth12_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth12_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-rutgers/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ chr 1 (3259165 bp) chr 2 (3468816 bp) chr 3 (700192 bp) chr 4 (2934407 bp) chr 5 (2430108 bp) chr 6 (2758956 bp) chr 7 (2199593 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/gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth12_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth12_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth12_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth12_R1_001.fastq.gz to Meth12_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth12_R1_001.fastq.gz to Meth12_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth12_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth12_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth12_R2_001.fastq.gz to Meth12_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth12_R2_001.fastq.gz to Meth12_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth12_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth12_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth12_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth12_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth12_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth12_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth12_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:22318:1000_1:N:0:CTCTCGTC+NATAACCT/1 99 692_CT_converted 331729 42 150M = 331765 186 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Meth12_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:22318:1000_1:N:0:CTCTCGTC+NATAACCT/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTTTTATTAATAAAATATTATTATAAATATAATTTTTTAAATTATTAAATAATTTTAAAAAAATATTATATTAAATTAATATAAAAATTTTATTATTTTAATAAATTTTTATATTATTTATTTTTTAAAATAATATAAAAATATTTTT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFF:FFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:22318:1000_2:N:0:CTCTCGTC+NATAACCT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TAAAATTAAAAAATTTAATTTAATAATAAAAAAAATAAAAATATTTTTATATTATTTTAAAAAATAAATAATATAAAAATTTATTAAAATAATAAAATTTTTATATTAATTTAATATAATATTTTTTTAAAATTATTTAATAATTTAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth12_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth12_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:22318:1000_1:N:0:CTCTCGTC+NATAACCT/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTTTTATTAATAAAATATTATTATAAATATAATTTTTTAAATTATTAAATAATTTTAAAAAAATATTATATTAAATTAATATAAAAATTTTATTATTTTAATAAATTTTTATATTATTTATTTTTTAAAATAATATAAAAATATTTTT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFF:FFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:22318:1000_2:N:0:CTCTCGTC+NATAACCT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TAAAATTAAAAAATTTAATTTAATAATAAAAAAAATAAAAATATTTTTATATTATTTTAAAAAATAAATAATATAAAAATTTATTAAAATAATAAAATTTTTATATTAATTTAATATAATATTTTTTTAAAATTATTTAATAATTTAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth12_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth12_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:22318:1000_1:N:0:CTCTCGTC+NATAACCT/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTTTTATTGATGAAGTATTATTATAAGTGTGATTTTTTGAATTATTAAATGATTTTGAAAAAATATTGTGTTGAGTTAATATAGGAATTTTGTTATTTTGGTAAATTTTTATGTTATTTATTTTTTAAGGTGATATGGAAATGTTTTT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFF:FFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:22318:1000_2:N:0:CTCTCGTC+NATAACCT/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAAAATCAAAAAATTCAATTTAATAACAAAAAAAATAAAAACATTTCCATATCACCTTAAAAAATAAATAACATAAAAATTTACCAAAATAACAAAATTCCTATATTAACTCAACACAATATTTTTTCAAAATCATTTAATAATTCAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth12_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth12_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth12_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9411 (94.11%) aligned concordantly 0 times 336 (3.36%) aligned concordantly exactly 1 time 253 (2.53%) aligned concordantly >1 times 5.89% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9409 (94.09%) aligned concordantly 0 times 350 (3.50%) aligned concordantly exactly 1 time 241 (2.41%) aligned concordantly >1 times 5.91% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9461 (94.61%) aligned concordantly 0 times 303 (3.03%) aligned concordantly exactly 1 time 236 (2.36%) aligned concordantly >1 times 5.39% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9466 (94.66%) aligned concordantly 0 times 287 (2.87%) aligned concordantly exactly 1 time 247 (2.47%) aligned concordantly >1 times 5.34% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth12_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth12_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth12_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth12_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 1347 Mapping efficiency: 13.5% Sequence pairs with no alignments under any condition: 8280 Sequence pairs did not map uniquely: 373 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 321 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 357 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 367 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 302 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 80095 Total methylated C's in CpG context: 1698 Total methylated C's in CHG context: 151 Total methylated C's in CHH context: 604 Total methylated C's in Unknown context: 19 Total unmethylated C's in CpG context: 11401 Total unmethylated C's in CHG context: 14161 Total unmethylated C's in CHH context: 52080 Total unmethylated C's in Unknown context: 54 C methylated in CpG context: 13.0% C methylated in CHG context: 1.1% C methylated in CHH context: 1.1% C methylated in unknown context (CN or CHN): 26.0% Bismark completed in 0d 0h 0m 20s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth13_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth13_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-rutgers/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ chr 1 (3259165 bp) chr 2 (3468816 bp) chr 3 (700192 bp) chr 4 (2934407 bp) chr 5 (2430108 bp) chr 6 (2758956 bp) chr 7 (2199593 bp) chr 8 (63180 bp) chr 9 (2265284 bp) chr 10 (2133031 bp) chr 11 (321139 bp) chr 12 (2060969 bp) chr 13 (2130412 bp) chr 14 (1997637 bp) chr 15 (2070015 bp) chr 16 (1944206 bp) chr 17 (2086788 bp) chr 18 (1961032 bp) chr 19 (2784121 bp) chr 20 (1774193 bp) chr 21 (1917492 bp) chr 22 (767896 bp) chr 23 (1953587 bp) chr 24 (1911142 bp) chr 25 (1913817 bp) chr 26 (1804681 bp) chr 27 (1851931 bp) chr 28 (1794943 bp) chr 29 (1682159 bp) chr 30 (1713494 bp) chr 31 (1624384 bp) chr 32 (1703322 bp) chr 33 (1697854 bp) chr 34 (1681457 bp) chr 35 (1704315 bp) chr 36 (1721755 bp) chr 37 (1579056 bp) chr 38 (1642316 bp) chr 39 (1597355 bp) chr 40 (1433356 bp) chr 41 (1582095 bp) chr 42 (1566444 bp) chr 43 (1583760 bp) chr 44 (1653614 bp) chr 45 (1587174 bp) chr 46 (1577616 bp) chr 47 (1582068 bp) chr 48 (1222503 bp) chr 49 (1471897 bp) chr 50 (1542380 bp) chr 51 (1424199 bp) chr 52 (1087915 bp) chr 53 (1509770 bp) chr 54 (1439035 bp) chr 55 (1535113 bp) chr 56 (1467872 bp) chr 57 (1372705 bp) chr 58 (1438549 bp) chr 59 (1557456 bp) chr 60 (1426376 bp) chr 61 (1458472 bp) chr 62 (1445116 bp) chr 63 (1399039 bp) chr 64 (1378723 bp) chr 65 (1416935 bp) chr 66 (1386521 bp) chr 67 (1432112 bp) chr 68 (1392272 bp) chr 69 (1372986 bp) chr 70 (1462355 bp) chr 71 (984453 bp) chr 72 (1297698 bp) chr 73 (1293992 bp) chr 74 (1357986 bp) chr 75 (1318972 bp) chr 76 (1367416 bp) chr 77 (1208092 bp) chr 78 (27441 bp) chr 79 (1327496 bp) chr 80 (1309361 bp) chr 81 (1341618 bp) chr 82 (1346785 bp) chr 83 (1333289 bp) chr 84 (1211459 bp) chr 85 (1283853 bp) chr 86 (1290567 bp) chr 87 (1192965 bp) chr 88 (1291894 bp) chr 89 (1260068 bp) chr 90 (1252728 bp) chr 91 (1271595 bp) chr 92 (1230537 bp) chr 93 (1237625 bp) chr 94 (1187499 bp) chr 95 (85829 bp) chr 96 (1221334 bp) chr 97 (1247042 bp) chr 98 (1216221 bp) chr 99 (1155919 bp) chr 100 (1199322 bp) chr 101 (1184412 bp) chr 102 (1192881 bp) chr 103 (82712 bp) chr 104 (1213056 bp) chr 105 (1209205 bp) chr 106 (1178971 bp) chr 107 (1185100 bp) chr 108 (1138319 bp) chr 109 (1182366 bp) chr 110 (1186349 bp) chr 111 (1196341 bp) chr 112 (1222398 bp) chr 113 (1182707 bp) chr 114 (1166526 bp) chr 115 (1117742 bp) chr 116 (1129122 bp) chr 117 (1155377 bp) chr 118 (1105652 bp) chr 119 (1033356 bp) chr 120 (1125959 bp) chr 121 (1081563 bp) chr 122 (1136263 bp) chr 123 (1129561 bp) chr 124 (1088222 bp) chr 125 (1134195 bp) chr 126 (1122153 bp) chr 127 (1090085 bp) chr 128 (1108877 bp) chr 129 (1069273 bp) chr 130 (81855 bp) chr 131 (1051189 bp) chr 132 (1107173 bp) chr 133 (1100872 bp) chr 134 (1069836 bp) chr 135 (1014124 bp) chr 136 (1077171 bp) chr 137 (1075285 bp) chr 138 (965987 bp) chr 139 (1064949 bp) chr 140 (972370 bp) chr 141 (1092226 bp) chr 142 (1076623 bp) chr 143 (1039113 bp) chr 144 (1056367 bp) chr 145 (1167597 bp) chr 146 (1057422 bp) chr 147 (1036731 bp) chr 148 (490519 bp) chr 149 (1032677 bp) chr 150 (1030587 bp) chr 151 (1016839 bp) chr 152 (890088 bp) chr 153 (923157 bp) chr 154 (1012331 bp) chr 155 (1019570 bp) chr 156 (1026825 bp) chr 157 (105424 bp) chr 158 (969835 bp) chr 159 (1008575 bp) chr 160 (1017669 bp) chr 161 (998356 bp) chr 162 (1111810 bp) chr 163 (980324 bp) chr 164 (997944 bp) chr 165 (976097 bp) chr 166 (22261 bp) chr 167 (997443 bp) chr 168 (986231 bp) chr 169 (990085 bp) chr 170 (1026670 bp) chr 171 (991344 bp) chr 172 (992414 bp) chr 173 (983620 bp) chr 174 (984199 bp) chr 175 (855127 bp) chr 176 (974323 bp) chr 177 (771339 bp) chr 178 (909260 bp) chr 179 (966406 bp) chr 180 (979842 bp) chr 181 (947336 bp) chr 182 (961385 bp) chr 183 (956308 bp) chr 184 (949239 bp) chr 185 (939692 bp) chr 186 (939789 bp) chr 187 (904200 bp) chr 188 (945029 bp) chr 189 (951017 bp) chr 190 (941056 bp) chr 191 (950888 bp) chr 192 (920528 bp) chr 193 (924255 bp) chr 194 (925527 bp) chr 195 (948614 bp) chr 196 (885086 bp) chr 197 (863395 bp) chr 198 (949918 bp) chr 199 (927707 bp) chr 200 (767822 bp) chr 201 (76909 bp) chr 202 (950804 bp) chr 203 (876878 bp) chr 204 (925796 bp) chr 205 (927892 bp) chr 206 (908160 bp) chr 207 (906368 bp) chr 208 (829028 bp) chr 209 (474500 bp) chr 210 (900838 bp) chr 211 (488148 bp) chr 212 (903133 bp) chr 213 (905973 bp) chr 214 (862381 bp) chr 215 (902488 bp) chr 216 (900429 bp) chr 217 (883740 bp) chr 218 (894159 bp) chr 219 (900962 bp) chr 220 (921685 bp) chr 221 (962841 bp) chr 222 (881253 bp) chr 223 (880620 bp) chr 224 (26450 bp) chr 225 (877809 bp) chr 226 (873061 bp) chr 227 (856881 bp) chr 228 (860785 bp) chr 229 (878544 bp) chr 230 (145843 bp) chr 231 (871373 bp) chr 232 (884402 bp) chr 233 (881045 bp) chr 234 (830625 bp) chr 235 (869322 bp) chr 236 (851209 bp) chr 237 (280319 bp) chr 238 (843214 bp) chr 239 (853732 bp) chr 240 (856228 bp) chr 241 (845687 bp) chr 242 (839849 bp) chr 243 (807631 bp) chr 244 (836614 bp) chr 245 (838179 bp) chr 246 (819456 bp) chr 247 (829478 bp) chr 248 (823142 bp) chr 249 (829420 bp) chr 250 (827916 bp) chr 251 (746714 bp) chr 252 (825672 bp) chr 253 (833882 bp) chr 254 (828776 bp) chr 255 (798220 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/gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth13_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth13_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth13_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth13_R1_001.fastq.gz to Meth13_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth13_R1_001.fastq.gz to Meth13_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth13_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth13_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth13_R2_001.fastq.gz to Meth13_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth13_R2_001.fastq.gz to Meth13_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth13_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth13_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth13_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth13_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth13_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth13_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth13_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21974:1000_1:N:0:CCAAGTCT+NAGGATGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNGTTGTGTTGAAGTATGGTATGTGTTGTAAAATATTTTGGTTGGTTTTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTTAAGTTTATTTTGTATGTTGTTTTTTGTTTGAAAAAAGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG ,#,:FFFFF,:FFF:FF:,FFFFF:FFFFFFFFFF,,F::FFFFFFFFF:FFFF::FFF:FF:FFF:FF::FFFFFF:FFFFFF::FFFFFFFFFFFFFF:F,:F,F:F,FF:FFFFFFF,,,,,FF,:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21974:1000_2:N:0:CCAAGTCT+NAGGATGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAAAACCAACCAAAATATTTTACAACACATACCATACTTCAACACAACCAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATTCATCCTTATATATATCTCAATAATCACCATATCATTAAAAAAAATTTTTTTCAAACTATTAACAAC ,FFFF,,FF::FFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFF,FFFFFFF:FFFFFFFF:FF,F::F:FFFFFF,::FFFFF:::FF:FFF:FFFF,FF,F:FF:,F:F,F:,F,FFF:,FFFFFFFFF,F,FF,,,F,,,,,,,,,,,::,, YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth13_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth13_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21974:1000_1:N:0:CCAAGTCT+NAGGATGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNATTATATTAAAATATAATATATATTATAAAATATTTTAATTAATTTCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACCCAAATCTATCTCATATACCATCTTCTACTTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA ,#,:FFFFF,:FFF:FF:,FFFFF:FFFFFFFFFF,,F::FFFFFFFFF:FFFF::FFF:FF:FFF:FF::FFFFFF:FFFFFF::FFFFFFFFFFFFFF:F,:F,F:F,FF:FFFFFFF,,,,,FF,:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21974:1000_2:N:0:CCAAGTCT+NAGGATGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGAAATTAATTAAAATATTTTATAATATATATTATATTTTAATATAATTAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTTATTTTTGTGTATATTTTGGTGGTTGTTGTATTATTAAAAAAAATTTTTTTTAAGTTGTTGATGGT ,FFFF,,FF::FFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFF,FFFFFFF:FFFFFFFF:FF,F::F:FFFFFF,::FFFFF:::FF:FFF:FFFF,FF,F:FF:,F:F,F:,F,FFF:,FFFFFFFFF,F,FF,,,F,,,,,,,,,,,::,, YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth13_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth13_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21974:1000_1:N:0:CCAAGTCT+NAGGATGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNATTATATTAAAATATAATATATATTATAAAATATTTTAATTAATTTCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACCCAAATCTATCTCATATACCATCTTCTACTTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA ,#,:FFFFF,:FFF:FF:,FFFFF:FFFFFFFFFF,,F::FFFFFFFFF:FFFF::FFF:FF:FFF:FF::FFFFFF:FFFFFF::FFFFFFFFFFFFFF:F,:F,F:F,FF:FFFFFFF,,,,,FF,:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21974:1000_2:N:0:CCAAGTCT+NAGGATGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGAAATTAATTAAAATATTTTATAATATATATTATATTTTAATATAATTAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTTATTTTTGTGTATATTTTGGTGGTTGTTGTATTATTAAAAAAAATTTTTTTTAAGTTGTTGATGGT ,FFFF,,FF::FFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFF,FFFFFFF:FFFFFFFF:FF,F::F:FFFFFF,::FFFFF:::FF:FFF:FFFF,FF,F:FF:,F:F,F:,F,FFF:,FFFFFFFFF,F,FF,,,F,,,,,,,,,,,::,, YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth13_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth13_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21974:1000_1:N:0:CCAAGTCT+NAGGATGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNGTTGTGTTGAAGTATGGTATGTGTTGTAAAATATTTTGGTTGGTTTTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTTAAGTTTATTTTGTATGTTGTTTTTTGTTTGAAAAAAGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG ,#,:FFFFF,:FFF:FF:,FFFFF:FFFFFFFFFF,,F::FFFFFFFFF:FFFF::FFF:FF:FFF:FF::FFFFFF:FFFFFF::FFFFFFFFFFFFFF:F,:F,F:F,FF:FFFFFFF,,,,,FF,:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21974:1000_2:N:0:CCAAGTCT+NAGGATGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAAAACCAACCAAAATATTTTACAACACATACCATACTTCAACACAACCAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATTCATCCTTATATATATCTCAATAATCACCATATCATTAAAAAAAATTTTTTTCAAACTATTAACAAC ,FFFF,,FF::FFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFF,FFFFFFF:FFFFFFFF:FF,F::F:FFFFFF,::FFFFF:::FF:FFF:FFFF,FF,F:FF:,F:F,F:,F,FFF:,FFFFFFFFF,F,FF,,,F,,,,,,,,,,,::,, YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth13_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth13_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth13_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 8883 (88.83%) aligned concordantly 0 times 575 (5.75%) aligned concordantly exactly 1 time 542 (5.42%) aligned concordantly >1 times 11.17% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 8827 (88.27%) aligned concordantly 0 times 632 (6.32%) aligned concordantly exactly 1 time 541 (5.41%) aligned concordantly >1 times 11.73% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 8860 (88.60%) aligned concordantly 0 times 578 (5.78%) aligned concordantly exactly 1 time 562 (5.62%) aligned concordantly >1 times 11.40% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 8844 (88.44%) aligned concordantly 0 times 603 (6.03%) aligned concordantly exactly 1 time 553 (5.53%) aligned concordantly >1 times 11.56% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth13_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth13_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth13_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth13_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 2579 Mapping efficiency: 25.8% Sequence pairs with no alignments under any condition: 6666 Sequence pairs did not map uniquely: 755 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 661 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 676 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 661 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 581 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 156137 Total methylated C's in CpG context: 3756 Total methylated C's in CHG context: 187 Total methylated C's in CHH context: 585 Total methylated C's in Unknown context: 14 Total unmethylated C's in CpG context: 29366 Total unmethylated C's in CHG context: 27041 Total unmethylated C's in CHH context: 95202 Total unmethylated C's in Unknown context: 70 C methylated in CpG context: 11.3% C methylated in CHG context: 0.7% C methylated in CHH context: 0.6% C methylated in unknown context (CN or CHN): 16.7% Bismark completed in 0d 0h 0m 20s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth14_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth14_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-rutgers/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ chr 1 (3259165 bp) chr 2 (3468816 bp) chr 3 (700192 bp) chr 4 (2934407 bp) chr 5 (2430108 bp) chr 6 (2758956 bp) chr 7 (2199593 bp) chr 8 (63180 bp) chr 9 (2265284 bp) chr 10 (2133031 bp) chr 11 (321139 bp) chr 12 (2060969 bp) chr 13 (2130412 bp) chr 14 (1997637 bp) chr 15 (2070015 bp) chr 16 (1944206 bp) chr 17 (2086788 bp) chr 18 (1961032 bp) chr 19 (2784121 bp) chr 20 (1774193 bp) chr 21 (1917492 bp) chr 22 (767896 bp) chr 23 (1953587 bp) chr 24 (1911142 bp) chr 25 (1913817 bp) chr 26 (1804681 bp) chr 27 (1851931 bp) chr 28 (1794943 bp) chr 29 (1682159 bp) chr 30 (1713494 bp) chr 31 (1624384 bp) chr 32 (1703322 bp) chr 33 (1697854 bp) chr 34 (1681457 bp) chr 35 (1704315 bp) chr 36 (1721755 bp) chr 37 (1579056 bp) chr 38 (1642316 bp) chr 39 (1597355 bp) chr 40 (1433356 bp) chr 41 (1582095 bp) chr 42 (1566444 bp) chr 43 (1583760 bp) chr 44 (1653614 bp) chr 45 (1587174 bp) chr 46 (1577616 bp) chr 47 (1582068 bp) chr 48 (1222503 bp) chr 49 (1471897 bp) chr 50 (1542380 bp) chr 51 (1424199 bp) chr 52 (1087915 bp) chr 53 (1509770 bp) chr 54 (1439035 bp) chr 55 (1535113 bp) chr 56 (1467872 bp) chr 57 (1372705 bp) chr 58 (1438549 bp) chr 59 (1557456 bp) chr 60 (1426376 bp) chr 61 (1458472 bp) chr 62 (1445116 bp) chr 63 (1399039 bp) chr 64 (1378723 bp) chr 65 (1416935 bp) chr 66 (1386521 bp) chr 67 (1432112 bp) chr 68 (1392272 bp) chr 69 (1372986 bp) chr 70 (1462355 bp) chr 71 (984453 bp) chr 72 (1297698 bp) chr 73 (1293992 bp) chr 74 (1357986 bp) chr 75 (1318972 bp) chr 76 (1367416 bp) chr 77 (1208092 bp) chr 78 (27441 bp) chr 79 (1327496 bp) chr 80 (1309361 bp) chr 81 (1341618 bp) chr 82 (1346785 bp) chr 83 (1333289 bp) chr 84 (1211459 bp) chr 85 (1283853 bp) chr 86 (1290567 bp) chr 87 (1192965 bp) chr 88 (1291894 bp) chr 89 (1260068 bp) chr 90 (1252728 bp) chr 91 (1271595 bp) chr 92 (1230537 bp) chr 93 (1237625 bp) chr 94 (1187499 bp) chr 95 (85829 bp) chr 96 (1221334 bp) chr 97 (1247042 bp) chr 98 (1216221 bp) chr 99 (1155919 bp) chr 100 (1199322 bp) chr 101 (1184412 bp) chr 102 (1192881 bp) chr 103 (82712 bp) chr 104 (1213056 bp) chr 105 (1209205 bp) chr 106 (1178971 bp) chr 107 (1185100 bp) 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2855 (30900 bp) chr 2856 (30754 bp) chr 2857 (30740 bp) chr 2858 (45403 bp) chr 2859 (30540 bp) chr 2860 (30179 bp) chr 2861 (26988 bp) chr 2862 (30429 bp) chr 2863 (30078 bp) chr 2864 (29810 bp) chr 2865 (29931 bp) chr 2866 (29833 bp) chr 2867 (29774 bp) chr 2868 (29741 bp) chr 2869 (29692 bp) chr 2870 (29641 bp) chr 2871 (29627 bp) chr 2872 (29648 bp) chr 2873 (29629 bp) chr 2874 (29406 bp) chr 2875 (29371 bp) chr 2876 (29432 bp) chr 2877 (29257 bp) chr 2878 (29130 bp) chr 2879 (28981 bp) chr 2880 (28981 bp) chr 2881 (28711 bp) chr 2882 (28661 bp) chr 2883 (28602 bp) chr 2884 (28540 bp) chr 2885 (28450 bp) chr 2886 (28436 bp) chr 2887 (28370 bp) chr 2888 (28393 bp) chr 2889 (28216 bp) chr 2890 (28176 bp) chr 2891 (15915 bp) chr 2892 (28098 bp) chr 2893 (27262 bp) chr 2894 (28107 bp) chr 2895 (28043 bp) chr 2896 (27915 bp) chr 2897 (27868 bp) chr 2898 (27812 bp) chr 2899 (27753 bp) chr 2900 (27736 bp) chr 2901 (27653 bp) chr 2902 (27424 bp) chr 2903 (27534 bp) chr 2904 (27445 bp) chr 2905 (27478 bp) chr 2906 (27406 bp) chr 2907 (27382 bp) chr 2908 (27361 bp) chr 2909 (27302 bp) chr 2910 (27265 bp) chr 2911 (27190 bp) chr 2912 (27166 bp) chr 2913 (27009 bp) chr 2914 (26835 bp) chr 2915 (26846 bp) chr 2916 (26770 bp) chr 2917 (29091 bp) chr 2918 (26684 bp) chr 2919 (26626 bp) chr 2920 (26507 bp) chr 2921 (26491 bp) chr 2922 (26348 bp) chr 2923 (26319 bp) chr 2924 (26211 bp) chr 2925 (26263 bp) chr 2926 (26260 bp) chr 2927 (25984 bp) chr 2928 (25973 bp) chr 2929 (25829 bp) chr 2930 (25849 bp) chr 2931 (25687 bp) chr 2932 (25576 bp) chr 2933 (25597 bp) chr 2934 (25546 bp) chr 2935 (25518 bp) chr 2936 (28007 bp) chr 2937 (25504 bp) chr 2938 (25100 bp) chr 2939 (25312 bp) chr 2940 (25255 bp) chr 2941 (25250 bp) chr 2942 (25294 bp) chr 2943 (25289 bp) chr 2944 (25208 bp) chr 2945 (25280 bp) chr 2946 (25155 bp) chr 2947 (25302 bp) chr 2948 (25068 bp) chr 2949 (25012 bp) chr 2950 (25006 bp) chr 2951 (25055 bp) chr 2952 (24917 bp) chr 2953 (24821 bp) chr 2954 (24739 bp) chr 2955 (24790 bp) chr 2956 (24789 bp) chr 2957 (24749 bp) chr 2958 (22684 bp) chr 2959 (24761 bp) chr 2960 (24536 bp) chr 2961 (24478 bp) chr 2962 (24482 bp) chr 2963 (24359 bp) chr 2964 (24378 bp) chr 2965 (24330 bp) chr 2966 (24293 bp) chr 2967 (24291 bp) chr 2968 (24243 bp) chr 2969 (24178 bp) chr 2970 (24139 bp) chr 2971 (24105 bp) chr 2972 (24012 bp) chr 2973 (23966 bp) chr 2974 (23833 bp) chr 2975 (23789 bp) chr 2976 (23679 bp) chr 2977 (23552 bp) chr 2978 (23582 bp) chr 2979 (23794 bp) chr 2980 (23459 bp) chr 2981 (25111 bp) chr 2982 (23540 bp) chr 2983 (23411 bp) chr 2984 (23411 bp) chr 2985 (23330 bp) chr 2986 (23229 bp) chr 2987 (23419 bp) chr 2988 (23135 bp) chr 2989 (23013 bp) chr 2990 (23012 bp) chr 2991 (40996 bp) chr 2992 (22997 bp) chr 2993 (23586 bp) chr 2994 (22841 bp) chr 2995 (22705 bp) chr 2996 (22602 bp) chr 2997 (22500 bp) chr 2998 (22441 bp) chr 2999 (22498 bp) chr 3000 (22428 bp) chr 3001 (22402 bp) chr 3002 (22366 bp) chr 3003 (22320 bp) chr 3004 (22354 bp) chr 3005 (22398 bp) chr 3006 (22239 bp) chr 3007 (22223 bp) chr 3008 (22192 bp) chr 3009 (21962 bp) chr 3010 (21929 bp) chr 3011 (21769 bp) chr 3012 (21743 bp) chr 3013 (21724 bp) chr 3014 (21688 bp) chr 3015 (21590 bp) chr 3016 (21462 bp) chr 3017 (21378 bp) chr 3018 (21398 bp) chr 3019 (21226 bp) chr 3020 (21142 bp) chr 3021 (21088 bp) chr 3022 (21029 bp) chr 3023 (20978 bp) chr 3024 (20979 bp) chr 3025 (20911 bp) chr 3026 (20532 bp) chr 3027 (20919 bp) chr 3028 (20817 bp) chr 3029 (20652 bp) chr 3030 (20462 bp) chr 3031 (20791 bp) chr 3032 (20632 bp) chr 3033 (20540 bp) chr 3034 (20616 bp) chr 3035 (20535 bp) chr 3036 (20509 bp) chr 3037 (20511 bp) chr 3038 (20399 bp) chr 3039 (20437 bp) chr 3040 (20260 bp) chr 3041 (20304 bp) chr 3042 (20219 bp) chr 3043 (20160 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth14_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth14_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth14_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth14_R1_001.fastq.gz to Meth14_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth14_R1_001.fastq.gz to Meth14_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth14_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth14_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth14_R2_001.fastq.gz to Meth14_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth14_R2_001.fastq.gz to Meth14_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth14_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth14_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth14_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth14_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth14_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth14_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth14_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21468:1000_1:N:0:TTAGACTC+NGAAGCAG/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNATATATAAAAATAATTTTTGAATTTTAAATTTTAATATTGTAATTGTTTATTATTGATTTTTATATAAAAATAAATAAAAAATTGAATTAAATTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTTAGATTTATTTTGTATGT F#FFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21468:1000_2:N:0:TTAGACTC+NGAAGCAG/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAATTTAATTCAATTTTTTATTTATTTTTATATAAAAATCAATAATAAACAATTACAATATTAAAATTTAAAATTCAAAAATTATTTTTATATATCAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATCTACTTCCATATAAATCTCA FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF::FFFFF:FFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF::FF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF,FFFFF:FFFFFFF,FFF,FFFFFFFFF,FF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth14_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth14_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21468:1000_1:N:0:TTAGACTC+NGAAGCAG/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNATATATAAAAATAATTTTCAAACTCTAAACCTTAATACCATAACCACTTATTATCAATCTTCACATAAAAATAAACAAAAAACCAAATCAAACCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACTTAAACTCATCTCATATAC F#FFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21468:1000_2:N:0:TTAGACTC+NGAAGCAG/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGGTTTGATTTGGTTTTTTGTTTATTTTTATGTGAAGATTGATAATAAGTGGTTATGGTATTAAGGTTTAGAGTTTGAAAATTATTTTTATATATTGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTTGTTTTTGTGTAGATTTTG FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF::FFFFF:FFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF::FF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF,FFFFF:FFFFFFF,FFF,FFFFFFFFF,FF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth14_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth14_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21468:1000_1:N:0:TTAGACTC+NGAAGCAG/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNATATATAAAAATAATTTTCAAACTCTAAACCTTAATACCATAACCACTTATTATCAATCTTCACATAAAAATAAACAAAAAACCAAATCAAACCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACTTAAACTCATCTCATATAC F#FFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21468:1000_2:N:0:TTAGACTC+NGAAGCAG/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGGTTTGATTTGGTTTTTTGTTTATTTTTATGTGAAGATTGATAATAAGTGGTTATGGTATTAAGGTTTAGAGTTTGAAAATTATTTTTATATATTGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTTGTTTTTGTGTAGATTTTG FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF::FFFFF:FFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF::FF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF,FFFFF:FFFFFFF,FFF,FFFFFFFFF,FF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth14_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth14_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21468:1000_1:N:0:TTAGACTC+NGAAGCAG/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNATATATAAAAATAATTTTTGAATTTTAAATTTTAATATTGTAATTGTTTATTATTGATTTTTATATAAAAATAAATAAAAAATTGAATTAAATTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTTAGATTTATTTTGTATGT F#FFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21468:1000_2:N:0:TTAGACTC+NGAAGCAG/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAATTTAATTCAATTTTTTATTTATTTTTATATAAAAATCAATAATAAACAATTACAATATTAAAATTTAAAATTCAAAAATTATTTTTATATATCAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATCTACTTCCATATAAATCTCA FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF::FFFFF:FFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF::FF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF,FFFFF:FFFFFFF,FFF,FFFFFFFFF,FF YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth14_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth14_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth14_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 8985 (89.85%) aligned concordantly 0 times 505 (5.05%) aligned concordantly exactly 1 time 510 (5.10%) aligned concordantly >1 times 10.15% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9102 (91.02%) aligned concordantly 0 times 448 (4.48%) aligned concordantly exactly 1 time 450 (4.50%) aligned concordantly >1 times 8.98% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9016 (90.16%) aligned concordantly 0 times 483 (4.83%) aligned concordantly exactly 1 time 501 (5.01%) aligned concordantly >1 times 9.84% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9103 (91.03%) aligned concordantly 0 times 454 (4.54%) aligned concordantly exactly 1 time 443 (4.43%) aligned concordantly >1 times 8.97% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth14_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth14_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth14_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth14_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 2115 Mapping efficiency: 21.1% Sequence pairs with no alignments under any condition: 7241 Sequence pairs did not map uniquely: 644 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 547 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 479 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 520 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 569 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 128633 Total methylated C's in CpG context: 3205 Total methylated C's in CHG context: 190 Total methylated C's in CHH context: 477 Total methylated C's in Unknown context: 23 Total unmethylated C's in CpG context: 25554 Total unmethylated C's in CHG context: 22464 Total unmethylated C's in CHH context: 76743 Total unmethylated C's in Unknown context: 107 C methylated in CpG context: 11.1% C methylated in CHG context: 0.8% C methylated in CHH context: 0.6% C methylated in unknown context (CN or CHN): 17.7% Bismark completed in 0d 0h 0m 20s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth15_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth15_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-rutgers/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ chr 1 (3259165 bp) chr 2 (3468816 bp) chr 3 (700192 bp) chr 4 (2934407 bp) chr 5 (2430108 bp) chr 6 (2758956 bp) chr 7 (2199593 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well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth15_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth15_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth15_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth15_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth15_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth15_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth15_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21793:1000_1:N:0:GGCTTAAG+NCGTGACC/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNGGATTTGGTGTTATATGTGGGTTGAGTTTGTTGGTTTATTATTTTGTATTGAGAGGTTTTTTTTATGTATTTTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATGGTTTAAGATTTTGTATGTTGTTTTTTGTTTGAAAAAAGG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,,, YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21793:1000_2:N:0:GGCTTAAG+NCGTGACC/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAAAATACATAAAAAAAACCTCTCAATACAAAATAATAAACCAACAAACTCAACCCACATATAACACCAAATCCCAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATAATCACAAATATAAATCTCAAAAATCACCAACTCATTAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,FFF:FF,FF,,F:FF,,,F:F,,:,, YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth15_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth15_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21793:1000_1:N:0:GGCTTAAG+NCGTGACC/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNAAATTTAATATTATATATAAATTAAATTTATTAATTTATTATTTTATATTAAAAAATTTTTTTTATATATTTCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACAACTTAAAATCTCATATACCATCTTCTACTTAAAAAAAAA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,,, YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21793:1000_2:N:0:GGCTTAAG+NCGTGACC/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGAAATATATAAAAAAAATTTTTTAATATAAAATAATAAATTAATAAATTTAATTTATATATAATATTAAATTTTAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTGGTTATGAGTGTAGATTTTGGGGGTTGTTGGTTTATTAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,FFF:FF,FF,,F:FF,,,F:F,,:,, YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth15_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth15_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21793:1000_1:N:0:GGCTTAAG+NCGTGACC/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNAAATTTAATATTATATATAAATTAAATTTATTAATTTATTATTTTATATTAAAAAATTTTTTTTATATATTTCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACAACTTAAAATCTCATATACCATCTTCTACTTAAAAAAAAA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,,, YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21793:1000_2:N:0:GGCTTAAG+NCGTGACC/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGAAATATATAAAAAAAATTTTTTAATATAAAATAATAAATTAATAAATTTAATTTATATATAATATTAAATTTTAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTGGTTATGAGTGTAGATTTTGGGGGTTGTTGGTTTATTAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,FFF:FF,FF,,F:FF,,,F:F,,:,, YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth15_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth15_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21793:1000_1:N:0:GGCTTAAG+NCGTGACC/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNGGATTTGGTGTTATATGTGGGTTGAGTTTGTTGGTTTATTATTTTGTATTGAGAGGTTTTTTTTATGTATTTTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATGGTTTAAGATTTTGTATGTTGTTTTTTGTTTGAAAAAAGG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,,, YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21793:1000_2:N:0:GGCTTAAG+NCGTGACC/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAAAATACATAAAAAAAACCTCTCAATACAAAATAATAAACCAACAAACTCAACCCACATATAACACCAAATCCCAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATAATCACAAATATAAATCTCAAAAATCACCAACTCATTAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,FFF:FF,FF,,F:FF,,,F:F,,:,, YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth15_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth15_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth15_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 8948 (89.48%) aligned concordantly 0 times 541 (5.41%) aligned concordantly exactly 1 time 511 (5.11%) aligned concordantly >1 times 10.52% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9130 (91.30%) aligned concordantly 0 times 400 (4.00%) aligned concordantly exactly 1 time 470 (4.70%) aligned concordantly >1 times 8.70% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9122 (91.22%) aligned concordantly 0 times 437 (4.37%) aligned concordantly exactly 1 time 441 (4.41%) aligned concordantly >1 times 8.78% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 8963 (89.63%) aligned concordantly 0 times 531 (5.31%) aligned concordantly exactly 1 time 506 (5.06%) aligned concordantly >1 times 10.37% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth15_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth15_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth15_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth15_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 2123 Mapping efficiency: 21.2% Sequence pairs with no alignments under any condition: 7227 Sequence pairs did not map uniquely: 650 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 491 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 584 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 588 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 460 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 128547 Total methylated C's in CpG context: 3057 Total methylated C's in CHG context: 314 Total methylated C's in CHH context: 912 Total methylated C's in Unknown context: 16 Total unmethylated C's in CpG context: 23971 Total unmethylated C's in CHG context: 21916 Total unmethylated C's in CHH context: 78377 Total unmethylated C's in Unknown context: 78 C methylated in CpG context: 11.3% C methylated in CHG context: 1.4% C methylated in CHH context: 1.2% C methylated in unknown context (CN or CHN): 17.0% Bismark completed in 0d 0h 0m 21s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth16_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth16_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-rutgers/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ chr 1 (3259165 bp) chr 2 (3468816 bp) chr 3 (700192 bp) chr 4 (2934407 bp) chr 5 (2430108 bp) chr 6 (2758956 bp) chr 7 (2199593 bp) chr 8 (63180 bp) chr 9 (2265284 bp) chr 10 (2133031 bp) chr 11 (321139 bp) chr 12 (2060969 bp) chr 13 (2130412 bp) chr 14 (1997637 bp) chr 15 (2070015 bp) chr 16 (1944206 bp) chr 17 (2086788 bp) chr 18 (1961032 bp) chr 19 (2784121 bp) chr 20 (1774193 bp) chr 21 (1917492 bp) chr 22 (767896 bp) chr 23 (1953587 bp) chr 24 (1911142 bp) chr 25 (1913817 bp) chr 26 (1804681 bp) chr 27 (1851931 bp) chr 28 (1794943 bp) chr 29 (1682159 bp) chr 30 (1713494 bp) chr 31 (1624384 bp) chr 32 (1703322 bp) chr 33 (1697854 bp) chr 34 (1681457 bp) chr 35 (1704315 bp) chr 36 (1721755 bp) chr 37 (1579056 bp) chr 38 (1642316 bp) chr 39 (1597355 bp) chr 40 (1433356 bp) chr 41 (1582095 bp) chr 42 (1566444 bp) chr 43 (1583760 bp) chr 44 (1653614 bp) chr 45 (1587174 bp) chr 46 (1577616 bp) chr 47 (1582068 bp) chr 48 (1222503 bp) chr 49 (1471897 bp) chr 50 (1542380 bp) chr 51 (1424199 bp) chr 52 (1087915 bp) chr 53 (1509770 bp) chr 54 (1439035 bp) chr 55 (1535113 bp) chr 56 (1467872 bp) chr 57 (1372705 bp) chr 58 (1438549 bp) chr 59 (1557456 bp) chr 60 (1426376 bp) chr 61 (1458472 bp) chr 62 (1445116 bp) chr 63 (1399039 bp) chr 64 (1378723 bp) chr 65 (1416935 bp) chr 66 (1386521 bp) chr 67 (1432112 bp) chr 68 (1392272 bp) chr 69 (1372986 bp) chr 70 (1462355 bp) chr 71 (984453 bp) chr 72 (1297698 bp) chr 73 (1293992 bp) chr 74 (1357986 bp) chr 75 (1318972 bp) chr 76 (1367416 bp) chr 77 (1208092 bp) chr 78 (27441 bp) chr 79 (1327496 bp) chr 80 (1309361 bp) chr 81 (1341618 bp) chr 82 (1346785 bp) chr 83 (1333289 bp) chr 84 (1211459 bp) chr 85 (1283853 bp) chr 86 (1290567 bp) chr 87 (1192965 bp) chr 88 (1291894 bp) chr 89 (1260068 bp) chr 90 (1252728 bp) chr 91 (1271595 bp) chr 92 (1230537 bp) chr 93 (1237625 bp) chr 94 (1187499 bp) chr 95 (85829 bp) chr 96 (1221334 bp) chr 97 (1247042 bp) chr 98 (1216221 bp) chr 99 (1155919 bp) chr 100 (1199322 bp) chr 101 (1184412 bp) chr 102 (1192881 bp) chr 103 (82712 bp) chr 104 (1213056 bp) chr 105 (1209205 bp) chr 106 (1178971 bp) chr 107 (1185100 bp) chr 108 (1138319 bp) chr 109 (1182366 bp) chr 110 (1186349 bp) chr 111 (1196341 bp) chr 112 (1222398 bp) chr 113 (1182707 bp) chr 114 (1166526 bp) chr 115 (1117742 bp) chr 116 (1129122 bp) chr 117 (1155377 bp) chr 118 (1105652 bp) chr 119 (1033356 bp) chr 120 (1125959 bp) chr 121 (1081563 bp) chr 122 (1136263 bp) chr 123 (1129561 bp) chr 124 (1088222 bp) chr 125 (1134195 bp) chr 126 (1122153 bp) chr 127 (1090085 bp) chr 128 (1108877 bp) chr 129 (1069273 bp) chr 130 (81855 bp) chr 131 (1051189 bp) chr 132 (1107173 bp) chr 133 (1100872 bp) chr 134 (1069836 bp) chr 135 (1014124 bp) chr 136 (1077171 bp) chr 137 (1075285 bp) chr 138 (965987 bp) chr 139 (1064949 bp) chr 140 (972370 bp) chr 141 (1092226 bp) chr 142 (1076623 bp) chr 143 (1039113 bp) chr 144 (1056367 bp) chr 145 (1167597 bp) chr 146 (1057422 bp) chr 147 (1036731 bp) chr 148 (490519 bp) chr 149 (1032677 bp) chr 150 (1030587 bp) chr 151 (1016839 bp) chr 152 (890088 bp) chr 153 (923157 bp) chr 154 (1012331 bp) chr 155 (1019570 bp) chr 156 (1026825 bp) chr 157 (105424 bp) chr 158 (969835 bp) chr 159 (1008575 bp) chr 160 (1017669 bp) chr 161 (998356 bp) chr 162 (1111810 bp) chr 163 (980324 bp) chr 164 (997944 bp) chr 165 (976097 bp) chr 166 (22261 bp) chr 167 (997443 bp) chr 168 (986231 bp) chr 169 (990085 bp) chr 170 (1026670 bp) chr 171 (991344 bp) chr 172 (992414 bp) chr 173 (983620 bp) chr 174 (984199 bp) chr 175 (855127 bp) chr 176 (974323 bp) chr 177 (771339 bp) chr 178 (909260 bp) chr 179 (966406 bp) chr 180 (979842 bp) chr 181 (947336 bp) chr 182 (961385 bp) chr 183 (956308 bp) chr 184 (949239 bp) chr 185 (939692 bp) chr 186 (939789 bp) chr 187 (904200 bp) chr 188 (945029 bp) chr 189 (951017 bp) chr 190 (941056 bp) chr 191 (950888 bp) chr 192 (920528 bp) chr 193 (924255 bp) chr 194 (925527 bp) chr 195 (948614 bp) chr 196 (885086 bp) chr 197 (863395 bp) chr 198 (949918 bp) chr 199 (927707 bp) chr 200 (767822 bp) chr 201 (76909 bp) chr 202 (950804 bp) chr 203 (876878 bp) chr 204 (925796 bp) chr 205 (927892 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2955 (24790 bp) chr 2956 (24789 bp) chr 2957 (24749 bp) chr 2958 (22684 bp) chr 2959 (24761 bp) chr 2960 (24536 bp) chr 2961 (24478 bp) chr 2962 (24482 bp) chr 2963 (24359 bp) chr 2964 (24378 bp) chr 2965 (24330 bp) chr 2966 (24293 bp) chr 2967 (24291 bp) chr 2968 (24243 bp) chr 2969 (24178 bp) chr 2970 (24139 bp) chr 2971 (24105 bp) chr 2972 (24012 bp) chr 2973 (23966 bp) chr 2974 (23833 bp) chr 2975 (23789 bp) chr 2976 (23679 bp) chr 2977 (23552 bp) chr 2978 (23582 bp) chr 2979 (23794 bp) chr 2980 (23459 bp) chr 2981 (25111 bp) chr 2982 (23540 bp) chr 2983 (23411 bp) chr 2984 (23411 bp) chr 2985 (23330 bp) chr 2986 (23229 bp) chr 2987 (23419 bp) chr 2988 (23135 bp) chr 2989 (23013 bp) chr 2990 (23012 bp) chr 2991 (40996 bp) chr 2992 (22997 bp) chr 2993 (23586 bp) chr 2994 (22841 bp) chr 2995 (22705 bp) chr 2996 (22602 bp) chr 2997 (22500 bp) chr 2998 (22441 bp) chr 2999 (22498 bp) chr 3000 (22428 bp) chr 3001 (22402 bp) chr 3002 (22366 bp) chr 3003 (22320 bp) chr 3004 (22354 bp) chr 3005 (22398 bp) chr 3006 (22239 bp) chr 3007 (22223 bp) chr 3008 (22192 bp) chr 3009 (21962 bp) chr 3010 (21929 bp) chr 3011 (21769 bp) chr 3012 (21743 bp) chr 3013 (21724 bp) chr 3014 (21688 bp) chr 3015 (21590 bp) chr 3016 (21462 bp) chr 3017 (21378 bp) chr 3018 (21398 bp) chr 3019 (21226 bp) chr 3020 (21142 bp) chr 3021 (21088 bp) chr 3022 (21029 bp) chr 3023 (20978 bp) chr 3024 (20979 bp) chr 3025 (20911 bp) chr 3026 (20532 bp) chr 3027 (20919 bp) chr 3028 (20817 bp) chr 3029 (20652 bp) chr 3030 (20462 bp) chr 3031 (20791 bp) chr 3032 (20632 bp) chr 3033 (20540 bp) chr 3034 (20616 bp) chr 3035 (20535 bp) chr 3036 (20509 bp) chr 3037 (20511 bp) chr 3038 (20399 bp) chr 3039 (20437 bp) chr 3040 (20260 bp) chr 3041 (20304 bp) chr 3042 (20219 bp) chr 3043 (20160 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth16_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth16_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth16_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth16_R1_001.fastq.gz to Meth16_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth16_R1_001.fastq.gz to Meth16_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth16_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth16_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth16_R2_001.fastq.gz to Meth16_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth16_R2_001.fastq.gz to Meth16_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth16_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth16_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth16_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth16_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth16_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth16_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth16_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21414:1000_1:N:0:AATCCGGA+NTACAGTT/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTGGTTTTTTTGATTTTAATAATAATTATTATTATAATTATTATATTTAAAATTAATTAAATAAAAAATTTAAAATTTTAAATATAAAATAAATATAAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATAATTTGGAATTGTGTATT F#FFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FF,,,, YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21414:1000_2:N:0:AATCCGGA+NTACAGTT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TATATTTATTTTATATTTAAAATTTTAAATTTTTTATTTAATTAATTTTAAATATAATAATTATAATAATAATTATTATTAAAATCAAAAAAACCATAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATAACTATAAATATAAAACTC FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF::FFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,:FF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth16_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth16_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21414:1000_1:N:0:AATCCGGA+NTACAGTT/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNCAACTCTTCCAATCTCAACAACAATCATCATTACAACCATCACACTTAAAATTAACTAAATAAAAAATTCAAAATCTTAAATACAAAACAAACACAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACAATCCAAAATCACATATT F#FFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FF,,,, YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21414:1000_2:N:0:AATCCGGA+NTACAGTT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGTGTTTGTTTTGTATTTAAGATTTTGAATTTTTTATTTAGTTAATTTTAAGTGTGATGGTTGTAATGATGATTGTTGTTGAGATTGGAAGAGTTGTGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTAATTGTAGGTGTAGAGTTT FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF::FFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,:FF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth16_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth16_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21414:1000_1:N:0:AATCCGGA+NTACAGTT/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNCAACTCTTCCAATCTCAACAACAATCATCATTACAACCATCACACTTAAAATTAACTAAATAAAAAATTCAAAATCTTAAATACAAAACAAACACAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACAATCCAAAATCACATATT F#FFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FF,,,, YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21414:1000_2:N:0:AATCCGGA+NTACAGTT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGTGTTTGTTTTGTATTTAAGATTTTGAATTTTTTATTTAGTTAATTTTAAGTGTGATGGTTGTAATGATGATTGTTGTTGAGATTGGAAGAGTTGTGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTAATTGTAGGTGTAGAGTTT FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF::FFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,:FF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth16_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth16_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21414:1000_1:N:0:AATCCGGA+NTACAGTT/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTGGTTTTTTTGATTTTAATAATAATTATTATTATAATTATTATATTTAAAATTAATTAAATAAAAAATTTAAAATTTTAAATATAAAATAAATATAAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATAATTTGGAATTGTGTATT F#FFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FF,,,, YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21414:1000_2:N:0:AATCCGGA+NTACAGTT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TATATTTATTTTATATTTAAAATTTTAAATTTTTTATTTAATTAATTTTAAATATAATAATTATAATAATAATTATTATTAAAATCAAAAAAACCATAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATAACTATAAATATAAAACTC FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF::FFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,:FF YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth16_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth16_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth16_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9636 (96.36%) aligned concordantly 0 times 206 (2.06%) aligned concordantly exactly 1 time 158 (1.58%) aligned concordantly >1 times 3.64% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9686 (96.86%) aligned concordantly 0 times 155 (1.55%) aligned concordantly exactly 1 time 159 (1.59%) aligned concordantly >1 times 3.14% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9695 (96.95%) aligned concordantly 0 times 169 (1.69%) aligned concordantly exactly 1 time 136 (1.36%) aligned concordantly >1 times 3.05% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9714 (97.14%) aligned concordantly 0 times 138 (1.38%) aligned concordantly exactly 1 time 148 (1.48%) aligned concordantly >1 times 2.86% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth16_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth16_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth16_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth16_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 679 Mapping efficiency: 6.8% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9070 Sequence pairs did not map uniquely: 251 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 151 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 201 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 150 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 177 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 41221 Total methylated C's in CpG context: 984 Total methylated C's in CHG context: 92 Total methylated C's in CHH context: 278 Total methylated C's in Unknown context: 12 Total unmethylated C's in CpG context: 5905 Total unmethylated C's in CHG context: 7219 Total unmethylated C's in CHH context: 26743 Total unmethylated C's in Unknown context: 42 C methylated in CpG context: 14.3% C methylated in CHG context: 1.3% C methylated in CHH context: 1.0% C methylated in unknown context (CN or CHN): 22.2% Bismark completed in 0d 0h 0m 20s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth17_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth17_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-rutgers/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ chr 1 (3259165 bp) chr 2 (3468816 bp) chr 3 (700192 bp) chr 4 (2934407 bp) chr 5 (2430108 bp) chr 6 (2758956 bp) chr 7 (2199593 bp) chr 8 (63180 bp) chr 9 (2265284 bp) chr 10 (2133031 bp) chr 11 (321139 bp) chr 12 (2060969 bp) chr 13 (2130412 bp) chr 14 (1997637 bp) chr 15 (2070015 bp) chr 16 (1944206 bp) chr 17 (2086788 bp) chr 18 (1961032 bp) chr 19 (2784121 bp) chr 20 (1774193 bp) chr 21 (1917492 bp) chr 22 (767896 bp) chr 23 (1953587 bp) chr 24 (1911142 bp) chr 25 (1913817 bp) chr 26 (1804681 bp) chr 27 (1851931 bp) chr 28 (1794943 bp) chr 29 (1682159 bp) chr 30 (1713494 bp) chr 31 (1624384 bp) chr 32 (1703322 bp) chr 33 (1697854 bp) chr 34 (1681457 bp) chr 35 (1704315 bp) chr 36 (1721755 bp) chr 37 (1579056 bp) chr 38 (1642316 bp) chr 39 (1597355 bp) chr 40 (1433356 bp) chr 41 (1582095 bp) chr 42 (1566444 bp) chr 43 (1583760 bp) chr 44 (1653614 bp) chr 45 (1587174 bp) chr 46 (1577616 bp) chr 47 (1582068 bp) chr 48 (1222503 bp) chr 49 (1471897 bp) chr 50 (1542380 bp) chr 51 (1424199 bp) chr 52 (1087915 bp) chr 53 (1509770 bp) chr 54 (1439035 bp) chr 55 (1535113 bp) chr 56 (1467872 bp) chr 57 (1372705 bp) 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/gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth17_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth17_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth17_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth17_R1_001.fastq.gz to Meth17_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth17_R1_001.fastq.gz to Meth17_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth17_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth17_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth17_R2_001.fastq.gz to Meth17_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth17_R2_001.fastq.gz to Meth17_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth17_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth17_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth17_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth17_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth17_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth17_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth17_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21323:1000_1:N:0:TAATACAG+NTATTCAC/1 77 * 0 0 * * 0 0 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Meth17_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21323:1000_1:N:0:TAATACAG+NTATTCAC/1 77 * 0 0 * * 0 0 ANCATAATCTACCTAACCATAAATAAAAACCAAATTAAACAACACCATAACAAACTAAATACTTACTCCCCCTTACAAAAACAATACCTTATAATTATCCAAAACAAACATCAAATCACACAAATCCCACTCCACTTTCATAACCATTAC F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21323:1000_2:N:0:TAATACAG+NTATTCAC/2 141 * 0 0 * * 0 0 GTTTGTTTTTTTGATTTTTTTTTGTTGTAAGTGGTGTTTGAAAGAGTTTAGTAAGAATTGGTTGATTTTTGTGGTTTTGGTTTGTTTTTAATGGAGATGAGTTATTGTTTTGATGAGGTGGTTGTAATGGTTATGAAAGTGGAGTGGGAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:F::FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFF::FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFF: YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth17_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth17_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21323:1000_1:N:0:TAATACAG+NTATTCAC/1 77 * 0 0 * * 0 0 ANTATAGTTTGTTTGGTTATGAATAGAGGTTAGATTAAGTGGTATTATAGTAAATTGGGTGTTTGTTTTTTTTTGTAGAAATAGTATTTTGTAGTTGTTTGGAATGGATATTAGGTTATGTAGGTTTTGTTTTGTTTTTGTGGTTATTGT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21323:1000_2:N:0:TAATACAG+NTATTCAC/2 141 * 0 0 * * 0 0 ATCTACTCTTCCAATCTCTTTTTACCACAAACAATACTTAAAAAAACCCAACAAAAACTAATTAATTTTCATAACTCCAATTTATCCTTAATAAAAATAAACCATCACTCCAACAAAATAATCACAATAACCACAAAAACAAAACAAAAC FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:F::FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFF::FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFF: YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth17_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth17_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth17_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9698 (96.98%) aligned concordantly 0 times 165 (1.65%) aligned concordantly exactly 1 time 137 (1.37%) aligned concordantly >1 times 3.02% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9683 (96.83%) aligned concordantly 0 times 158 (1.58%) aligned concordantly exactly 1 time 159 (1.59%) aligned concordantly >1 times 3.17% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9711 (97.11%) aligned concordantly 0 times 159 (1.59%) aligned concordantly exactly 1 time 130 (1.30%) aligned concordantly >1 times 2.89% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9735 (97.35%) aligned concordantly 0 times 138 (1.38%) aligned concordantly exactly 1 time 127 (1.27%) aligned concordantly >1 times 2.65% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth17_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth17_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth17_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth17_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 651 Mapping efficiency: 6.5% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9137 Sequence pairs did not map uniquely: 212 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 145 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 170 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 161 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 175 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 39443 Total methylated C's in CpG context: 935 Total methylated C's in CHG context: 66 Total methylated C's in CHH context: 275 Total methylated C's in Unknown context: 13 Total unmethylated C's in CpG context: 6048 Total unmethylated C's in CHG context: 6842 Total unmethylated C's in CHH context: 25277 Total unmethylated C's in Unknown context: 41 C methylated in CpG context: 13.4% C methylated in CHG context: 1.0% C methylated in CHH context: 1.1% C methylated in unknown context (CN or CHN): 24.1% Bismark completed in 0d 0h 0m 20s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth18_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth18_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-rutgers/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ chr 1 (3259165 bp) chr 2 (3468816 bp) chr 3 (700192 bp) chr 4 (2934407 bp) chr 5 (2430108 bp) chr 6 (2758956 bp) chr 7 (2199593 bp) chr 8 (63180 bp) chr 9 (2265284 bp) chr 10 (2133031 bp) chr 11 (321139 bp) chr 12 (2060969 bp) chr 13 (2130412 bp) chr 14 (1997637 bp) chr 15 (2070015 bp) chr 16 (1944206 bp) chr 17 (2086788 bp) chr 18 (1961032 bp) chr 19 (2784121 bp) chr 20 (1774193 bp) chr 21 (1917492 bp) chr 22 (767896 bp) chr 23 (1953587 bp) chr 24 (1911142 bp) chr 25 (1913817 bp) chr 26 (1804681 bp) chr 27 (1851931 bp) chr 28 (1794943 bp) chr 29 (1682159 bp) chr 30 (1713494 bp) chr 31 (1624384 bp) chr 32 (1703322 bp) chr 33 (1697854 bp) chr 34 (1681457 bp) chr 35 (1704315 bp) chr 36 (1721755 bp) chr 37 (1579056 bp) chr 38 (1642316 bp) chr 39 (1597355 bp) chr 40 (1433356 bp) chr 41 (1582095 bp) chr 42 (1566444 bp) chr 43 (1583760 bp) chr 44 (1653614 bp) chr 45 (1587174 bp) chr 46 (1577616 bp) chr 47 (1582068 bp) chr 48 (1222503 bp) chr 49 (1471897 bp) chr 50 (1542380 bp) chr 51 (1424199 bp) chr 52 (1087915 bp) chr 53 (1509770 bp) chr 54 (1439035 bp) chr 55 (1535113 bp) chr 56 (1467872 bp) chr 57 (1372705 bp) chr 58 (1438549 bp) chr 59 (1557456 bp) chr 60 (1426376 bp) chr 61 (1458472 bp) chr 62 (1445116 bp) chr 63 (1399039 bp) chr 64 (1378723 bp) chr 65 (1416935 bp) chr 66 (1386521 bp) chr 67 (1432112 bp) chr 68 (1392272 bp) chr 69 (1372986 bp) chr 70 (1462355 bp) chr 71 (984453 bp) chr 72 (1297698 bp) chr 73 (1293992 bp) chr 74 (1357986 bp) chr 75 (1318972 bp) chr 76 (1367416 bp) chr 77 (1208092 bp) chr 78 (27441 bp) chr 79 (1327496 bp) chr 80 (1309361 bp) chr 81 (1341618 bp) chr 82 (1346785 bp) chr 83 (1333289 bp) chr 84 (1211459 bp) chr 85 (1283853 bp) chr 86 (1290567 bp) chr 87 (1192965 bp) chr 88 (1291894 bp) chr 89 (1260068 bp) chr 90 (1252728 bp) chr 91 (1271595 bp) chr 92 (1230537 bp) chr 93 (1237625 bp) chr 94 (1187499 bp) chr 95 (85829 bp) chr 96 (1221334 bp) chr 97 (1247042 bp) chr 98 (1216221 bp) chr 99 (1155919 bp) chr 100 (1199322 bp) chr 101 (1184412 bp) chr 102 (1192881 bp) chr 103 (82712 bp) chr 104 (1213056 bp) chr 105 (1209205 bp) chr 106 (1178971 bp) chr 107 (1185100 bp) chr 108 (1138319 bp) chr 109 (1182366 bp) chr 110 (1186349 bp) chr 111 (1196341 bp) chr 112 (1222398 bp) chr 113 (1182707 bp) chr 114 (1166526 bp) chr 115 (1117742 bp) chr 116 (1129122 bp) chr 117 (1155377 bp) chr 118 (1105652 bp) chr 119 (1033356 bp) chr 120 (1125959 bp) chr 121 (1081563 bp) chr 122 (1136263 bp) chr 123 (1129561 bp) chr 124 (1088222 bp) chr 125 (1134195 bp) chr 126 (1122153 bp) chr 127 (1090085 bp) chr 128 (1108877 bp) chr 129 (1069273 bp) chr 130 (81855 bp) chr 131 (1051189 bp) chr 132 (1107173 bp) chr 133 (1100872 bp) chr 134 (1069836 bp) chr 135 (1014124 bp) chr 136 (1077171 bp) chr 137 (1075285 bp) chr 138 (965987 bp) chr 139 (1064949 bp) chr 140 (972370 bp) chr 141 (1092226 bp) chr 142 (1076623 bp) chr 143 (1039113 bp) chr 144 (1056367 bp) chr 145 (1167597 bp) chr 146 (1057422 bp) chr 147 (1036731 bp) chr 148 (490519 bp) chr 149 (1032677 bp) chr 150 (1030587 bp) chr 151 (1016839 bp) chr 152 (890088 bp) chr 153 (923157 bp) chr 154 (1012331 bp) chr 155 (1019570 bp) chr 156 (1026825 bp) chr 157 (105424 bp) chr 158 (969835 bp) chr 159 (1008575 bp) chr 160 (1017669 bp) chr 161 (998356 bp) chr 162 (1111810 bp) chr 163 (980324 bp) chr 164 (997944 bp) chr 165 (976097 bp) chr 166 (22261 bp) chr 167 (997443 bp) chr 168 (986231 bp) chr 169 (990085 bp) chr 170 (1026670 bp) chr 171 (991344 bp) chr 172 (992414 bp) chr 173 (983620 bp) chr 174 (984199 bp) chr 175 (855127 bp) chr 176 (974323 bp) chr 177 (771339 bp) chr 178 (909260 bp) chr 179 (966406 bp) chr 180 (979842 bp) chr 181 (947336 bp) chr 182 (961385 bp) chr 183 (956308 bp) chr 184 (949239 bp) chr 185 (939692 bp) chr 186 (939789 bp) chr 187 (904200 bp) chr 188 (945029 bp) chr 189 (951017 bp) chr 190 (941056 bp) chr 191 (950888 bp) chr 192 (920528 bp) chr 193 (924255 bp) chr 194 (925527 bp) chr 195 (948614 bp) chr 196 (885086 bp) chr 197 (863395 bp) chr 198 (949918 bp) chr 199 (927707 bp) chr 200 (767822 bp) chr 201 (76909 bp) chr 202 (950804 bp) chr 203 (876878 bp) chr 204 (925796 bp) chr 205 (927892 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/gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth18_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth18_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth18_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth18_R1_001.fastq.gz to Meth18_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth18_R1_001.fastq.gz to Meth18_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth18_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth18_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth18_R2_001.fastq.gz to Meth18_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth18_R2_001.fastq.gz to Meth18_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth18_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth18_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth18_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth18_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth18_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth18_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth18_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21395:1000_1:N:0:CGGCGTGA+NCGCCTGT/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTTAATATTTTATAATAATATTTTTTTTTAATTAAATATATTAAATAATTAATAAATTTAATATATTATTTATATATATATAATAATTATTTTTTAATAATATTATTTAAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTGGTG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21395:1000_2:N:0:CGGCGTGA+NCGCCTGT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TAAATAATATTATTAAAAAATAATTATTATATATATATAAATAATATATTAAATTTATTAATTATTTAATATATTTAATTAAAAAAAAATATTATTATAAAATATTAAAAAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATACAAAC FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFF:F YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth18_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth18_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21395:1000_1:N:0:CGGCGTGA+NCGCCTGT/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNTCTAATACTTTACAACAACACCTCTTCCCAACCAAACACACCAAATAATTAATAAACTTAACATATCATTTACACATACATAATAATTACTTTTCAACAACATTACCCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACCAACA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21395:1000_2:N:0:CGGCGTGA+NCGCCTGT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGGGTAATGTTGTTGAAAAGTAATTATTATGTATGTGTAAATGATATGTTAAGTTTATTAATTATTTGGTGTGTTTGGTTGGGAAGAGGTGTTGTTGTAAAGTATTAGAGGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTATAGGT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFF:F YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth18_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth18_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21395:1000_1:N:0:CGGCGTGA+NCGCCTGT/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNTCTAATACTTTACAACAACACCTCTTCCCAACCAAACACACCAAATAATTAATAAACTTAACATATCATTTACACATACATAATAATTACTTTTCAACAACATTACCCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACCAACA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21395:1000_2:N:0:CGGCGTGA+NCGCCTGT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGGGTAATGTTGTTGAAAAGTAATTATTATGTATGTGTAAATGATATGTTAAGTTTATTAATTATTTGGTGTGTTTGGTTGGGAAGAGGTGTTGTTGTAAAGTATTAGAGGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTATAGGT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFF:F YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth18_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth18_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21395:1000_1:N:0:CGGCGTGA+NCGCCTGT/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTTAATATTTTATAATAATATTTTTTTTTAATTAAATATATTAAATAATTAATAAATTTAATATATTATTTATATATATATAATAATTATTTTTTAATAATATTATTTAAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTGGTG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21395:1000_2:N:0:CGGCGTGA+NCGCCTGT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TAAATAATATTATTAAAAAATAATTATTATATATATATAAATAATATATTAAATTTATTAATTATTTAATATATTTAATTAAAAAAAAATATTATTATAAAATATTAAAAAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATACAAAC FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFF:F YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth18_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth18_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth18_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9709 (97.09%) aligned concordantly 0 times 152 (1.52%) aligned concordantly exactly 1 time 139 (1.39%) aligned concordantly >1 times 2.91% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9686 (96.86%) aligned concordantly 0 times 151 (1.51%) aligned concordantly exactly 1 time 163 (1.63%) aligned concordantly >1 times 3.14% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9687 (96.87%) aligned concordantly 0 times 159 (1.59%) aligned concordantly exactly 1 time 154 (1.54%) aligned concordantly >1 times 3.13% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9703 (97.03%) aligned concordantly 0 times 161 (1.61%) aligned concordantly exactly 1 time 136 (1.36%) aligned concordantly >1 times 2.97% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth18_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth18_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth18_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth18_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 692 Mapping efficiency: 6.9% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9093 Sequence pairs did not map uniquely: 215 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 182 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 179 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 170 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 161 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 41941 Total methylated C's in CpG context: 1533 Total methylated C's in CHG context: 92 Total methylated C's in CHH context: 300 Total methylated C's in Unknown context: 6 Total unmethylated C's in CpG context: 5812 Total unmethylated C's in CHG context: 7308 Total unmethylated C's in CHH context: 26896 Total unmethylated C's in Unknown context: 23 C methylated in CpG context: 20.9% C methylated in CHG context: 1.2% C methylated in CHH context: 1.1% C methylated in unknown context (CN or CHN): 20.7% Bismark completed in 0d 0h 0m 19s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth2_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth2_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-rutgers/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ chr 1 (3259165 bp) chr 2 (3468816 bp) chr 3 (700192 bp) chr 4 (2934407 bp) chr 5 (2430108 bp) chr 6 (2758956 bp) chr 7 (2199593 bp) chr 8 (63180 bp) chr 9 (2265284 bp) chr 10 (2133031 bp) chr 11 (321139 bp) chr 12 (2060969 bp) chr 13 (2130412 bp) chr 14 (1997637 bp) chr 15 (2070015 bp) chr 16 (1944206 bp) chr 17 (2086788 bp) chr 18 (1961032 bp) chr 19 (2784121 bp) chr 20 (1774193 bp) chr 21 (1917492 bp) chr 22 (767896 bp) chr 23 (1953587 bp) chr 24 (1911142 bp) chr 25 (1913817 bp) chr 26 (1804681 bp) chr 27 (1851931 bp) chr 28 (1794943 bp) chr 29 (1682159 bp) chr 30 (1713494 bp) chr 31 (1624384 bp) chr 32 (1703322 bp) chr 33 (1697854 bp) chr 34 (1681457 bp) chr 35 (1704315 bp) chr 36 (1721755 bp) chr 37 (1579056 bp) chr 38 (1642316 bp) chr 39 (1597355 bp) chr 40 (1433356 bp) chr 41 (1582095 bp) chr 42 (1566444 bp) chr 43 (1583760 bp) chr 44 (1653614 bp) chr 45 (1587174 bp) chr 46 (1577616 bp) chr 47 (1582068 bp) chr 48 (1222503 bp) chr 49 (1471897 bp) chr 50 (1542380 bp) chr 51 (1424199 bp) chr 52 (1087915 bp) chr 53 (1509770 bp) chr 54 (1439035 bp) chr 55 (1535113 bp) chr 56 (1467872 bp) chr 57 (1372705 bp) chr 58 (1438549 bp) chr 59 (1557456 bp) chr 60 (1426376 bp) chr 61 (1458472 bp) chr 62 (1445116 bp) chr 63 (1399039 bp) chr 64 (1378723 bp) chr 65 (1416935 bp) chr 66 (1386521 bp) chr 67 (1432112 bp) chr 68 (1392272 bp) chr 69 (1372986 bp) chr 70 (1462355 bp) chr 71 (984453 bp) chr 72 (1297698 bp) chr 73 (1293992 bp) chr 74 (1357986 bp) chr 75 (1318972 bp) chr 76 (1367416 bp) chr 77 (1208092 bp) chr 78 (27441 bp) chr 79 (1327496 bp) chr 80 (1309361 bp) chr 81 (1341618 bp) chr 82 (1346785 bp) chr 83 (1333289 bp) chr 84 (1211459 bp) chr 85 (1283853 bp) chr 86 (1290567 bp) chr 87 (1192965 bp) chr 88 (1291894 bp) chr 89 (1260068 bp) chr 90 (1252728 bp) chr 91 (1271595 bp) chr 92 (1230537 bp) chr 93 (1237625 bp) chr 94 (1187499 bp) chr 95 (85829 bp) chr 96 (1221334 bp) chr 97 (1247042 bp) chr 98 (1216221 bp) chr 99 (1155919 bp) chr 100 (1199322 bp) chr 101 (1184412 bp) chr 102 (1192881 bp) chr 103 (82712 bp) chr 104 (1213056 bp) chr 105 (1209205 bp) chr 106 (1178971 bp) chr 107 (1185100 bp) 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2855 (30900 bp) chr 2856 (30754 bp) chr 2857 (30740 bp) chr 2858 (45403 bp) chr 2859 (30540 bp) chr 2860 (30179 bp) chr 2861 (26988 bp) chr 2862 (30429 bp) chr 2863 (30078 bp) chr 2864 (29810 bp) chr 2865 (29931 bp) chr 2866 (29833 bp) chr 2867 (29774 bp) chr 2868 (29741 bp) chr 2869 (29692 bp) chr 2870 (29641 bp) chr 2871 (29627 bp) chr 2872 (29648 bp) chr 2873 (29629 bp) chr 2874 (29406 bp) chr 2875 (29371 bp) chr 2876 (29432 bp) chr 2877 (29257 bp) chr 2878 (29130 bp) chr 2879 (28981 bp) chr 2880 (28981 bp) chr 2881 (28711 bp) chr 2882 (28661 bp) chr 2883 (28602 bp) chr 2884 (28540 bp) chr 2885 (28450 bp) chr 2886 (28436 bp) chr 2887 (28370 bp) chr 2888 (28393 bp) chr 2889 (28216 bp) chr 2890 (28176 bp) chr 2891 (15915 bp) chr 2892 (28098 bp) chr 2893 (27262 bp) chr 2894 (28107 bp) chr 2895 (28043 bp) chr 2896 (27915 bp) chr 2897 (27868 bp) chr 2898 (27812 bp) chr 2899 (27753 bp) chr 2900 (27736 bp) chr 2901 (27653 bp) chr 2902 (27424 bp) chr 2903 (27534 bp) chr 2904 (27445 bp) chr 2905 (27478 bp) chr 2906 (27406 bp) chr 2907 (27382 bp) chr 2908 (27361 bp) chr 2909 (27302 bp) chr 2910 (27265 bp) chr 2911 (27190 bp) chr 2912 (27166 bp) chr 2913 (27009 bp) chr 2914 (26835 bp) chr 2915 (26846 bp) chr 2916 (26770 bp) chr 2917 (29091 bp) chr 2918 (26684 bp) chr 2919 (26626 bp) chr 2920 (26507 bp) chr 2921 (26491 bp) chr 2922 (26348 bp) chr 2923 (26319 bp) chr 2924 (26211 bp) chr 2925 (26263 bp) chr 2926 (26260 bp) chr 2927 (25984 bp) chr 2928 (25973 bp) chr 2929 (25829 bp) chr 2930 (25849 bp) chr 2931 (25687 bp) chr 2932 (25576 bp) chr 2933 (25597 bp) chr 2934 (25546 bp) chr 2935 (25518 bp) chr 2936 (28007 bp) chr 2937 (25504 bp) chr 2938 (25100 bp) chr 2939 (25312 bp) chr 2940 (25255 bp) chr 2941 (25250 bp) chr 2942 (25294 bp) chr 2943 (25289 bp) chr 2944 (25208 bp) chr 2945 (25280 bp) chr 2946 (25155 bp) chr 2947 (25302 bp) chr 2948 (25068 bp) chr 2949 (25012 bp) chr 2950 (25006 bp) chr 2951 (25055 bp) chr 2952 (24917 bp) chr 2953 (24821 bp) chr 2954 (24739 bp) chr 2955 (24790 bp) chr 2956 (24789 bp) chr 2957 (24749 bp) chr 2958 (22684 bp) chr 2959 (24761 bp) chr 2960 (24536 bp) chr 2961 (24478 bp) chr 2962 (24482 bp) chr 2963 (24359 bp) chr 2964 (24378 bp) chr 2965 (24330 bp) chr 2966 (24293 bp) chr 2967 (24291 bp) chr 2968 (24243 bp) chr 2969 (24178 bp) chr 2970 (24139 bp) chr 2971 (24105 bp) chr 2972 (24012 bp) chr 2973 (23966 bp) chr 2974 (23833 bp) chr 2975 (23789 bp) chr 2976 (23679 bp) chr 2977 (23552 bp) chr 2978 (23582 bp) chr 2979 (23794 bp) chr 2980 (23459 bp) chr 2981 (25111 bp) chr 2982 (23540 bp) chr 2983 (23411 bp) chr 2984 (23411 bp) chr 2985 (23330 bp) chr 2986 (23229 bp) chr 2987 (23419 bp) chr 2988 (23135 bp) chr 2989 (23013 bp) chr 2990 (23012 bp) chr 2991 (40996 bp) chr 2992 (22997 bp) chr 2993 (23586 bp) chr 2994 (22841 bp) chr 2995 (22705 bp) chr 2996 (22602 bp) chr 2997 (22500 bp) chr 2998 (22441 bp) chr 2999 (22498 bp) chr 3000 (22428 bp) chr 3001 (22402 bp) chr 3002 (22366 bp) chr 3003 (22320 bp) chr 3004 (22354 bp) chr 3005 (22398 bp) chr 3006 (22239 bp) chr 3007 (22223 bp) chr 3008 (22192 bp) chr 3009 (21962 bp) chr 3010 (21929 bp) chr 3011 (21769 bp) chr 3012 (21743 bp) chr 3013 (21724 bp) chr 3014 (21688 bp) chr 3015 (21590 bp) chr 3016 (21462 bp) chr 3017 (21378 bp) chr 3018 (21398 bp) chr 3019 (21226 bp) chr 3020 (21142 bp) chr 3021 (21088 bp) chr 3022 (21029 bp) chr 3023 (20978 bp) chr 3024 (20979 bp) chr 3025 (20911 bp) chr 3026 (20532 bp) chr 3027 (20919 bp) chr 3028 (20817 bp) chr 3029 (20652 bp) chr 3030 (20462 bp) chr 3031 (20791 bp) chr 3032 (20632 bp) chr 3033 (20540 bp) chr 3034 (20616 bp) chr 3035 (20535 bp) chr 3036 (20509 bp) chr 3037 (20511 bp) chr 3038 (20399 bp) chr 3039 (20437 bp) chr 3040 (20260 bp) chr 3041 (20304 bp) chr 3042 (20219 bp) chr 3043 (20160 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth2_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth2_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth2_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth2_R1_001.fastq.gz to Meth2_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth2_R1_001.fastq.gz to Meth2_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth2_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth2_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth2_R2_001.fastq.gz to Meth2_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth2_R2_001.fastq.gz to Meth2_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth2_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth2_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth2_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth2_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth2_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth2_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth2_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21540:1000_1:N:0:TTATAACC+NATATCGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTAATTATTTTTGTTTTAGTAAAGTAATTGGTTAGATAATAAGTAGTGTATTGTGGAAGTAAGGTGAAGTATTTTTATTGAGAATTTGATTGTATTTTTTTATTTTTAAGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTTAT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21540:1000_2:N:0:TTATAACC+NATATCGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 CTTAAAAATAAAAAAATACAATCAAATTCTCAATAAAAATACTTCACCTTACTTCCACAATACACTACTTATTATCTAACCAATTACTTTACTAAAACAAAAATAATTAAAAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATTCAAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF, YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth2_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth2_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21540:1000_1:N:0:TTATAACC+NATATCGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNCCAATTACTTTTATTTTAATAAAATAATTAATTAAATAATAAATAATATATTATAAAAATAAAATAAAATATTTTTATTAAAAATTTAATTATATTTTTTTATTTTTAAAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACTTAT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21540:1000_2:N:0:TTATAACC+NATATCGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 TTTAAAAATAAAAAAATATAATTAAATTTTTAATAAAAATATTTTATTTTATTTTTATAATATATTATTTATTATTTAATTAATTATTTTATTAAAATAAAAGTAATTGGAAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTTGAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF, YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth2_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth2_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21540:1000_1:N:0:TTATAACC+NATATCGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNCCAATTACTTTTATTTTAATAAAATAATTAATTAAATAATAAATAATATATTATAAAAATAAAATAAAATATTTTTATTAAAAATTTAATTATATTTTTTTATTTTTAAAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACTTAT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21540:1000_2:N:0:TTATAACC+NATATCGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 TTTAAAAATAAAAAAATATAATTAAATTTTTAATAAAAATATTTTATTTTATTTTTATAATATATTATTTATTATTTAATTAATTATTTTATTAAAATAAAAGTAATTGGAAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTTGAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF, YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth2_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth2_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21540:1000_1:N:0:TTATAACC+NATATCGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTAATTATTTTTGTTTTAGTAAAGTAATTGGTTAGATAATAAGTAGTGTATTGTGGAAGTAAGGTGAAGTATTTTTATTGAGAATTTGATTGTATTTTTTTATTTTTAAGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTTAT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21540:1000_2:N:0:TTATAACC+NATATCGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 CTTAAAAATAAAAAAATACAATCAAATTCTCAATAAAAATACTTCACCTTACTTCCACAATACACTACTTATTATCTAACCAATTACTTTACTAAAACAAAAATAATTAAAAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATTCAAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF, YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth2_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth2_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth2_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9998 (99.98%) aligned concordantly 0 times 0 (0.00%) aligned concordantly exactly 1 time 2 (0.02%) aligned concordantly >1 times 0.02% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9995 (99.95%) aligned concordantly 0 times 0 (0.00%) aligned concordantly exactly 1 time 5 (0.05%) aligned concordantly >1 times 0.05% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9992 (99.92%) aligned concordantly 0 times 2 (0.02%) aligned concordantly exactly 1 time 6 (0.06%) aligned concordantly >1 times 0.08% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9998 (99.98%) aligned concordantly 0 times 1 (0.01%) aligned concordantly exactly 1 time 1 (0.01%) aligned concordantly >1 times 0.02% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth2_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth2_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth2_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth2_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 6 Mapping efficiency: 0.1% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9990 Sequence pairs did not map uniquely: 4 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 0 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 4 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 1 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 1 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 399 Total methylated C's in CpG context: 2 Total methylated C's in CHG context: 0 Total methylated C's in CHH context: 6 Total methylated C's in Unknown context: 0 Total unmethylated C's in CpG context: 34 Total unmethylated C's in CHG context: 80 Total unmethylated C's in CHH context: 277 Total unmethylated C's in Unknown context: 0 C methylated in CpG context: 5.6% C methylated in CHG context: 0.0% C methylated in CHH context: 2.1% Can't determine percentage of methylated Cs in unknown context (CN or CHN) if value was 0 Bismark completed in 0d 0h 0m 20s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth3_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth3_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-rutgers/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ chr 1 (3259165 bp) chr 2 (3468816 bp) chr 3 (700192 bp) chr 4 (2934407 bp) chr 5 (2430108 bp) chr 6 (2758956 bp) chr 7 (2199593 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/gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth3_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth3_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth3_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth3_R1_001.fastq.gz to Meth3_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth3_R1_001.fastq.gz to Meth3_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth3_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth3_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth3_R2_001.fastq.gz to Meth3_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth3_R2_001.fastq.gz to Meth3_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth3_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth3_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth3_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth3_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth3_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth3_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth3_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21377:1000_1:N:0:GGACTTGG+NGCAGACG/1 77 * 0 0 * * 0 0 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500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21377:1000_1:N:0:GGACTTGG+NGCAGACG/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTAAAATATCTAAAACAAACAAATTAAAAACCATTAAATAAAAACTTACAAACCCAATAAACTAAATTTTCTCATCAATAAAACTAACTTAAACAACTACTACTATTACCAAATCACATACACAAAATCAACAAACATATTTTAAAAA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,F,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21377:1000_2:N:0:GGACTTGG+NGCAGACG/2 141 * 0 0 * * 0 0 GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth3_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth3_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21377:1000_1:N:0:GGACTTGG+NGCAGACG/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTAAAATATCTAAAACAAACAAATTAAAAACCATTAAATAAAAACTTACAAACCCAATAAACTAAATTTTCTCATCAATAAAACTAACTTAAACAACTACTACTATTACCAAATCACATACACAAAATCAACAAACATATTTTAAAAA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,F,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21377:1000_2:N:0:GGACTTGG+NGCAGACG/2 141 * 0 0 * * 0 0 GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth3_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth3_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21377:1000_1:N:0:GGACTTGG+NGCAGACG/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTAAAATATTTAAAATAAATAAATTAAAAATTATTAAATAAAAATTTATAAATTTAATAAATTAAATTTTTTTATTAATAAAATTAATTTAAATAATTATTATTATTATTAAATTATATATATAAAATTAATAAATATATTTTAAAAA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,F,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21377:1000_2:N:0:GGACTTGG+NGCAGACG/2 141 * 0 0 * * 0 0 AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth3_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth3_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth3_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9993 (99.93%) aligned concordantly 0 times 1 (0.01%) aligned concordantly exactly 1 time 6 (0.06%) aligned concordantly >1 times 0.07% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9996 (99.96%) aligned concordantly 0 times 1 (0.01%) aligned concordantly exactly 1 time 3 (0.03%) aligned concordantly >1 times 0.04% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9993 (99.93%) aligned concordantly 0 times 0 (0.00%) aligned concordantly exactly 1 time 7 (0.07%) aligned concordantly >1 times 0.07% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9996 (99.96%) aligned concordantly 0 times 1 (0.01%) aligned concordantly exactly 1 time 3 (0.03%) aligned concordantly >1 times 0.04% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth3_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth3_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth3_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth3_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 6 Mapping efficiency: 0.1% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9989 Sequence pairs did not map uniquely: 5 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 0 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 1 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 3 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 2 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 308 Total methylated C's in CpG context: 7 Total methylated C's in CHG context: 0 Total methylated C's in CHH context: 0 Total methylated C's in Unknown context: 0 Total unmethylated C's in CpG context: 54 Total unmethylated C's in CHG context: 71 Total unmethylated C's in CHH context: 176 Total unmethylated C's in Unknown context: 0 C methylated in CpG context: 11.5% C methylated in CHG context: 0.0% C methylated in CHH context: 0.0% Can't determine percentage of methylated Cs in unknown context (CN or CHN) if value was 0 Bismark completed in 0d 0h 0m 20s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth4_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth4_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-rutgers/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ chr 1 (3259165 bp) chr 2 (3468816 bp) chr 3 (700192 bp) chr 4 (2934407 bp) chr 5 (2430108 bp) chr 6 (2758956 bp) chr 7 (2199593 bp) chr 8 (63180 bp) chr 9 (2265284 bp) chr 10 (2133031 bp) chr 11 (321139 bp) chr 12 (2060969 bp) chr 13 (2130412 bp) chr 14 (1997637 bp) chr 15 (2070015 bp) chr 16 (1944206 bp) chr 17 (2086788 bp) chr 18 (1961032 bp) chr 19 (2784121 bp) chr 20 (1774193 bp) chr 21 (1917492 bp) chr 22 (767896 bp) chr 23 (1953587 bp) chr 24 (1911142 bp) chr 25 (1913817 bp) chr 26 (1804681 bp) chr 27 (1851931 bp) chr 28 (1794943 bp) chr 29 (1682159 bp) chr 30 (1713494 bp) chr 31 (1624384 bp) chr 32 (1703322 bp) chr 33 (1697854 bp) chr 34 (1681457 bp) chr 35 (1704315 bp) chr 36 (1721755 bp) chr 37 (1579056 bp) chr 38 (1642316 bp) chr 39 (1597355 bp) chr 40 (1433356 bp) chr 41 (1582095 bp) chr 42 (1566444 bp) chr 43 (1583760 bp) chr 44 (1653614 bp) chr 45 (1587174 bp) chr 46 (1577616 bp) chr 47 (1582068 bp) chr 48 (1222503 bp) chr 49 (1471897 bp) chr 50 (1542380 bp) chr 51 (1424199 bp) chr 52 (1087915 bp) chr 53 (1509770 bp) chr 54 (1439035 bp) chr 55 (1535113 bp) chr 56 (1467872 bp) chr 57 (1372705 bp) chr 58 (1438549 bp) chr 59 (1557456 bp) chr 60 (1426376 bp) chr 61 (1458472 bp) chr 62 (1445116 bp) chr 63 (1399039 bp) chr 64 (1378723 bp) chr 65 (1416935 bp) chr 66 (1386521 bp) chr 67 (1432112 bp) chr 68 (1392272 bp) chr 69 (1372986 bp) chr 70 (1462355 bp) chr 71 (984453 bp) chr 72 (1297698 bp) chr 73 (1293992 bp) chr 74 (1357986 bp) chr 75 (1318972 bp) chr 76 (1367416 bp) chr 77 (1208092 bp) chr 78 (27441 bp) chr 79 (1327496 bp) chr 80 (1309361 bp) chr 81 (1341618 bp) chr 82 (1346785 bp) chr 83 (1333289 bp) chr 84 (1211459 bp) chr 85 (1283853 bp) chr 86 (1290567 bp) chr 87 (1192965 bp) chr 88 (1291894 bp) chr 89 (1260068 bp) chr 90 (1252728 bp) chr 91 (1271595 bp) chr 92 (1230537 bp) chr 93 (1237625 bp) chr 94 (1187499 bp) chr 95 (85829 bp) chr 96 (1221334 bp) chr 97 (1247042 bp) chr 98 (1216221 bp) chr 99 (1155919 bp) chr 100 (1199322 bp) chr 101 (1184412 bp) chr 102 (1192881 bp) chr 103 (82712 bp) chr 104 (1213056 bp) chr 105 (1209205 bp) chr 106 (1178971 bp) chr 107 (1185100 bp) chr 108 (1138319 bp) chr 109 (1182366 bp) chr 110 (1186349 bp) chr 111 (1196341 bp) chr 112 (1222398 bp) chr 113 (1182707 bp) chr 114 (1166526 bp) chr 115 (1117742 bp) chr 116 (1129122 bp) chr 117 (1155377 bp) chr 118 (1105652 bp) chr 119 (1033356 bp) chr 120 (1125959 bp) chr 121 (1081563 bp) chr 122 (1136263 bp) chr 123 (1129561 bp) chr 124 (1088222 bp) chr 125 (1134195 bp) chr 126 (1122153 bp) chr 127 (1090085 bp) chr 128 (1108877 bp) chr 129 (1069273 bp) chr 130 (81855 bp) chr 131 (1051189 bp) chr 132 (1107173 bp) chr 133 (1100872 bp) chr 134 (1069836 bp) chr 135 (1014124 bp) chr 136 (1077171 bp) chr 137 (1075285 bp) chr 138 (965987 bp) chr 139 (1064949 bp) chr 140 (972370 bp) chr 141 (1092226 bp) chr 142 (1076623 bp) chr 143 (1039113 bp) chr 144 (1056367 bp) chr 145 (1167597 bp) chr 146 (1057422 bp) chr 147 (1036731 bp) chr 148 (490519 bp) chr 149 (1032677 bp) chr 150 (1030587 bp) chr 151 (1016839 bp) chr 152 (890088 bp) chr 153 (923157 bp) chr 154 (1012331 bp) chr 155 (1019570 bp) chr 156 (1026825 bp) chr 157 (105424 bp) chr 158 (969835 bp) chr 159 (1008575 bp) chr 160 (1017669 bp) chr 161 (998356 bp) chr 162 (1111810 bp) chr 163 (980324 bp) chr 164 (997944 bp) chr 165 (976097 bp) chr 166 (22261 bp) chr 167 (997443 bp) chr 168 (986231 bp) chr 169 (990085 bp) chr 170 (1026670 bp) chr 171 (991344 bp) chr 172 (992414 bp) chr 173 (983620 bp) chr 174 (984199 bp) chr 175 (855127 bp) chr 176 (974323 bp) chr 177 (771339 bp) chr 178 (909260 bp) chr 179 (966406 bp) chr 180 (979842 bp) chr 181 (947336 bp) chr 182 (961385 bp) chr 183 (956308 bp) chr 184 (949239 bp) chr 185 (939692 bp) chr 186 (939789 bp) chr 187 (904200 bp) chr 188 (945029 bp) chr 189 (951017 bp) chr 190 (941056 bp) chr 191 (950888 bp) chr 192 (920528 bp) chr 193 (924255 bp) chr 194 (925527 bp) chr 195 (948614 bp) chr 196 (885086 bp) chr 197 (863395 bp) chr 198 (949918 bp) chr 199 (927707 bp) chr 200 (767822 bp) chr 201 (76909 bp) chr 202 (950804 bp) chr 203 (876878 bp) chr 204 (925796 bp) chr 205 (927892 bp) chr 206 (908160 bp) chr 207 (906368 bp) chr 208 (829028 bp) chr 209 (474500 bp) chr 210 (900838 bp) chr 211 (488148 bp) chr 212 (903133 bp) chr 213 (905973 bp) chr 214 (862381 bp) chr 215 (902488 bp) chr 216 (900429 bp) chr 217 (883740 bp) chr 218 (894159 bp) chr 219 (900962 bp) chr 220 (921685 bp) chr 221 (962841 bp) chr 222 (881253 bp) chr 223 (880620 bp) chr 224 (26450 bp) chr 225 (877809 bp) chr 226 (873061 bp) chr 227 (856881 bp) chr 228 (860785 bp) chr 229 (878544 bp) chr 230 (145843 bp) chr 231 (871373 bp) chr 232 (884402 bp) chr 233 (881045 bp) chr 234 (830625 bp) chr 235 (869322 bp) chr 236 (851209 bp) chr 237 (280319 bp) chr 238 (843214 bp) chr 239 (853732 bp) chr 240 (856228 bp) chr 241 (845687 bp) chr 242 (839849 bp) chr 243 (807631 bp) chr 244 (836614 bp) chr 245 (838179 bp) chr 246 (819456 bp) chr 247 (829478 bp) chr 248 (823142 bp) chr 249 (829420 bp) chr 250 (827916 bp) chr 251 (746714 bp) chr 252 (825672 bp) chr 253 (833882 bp) chr 254 (828776 bp) chr 255 (798220 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3005 (22398 bp) chr 3006 (22239 bp) chr 3007 (22223 bp) chr 3008 (22192 bp) chr 3009 (21962 bp) chr 3010 (21929 bp) chr 3011 (21769 bp) chr 3012 (21743 bp) chr 3013 (21724 bp) chr 3014 (21688 bp) chr 3015 (21590 bp) chr 3016 (21462 bp) chr 3017 (21378 bp) chr 3018 (21398 bp) chr 3019 (21226 bp) chr 3020 (21142 bp) chr 3021 (21088 bp) chr 3022 (21029 bp) chr 3023 (20978 bp) chr 3024 (20979 bp) chr 3025 (20911 bp) chr 3026 (20532 bp) chr 3027 (20919 bp) chr 3028 (20817 bp) chr 3029 (20652 bp) chr 3030 (20462 bp) chr 3031 (20791 bp) chr 3032 (20632 bp) chr 3033 (20540 bp) chr 3034 (20616 bp) chr 3035 (20535 bp) chr 3036 (20509 bp) chr 3037 (20511 bp) chr 3038 (20399 bp) chr 3039 (20437 bp) chr 3040 (20260 bp) chr 3041 (20304 bp) chr 3042 (20219 bp) chr 3043 (20160 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth4_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth4_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth4_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth4_R1_001.fastq.gz to Meth4_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth4_R1_001.fastq.gz to Meth4_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth4_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth4_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth4_R2_001.fastq.gz to Meth4_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth4_R2_001.fastq.gz to Meth4_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth4_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth4_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth4_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth4_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth4_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth4_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth4_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21522:1000_1:N:0:AAGTCCAA+NATGAGTA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNGGTGGGGTAGTAATGATTATTGGTGGGTTGATTTTTTTGTTTTTTATTATTGGGTTGATTGGTTATTATTTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATAAGTTTAAATTTTGTATGTTGTTTTATGTTTGAAAAGAGGGG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,:F:,:FF,F,:FF,,FFF,,,,FF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21522:1000_2:N:0:AAGTCCAA+NATGAGTA/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAAATAATAACCAATCAACCCAATAATAAAAAACAAAAAAATCAACCCACCAATAATCATTACTACCCCACCCAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATTACTCATAATATAAATCTCAATAATCACCATATCATTAAAAAC FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,:FFFFF,F,:,: YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth4_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth4_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21522:1000_1:N:0:AAGTCCAA+NATGAGTA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNAATAAAATAATAATAATTATTAATAAATTAATTTTTTTATTTTTTATTATTAAATTAATTAATTATTATTCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACAAATCCAAATCTCATATACCATCTTATACTTAAAAAAAAAAA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,:F:,:FF,F,:FF,,FFF,,,,FF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21522:1000_2:N:0:AAGTCCAA+NATGAGTA/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGAATAATAATTAATTAATTTAATAATAAAAAATAAAAAAATTAATTTATTAATAATTATTATTATTTTATTTAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTATTTATAGTGTAGATTTTGGTGGTTGTTGTATTATTAAGAAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,:FFFFF,F,:,: YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth4_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth4_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21522:1000_1:N:0:AAGTCCAA+NATGAGTA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNAATAAAATAATAATAATTATTAATAAATTAATTTTTTTATTTTTTATTATTAAATTAATTAATTATTATTCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACAAATCCAAATCTCATATACCATCTTATACTTAAAAAAAAAAA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,:F:,:FF,F,:FF,,FFF,,,,FF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21522:1000_2:N:0:AAGTCCAA+NATGAGTA/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGAATAATAATTAATTAATTTAATAATAAAAAATAAAAAAATTAATTTATTAATAATTATTATTATTTTATTTAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTATTTATAGTGTAGATTTTGGTGGTTGTTGTATTATTAAGAAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,:FFFFF,F,:,: YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth4_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth4_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21522:1000_1:N:0:AAGTCCAA+NATGAGTA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNGGTGGGGTAGTAATGATTATTGGTGGGTTGATTTTTTTGTTTTTTATTATTGGGTTGATTGGTTATTATTTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATAAGTTTAAATTTTGTATGTTGTTTTATGTTTGAAAAGAGGGG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,:F:,:FF,F,:FF,,FFF,,,,FF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21522:1000_2:N:0:AAGTCCAA+NATGAGTA/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAAATAATAACCAATCAACCCAATAATAAAAAACAAAAAAATCAACCCACCAATAATCATTACTACCCCACCCAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATTACTCATAATATAAATCTCAATAATCACCATATCATTAAAAAC FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,:FFFFF,F,:,: YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth4_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth4_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth4_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9993 (99.93%) aligned concordantly 0 times 2 (0.02%) aligned concordantly exactly 1 time 5 (0.05%) aligned concordantly >1 times 0.07% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9992 (99.92%) aligned concordantly 0 times 2 (0.02%) aligned concordantly exactly 1 time 6 (0.06%) aligned concordantly >1 times 0.08% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9990 (99.90%) aligned concordantly 0 times 5 (0.05%) aligned concordantly exactly 1 time 5 (0.05%) aligned concordantly >1 times 0.10% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9988 (99.88%) aligned concordantly 0 times 6 (0.06%) aligned concordantly exactly 1 time 6 (0.06%) aligned concordantly >1 times 0.12% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth4_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth4_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth4_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth4_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 12 Mapping efficiency: 0.1% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9978 Sequence pairs did not map uniquely: 10 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 5 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 1 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 2 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 4 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 784 Total methylated C's in CpG context: 16 Total methylated C's in CHG context: 1 Total methylated C's in CHH context: 0 Total methylated C's in Unknown context: 0 Total unmethylated C's in CpG context: 123 Total unmethylated C's in CHG context: 167 Total unmethylated C's in CHH context: 477 Total unmethylated C's in Unknown context: 0 C methylated in CpG context: 11.5% C methylated in CHG context: 0.6% C methylated in CHH context: 0.0% Can't determine percentage of methylated Cs in unknown context (CN or CHN) if value was 0 Bismark completed in 0d 0h 0m 19s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth5_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth5_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-rutgers/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ chr 1 (3259165 bp) chr 2 (3468816 bp) chr 3 (700192 bp) chr 4 (2934407 bp) chr 5 (2430108 bp) chr 6 (2758956 bp) chr 7 (2199593 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/gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth5_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth5_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth5_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth5_R1_001.fastq.gz to Meth5_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth5_R1_001.fastq.gz to Meth5_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth5_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth5_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth5_R2_001.fastq.gz to Meth5_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth5_R2_001.fastq.gz to Meth5_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth5_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth5_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth5_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth5_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth5_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth5_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth5_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21829:1000_1:N:0:ATCCACTG+NGGTGCGT/1 77 * 0 0 * * 0 0 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500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21829:1000_1:N:0:ATCCACTG+NGGTGCGT/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNATAAAAATCACCCACATACATCTACAACTAACCCATAATAAAAACCATACTACACACCACAACATAAATAAACTACTAAAAATTACACCACACCATCCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACATCCACTAATCTCAT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21829:1000_2:N:0:ATCCACTG+NGGTGCGT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGGATGGTGTGGTGTAATTTTTAGTAGTTTATTTATGTTGTGGTGTGTAGTATGGTTTTTATTATGGGTTAGTTGTAGATGTATGTGGGTGATTTTTTTTGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTATGTATTTGTGTAGAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF::FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF:FFFF:F: YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth5_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth5_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21829:1000_1:N:0:ATCCACTG+NGGTGCGT/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNATAAAAATCACCCACATACATCTACAACTAACCCATAATAAAAACCATACTACACACCACAACATAAATAAACTACTAAAAATTACACCACACCATCCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACATCCACTAATCTCAT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21829:1000_2:N:0:ATCCACTG+NGGTGCGT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGGATGGTGTGGTGTAATTTTTAGTAGTTTATTTATGTTGTGGTGTGTAGTATGGTTTTTATTATGGGTTAGTTGTAGATGTATGTGGGTGATTTTTTTTGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTATGTATTTGTGTAGAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF::FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF:FFFF:F: YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth5_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth5_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21829:1000_1:N:0:ATCCACTG+NGGTGCGT/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNATAAAAATTATTTATATATATTTATAATTAATTTATAATAAAAATTATATTATATATTATAATATAAATAAATTATTAAAAATTATATTATATTATTTAAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATATTTATTGATTTTGT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21829:1000_2:N:0:ATCCACTG+NGGTGCGT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TAAATAATATAATATAATTTTTAATAATTTATTTATATTATAATATATAATATAATTTTTATTATAAATTAATTATAAATATATATAAATAATTTTTCTCAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATACACACCTATATAAAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF::FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF:FFFF:F: YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth5_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth5_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth5_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9988 (99.88%) aligned concordantly 0 times 1 (0.01%) aligned concordantly exactly 1 time 11 (0.11%) aligned concordantly >1 times 0.12% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9989 (99.89%) aligned concordantly 0 times 2 (0.02%) aligned concordantly exactly 1 time 9 (0.09%) aligned concordantly >1 times 0.11% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9992 (99.92%) aligned concordantly 0 times 2 (0.02%) aligned concordantly exactly 1 time 6 (0.06%) aligned concordantly >1 times 0.08% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9991 (99.91%) aligned concordantly 0 times 2 (0.02%) aligned concordantly exactly 1 time 7 (0.07%) aligned concordantly >1 times 0.09% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth5_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth5_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth5_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth5_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 11 Mapping efficiency: 0.1% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9977 Sequence pairs did not map uniquely: 12 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 3 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 3 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 2 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 3 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 677 Total methylated C's in CpG context: 14 Total methylated C's in CHG context: 1 Total methylated C's in CHH context: 2 Total methylated C's in Unknown context: 0 Total unmethylated C's in CpG context: 98 Total unmethylated C's in CHG context: 121 Total unmethylated C's in CHH context: 441 Total unmethylated C's in Unknown context: 0 C methylated in CpG context: 12.5% C methylated in CHG context: 0.8% C methylated in CHH context: 0.5% Can't determine percentage of methylated Cs in unknown context (CN or CHN) if value was 0 Bismark completed in 0d 0h 0m 20s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth6_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth6_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-rutgers/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ chr 1 (3259165 bp) chr 2 (3468816 bp) chr 3 (700192 bp) chr 4 (2934407 bp) chr 5 (2430108 bp) chr 6 (2758956 bp) chr 7 (2199593 bp) chr 8 (63180 bp) chr 9 (2265284 bp) chr 10 (2133031 bp) chr 11 (321139 bp) chr 12 (2060969 bp) chr 13 (2130412 bp) chr 14 (1997637 bp) chr 15 (2070015 bp) chr 16 (1944206 bp) chr 17 (2086788 bp) chr 18 (1961032 bp) chr 19 (2784121 bp) chr 20 (1774193 bp) chr 21 (1917492 bp) chr 22 (767896 bp) chr 23 (1953587 bp) chr 24 (1911142 bp) chr 25 (1913817 bp) chr 26 (1804681 bp) chr 27 (1851931 bp) chr 28 (1794943 bp) chr 29 (1682159 bp) chr 30 (1713494 bp) chr 31 (1624384 bp) chr 32 (1703322 bp) chr 33 (1697854 bp) chr 34 (1681457 bp) chr 35 (1704315 bp) chr 36 (1721755 bp) chr 37 (1579056 bp) chr 38 (1642316 bp) chr 39 (1597355 bp) chr 40 (1433356 bp) chr 41 (1582095 bp) chr 42 (1566444 bp) chr 43 (1583760 bp) chr 44 (1653614 bp) chr 45 (1587174 bp) chr 46 (1577616 bp) chr 47 (1582068 bp) chr 48 (1222503 bp) chr 49 (1471897 bp) chr 50 (1542380 bp) chr 51 (1424199 bp) chr 52 (1087915 bp) chr 53 (1509770 bp) chr 54 (1439035 bp) chr 55 (1535113 bp) chr 56 (1467872 bp) chr 57 (1372705 bp) chr 58 (1438549 bp) chr 59 (1557456 bp) chr 60 (1426376 bp) chr 61 (1458472 bp) chr 62 (1445116 bp) chr 63 (1399039 bp) chr 64 (1378723 bp) chr 65 (1416935 bp) chr 66 (1386521 bp) chr 67 (1432112 bp) chr 68 (1392272 bp) chr 69 (1372986 bp) chr 70 (1462355 bp) chr 71 (984453 bp) chr 72 (1297698 bp) chr 73 (1293992 bp) chr 74 (1357986 bp) chr 75 (1318972 bp) chr 76 (1367416 bp) chr 77 (1208092 bp) chr 78 (27441 bp) chr 79 (1327496 bp) chr 80 (1309361 bp) chr 81 (1341618 bp) chr 82 (1346785 bp) chr 83 (1333289 bp) chr 84 (1211459 bp) chr 85 (1283853 bp) chr 86 (1290567 bp) chr 87 (1192965 bp) chr 88 (1291894 bp) chr 89 (1260068 bp) chr 90 (1252728 bp) chr 91 (1271595 bp) chr 92 (1230537 bp) chr 93 (1237625 bp) chr 94 (1187499 bp) chr 95 (85829 bp) chr 96 (1221334 bp) chr 97 (1247042 bp) chr 98 (1216221 bp) chr 99 (1155919 bp) chr 100 (1199322 bp) chr 101 (1184412 bp) chr 102 (1192881 bp) chr 103 (82712 bp) chr 104 (1213056 bp) chr 105 (1209205 bp) chr 106 (1178971 bp) chr 107 (1185100 bp) chr 108 (1138319 bp) chr 109 (1182366 bp) chr 110 (1186349 bp) chr 111 (1196341 bp) chr 112 (1222398 bp) chr 113 (1182707 bp) chr 114 (1166526 bp) chr 115 (1117742 bp) chr 116 (1129122 bp) chr 117 (1155377 bp) chr 118 (1105652 bp) chr 119 (1033356 bp) chr 120 (1125959 bp) chr 121 (1081563 bp) chr 122 (1136263 bp) chr 123 (1129561 bp) chr 124 (1088222 bp) chr 125 (1134195 bp) chr 126 (1122153 bp) chr 127 (1090085 bp) chr 128 (1108877 bp) chr 129 (1069273 bp) chr 130 (81855 bp) chr 131 (1051189 bp) chr 132 (1107173 bp) chr 133 (1100872 bp) chr 134 (1069836 bp) chr 135 (1014124 bp) chr 136 (1077171 bp) chr 137 (1075285 bp) chr 138 (965987 bp) chr 139 (1064949 bp) chr 140 (972370 bp) chr 141 (1092226 bp) chr 142 (1076623 bp) chr 143 (1039113 bp) chr 144 (1056367 bp) chr 145 (1167597 bp) chr 146 (1057422 bp) chr 147 (1036731 bp) chr 148 (490519 bp) chr 149 (1032677 bp) chr 150 (1030587 bp) chr 151 (1016839 bp) chr 152 (890088 bp) chr 153 (923157 bp) chr 154 (1012331 bp) chr 155 (1019570 bp) chr 156 (1026825 bp) chr 157 (105424 bp) chr 158 (969835 bp) chr 159 (1008575 bp) chr 160 (1017669 bp) chr 161 (998356 bp) chr 162 (1111810 bp) chr 163 (980324 bp) chr 164 (997944 bp) chr 165 (976097 bp) chr 166 (22261 bp) chr 167 (997443 bp) chr 168 (986231 bp) chr 169 (990085 bp) chr 170 (1026670 bp) chr 171 (991344 bp) chr 172 (992414 bp) chr 173 (983620 bp) chr 174 (984199 bp) chr 175 (855127 bp) chr 176 (974323 bp) chr 177 (771339 bp) chr 178 (909260 bp) chr 179 (966406 bp) chr 180 (979842 bp) chr 181 (947336 bp) chr 182 (961385 bp) chr 183 (956308 bp) chr 184 (949239 bp) chr 185 (939692 bp) chr 186 (939789 bp) chr 187 (904200 bp) chr 188 (945029 bp) chr 189 (951017 bp) chr 190 (941056 bp) chr 191 (950888 bp) chr 192 (920528 bp) chr 193 (924255 bp) chr 194 (925527 bp) chr 195 (948614 bp) chr 196 (885086 bp) chr 197 (863395 bp) chr 198 (949918 bp) chr 199 (927707 bp) chr 200 (767822 bp) chr 201 (76909 bp) chr 202 (950804 bp) chr 203 (876878 bp) chr 204 (925796 bp) chr 205 (927892 bp) chr 206 (908160 bp) chr 207 (906368 bp) chr 208 (829028 bp) chr 209 (474500 bp) chr 210 (900838 bp) chr 211 (488148 bp) chr 212 (903133 bp) chr 213 (905973 bp) chr 214 (862381 bp) chr 215 (902488 bp) chr 216 (900429 bp) chr 217 (883740 bp) chr 218 (894159 bp) chr 219 (900962 bp) chr 220 (921685 bp) chr 221 (962841 bp) chr 222 (881253 bp) chr 223 (880620 bp) chr 224 (26450 bp) chr 225 (877809 bp) chr 226 (873061 bp) chr 227 (856881 bp) chr 228 (860785 bp) chr 229 (878544 bp) chr 230 (145843 bp) chr 231 (871373 bp) chr 232 (884402 bp) chr 233 (881045 bp) chr 234 (830625 bp) chr 235 (869322 bp) chr 236 (851209 bp) chr 237 (280319 bp) chr 238 (843214 bp) chr 239 (853732 bp) chr 240 (856228 bp) chr 241 (845687 bp) chr 242 (839849 bp) chr 243 (807631 bp) chr 244 (836614 bp) chr 245 (838179 bp) chr 246 (819456 bp) chr 247 (829478 bp) chr 248 (823142 bp) chr 249 (829420 bp) chr 250 (827916 bp) chr 251 (746714 bp) chr 252 (825672 bp) chr 253 (833882 bp) chr 254 (828776 bp) chr 255 (798220 bp) chr 256 (806899 bp) chr 257 (773101 bp) chr 258 (824869 bp) chr 259 (811911 bp) chr 260 (164334 bp) chr 261 (814847 bp) chr 262 (820217 bp) chr 263 (795429 bp) chr 264 (796144 bp) chr 265 (778686 bp) chr 266 (842062 bp) chr 267 (788956 bp) chr 268 (816741 bp) chr 269 (732658 bp) chr 270 (806177 bp) chr 271 (798575 bp) chr 272 (797427 bp) chr 273 (774413 bp) chr 274 (797865 bp) chr 275 (784425 bp) chr 276 (785591 bp) chr 277 (781721 bp) chr 278 (819225 bp) chr 279 (780382 bp) chr 280 (779021 bp) chr 281 (766046 bp) chr 282 (765839 bp) chr 283 (388506 bp) chr 284 (780656 bp) chr 285 (814539 bp) chr 286 (141863 bp) chr 287 (763842 bp) chr 288 (774490 bp) chr 289 (754645 bp) chr 290 (741754 bp) chr 291 (739543 bp) chr 292 (755058 bp) chr 293 (761172 bp) chr 294 (749441 bp) chr 295 (744443 bp) chr 296 (736242 bp) chr 297 (743623 bp) chr 298 (748802 bp) chr 299 (747112 bp) chr 300 (738364 bp) chr 301 (742831 bp) chr 302 (752328 bp) chr 303 (748261 bp) chr 304 (628398 bp) chr 305 (724189 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/gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth6_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth6_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth6_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth6_R1_001.fastq.gz to Meth6_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth6_R1_001.fastq.gz to Meth6_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth6_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth6_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth6_R2_001.fastq.gz to Meth6_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth6_R2_001.fastq.gz to Meth6_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth6_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth6_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth6_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth6_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth6_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth6_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth6_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21992:1000_1:N:0:GCTTGTCA+NAACATAC/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNGGTTGAAGTTTATTTGGATTTATGTTATTTGTTGGTGGTGTTAAAGAGGTTGAAAATGGTTGTTAAAGGGTTTTTTTAATTTAAGAAAAAGTGGTTTTTTGGTGTTGGTTGTATGAGGATTGGATTTAAGATGTTGATGTTTTGAGAT F#FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:F:FFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21992:1000_2:N:0:GCTTGTCA+NAACATAC/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAAAACATCAACATCTTAAATCCAATCCTCATACAACCAACACCAAAAAACCACTTTTTCTTAAATTAAAAAAACCCTTTAACAACCATTTTCAACCTCTTTAACACCACCAACAAATAACATAAATCCAAATAAACTTCAACCCAAAAT FFF,FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth6_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth6_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21992:1000_1:N:0:GCTTGTCA+NAACATAC/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNAATTAAAATTTATTTAAATTTATATTATTTATTAATAATATTAAAAAAATTAAAAATAATTATTAAAAAATTTTTTTAATTTAAAAAAAAATAATTTTTTAATATTAATTATATAAAAATTAAATTTAAAATATTAATATTTCAAAAT F#FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:F:FFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21992:1000_2:N:0:GCTTGTCA+NAACATAC/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGAAATATTAATATTTTAAATTTAATTTTTATATAATTAATATTAAAAAATTATTTTTTTTTAAATTAAAAAAATTTTTTAATAATTATTTTTAATTTTTTTAATATTATTAATAAATAATATAAATTTAAATAAATTTTAATTTAAGAT FFF,FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth6_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth6_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21992:1000_1:N:0:GCTTGTCA+NAACATAC/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNAATTAAAATTTATTTAAATTTATATTATTTATTAATAATATTAAAAAAATTAAAAATAATTATTAAAAAATTTTTTTAATTTAAAAAAAAATAATTTTTTAATATTAATTATATAAAAATTAAATTTAAAATATTAATATTTCAAAAT F#FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:F:FFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21992:1000_2:N:0:GCTTGTCA+NAACATAC/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGAAATATTAATATTTTAAATTTAATTTTTATATAATTAATATTAAAAAATTATTTTTTTTTAAATTAAAAAAATTTTTTAATAATTATTTTTAATTTTTTTAATATTATTAATAAATAATATAAATTTAAATAAATTTTAATTTAAGAT FFF,FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth6_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth6_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21992:1000_1:N:0:GCTTGTCA+NAACATAC/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNGGTTGAAGTTTATTTGGATTTATGTTATTTGTTGGTGGTGTTAAAGAGGTTGAAAATGGTTGTTAAAGGGTTTTTTTAATTTAAGAAAAAGTGGTTTTTTGGTGTTGGTTGTATGAGGATTGGATTTAAGATGTTGATGTTTTGAGAT F#FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:F:FFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21992:1000_2:N:0:GCTTGTCA+NAACATAC/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAAAACATCAACATCTTAAATCCAATCCTCATACAACCAACACCAAAAAACCACTTTTTCTTAAATTAAAAAAACCCTTTAACAACCATTTTCAACCTCTTTAACACCACCAACAAATAACATAAATCCAAATAAACTTCAACCCAAAAT FFF,FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFF YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth6_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth6_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth6_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9985 (99.85%) aligned concordantly 0 times 3 (0.03%) aligned concordantly exactly 1 time 12 (0.12%) aligned concordantly >1 times 0.15% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9983 (99.83%) aligned concordantly 0 times 3 (0.03%) aligned concordantly exactly 1 time 14 (0.14%) aligned concordantly >1 times 0.17% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9982 (99.82%) aligned concordantly 0 times 5 (0.05%) aligned concordantly exactly 1 time 13 (0.13%) aligned concordantly >1 times 0.18% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9985 (99.85%) aligned concordantly 0 times 0 (0.00%) aligned concordantly exactly 1 time 15 (0.15%) aligned concordantly >1 times 0.15% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth6_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth6_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth6_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth6_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 14 Mapping efficiency: 0.1% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9966 Sequence pairs did not map uniquely: 20 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 5 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 2 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 3 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 4 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 946 Total methylated C's in CpG context: 11 Total methylated C's in CHG context: 3 Total methylated C's in CHH context: 6 Total methylated C's in Unknown context: 0 Total unmethylated C's in CpG context: 153 Total unmethylated C's in CHG context: 162 Total unmethylated C's in CHH context: 611 Total unmethylated C's in Unknown context: 2 C methylated in CpG context: 6.7% C methylated in CHG context: 1.8% C methylated in CHH context: 1.0% C methylated in unknown context (CN or CHN): 0.0% Bismark completed in 0d 0h 0m 19s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth7_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth7_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-rutgers/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ chr 1 (3259165 bp) chr 2 (3468816 bp) chr 3 (700192 bp) chr 4 (2934407 bp) chr 5 (2430108 bp) chr 6 (2758956 bp) chr 7 (2199593 bp) chr 8 (63180 bp) chr 9 (2265284 bp) chr 10 (2133031 bp) chr 11 (321139 bp) chr 12 (2060969 bp) chr 13 (2130412 bp) chr 14 (1997637 bp) chr 15 (2070015 bp) chr 16 (1944206 bp) chr 17 (2086788 bp) chr 18 (1961032 bp) chr 19 (2784121 bp) chr 20 (1774193 bp) chr 21 (1917492 bp) chr 22 (767896 bp) chr 23 (1953587 bp) chr 24 (1911142 bp) chr 25 (1913817 bp) chr 26 (1804681 bp) chr 27 (1851931 bp) chr 28 (1794943 bp) chr 29 (1682159 bp) chr 30 (1713494 bp) chr 31 (1624384 bp) chr 32 (1703322 bp) chr 33 (1697854 bp) chr 34 (1681457 bp) chr 35 (1704315 bp) chr 36 (1721755 bp) chr 37 (1579056 bp) chr 38 (1642316 bp) chr 39 (1597355 bp) chr 40 (1433356 bp) chr 41 (1582095 bp) chr 42 (1566444 bp) chr 43 (1583760 bp) chr 44 (1653614 bp) chr 45 (1587174 bp) chr 46 (1577616 bp) chr 47 (1582068 bp) chr 48 (1222503 bp) chr 49 (1471897 bp) chr 50 (1542380 bp) chr 51 (1424199 bp) chr 52 (1087915 bp) chr 53 (1509770 bp) chr 54 (1439035 bp) chr 55 (1535113 bp) chr 56 (1467872 bp) chr 57 (1372705 bp) chr 58 (1438549 bp) chr 59 (1557456 bp) chr 60 (1426376 bp) chr 61 (1458472 bp) chr 62 (1445116 bp) chr 63 (1399039 bp) chr 64 (1378723 bp) chr 65 (1416935 bp) chr 66 (1386521 bp) chr 67 (1432112 bp) chr 68 (1392272 bp) chr 69 (1372986 bp) chr 70 (1462355 bp) chr 71 (984453 bp) chr 72 (1297698 bp) chr 73 (1293992 bp) chr 74 (1357986 bp) chr 75 (1318972 bp) chr 76 (1367416 bp) chr 77 (1208092 bp) chr 78 (27441 bp) chr 79 (1327496 bp) chr 80 (1309361 bp) chr 81 (1341618 bp) chr 82 (1346785 bp) chr 83 (1333289 bp) chr 84 (1211459 bp) chr 85 (1283853 bp) chr 86 (1290567 bp) chr 87 (1192965 bp) chr 88 (1291894 bp) chr 89 (1260068 bp) chr 90 (1252728 bp) chr 91 (1271595 bp) chr 92 (1230537 bp) chr 93 (1237625 bp) chr 94 (1187499 bp) chr 95 (85829 bp) chr 96 (1221334 bp) chr 97 (1247042 bp) chr 98 (1216221 bp) chr 99 (1155919 bp) chr 100 (1199322 bp) chr 101 (1184412 bp) chr 102 (1192881 bp) chr 103 (82712 bp) chr 104 (1213056 bp) chr 105 (1209205 bp) chr 106 (1178971 bp) chr 107 (1185100 bp) 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2855 (30900 bp) chr 2856 (30754 bp) chr 2857 (30740 bp) chr 2858 (45403 bp) chr 2859 (30540 bp) chr 2860 (30179 bp) chr 2861 (26988 bp) chr 2862 (30429 bp) chr 2863 (30078 bp) chr 2864 (29810 bp) chr 2865 (29931 bp) chr 2866 (29833 bp) chr 2867 (29774 bp) chr 2868 (29741 bp) chr 2869 (29692 bp) chr 2870 (29641 bp) chr 2871 (29627 bp) chr 2872 (29648 bp) chr 2873 (29629 bp) chr 2874 (29406 bp) chr 2875 (29371 bp) chr 2876 (29432 bp) chr 2877 (29257 bp) chr 2878 (29130 bp) chr 2879 (28981 bp) chr 2880 (28981 bp) chr 2881 (28711 bp) chr 2882 (28661 bp) chr 2883 (28602 bp) chr 2884 (28540 bp) chr 2885 (28450 bp) chr 2886 (28436 bp) chr 2887 (28370 bp) chr 2888 (28393 bp) chr 2889 (28216 bp) chr 2890 (28176 bp) chr 2891 (15915 bp) chr 2892 (28098 bp) chr 2893 (27262 bp) chr 2894 (28107 bp) chr 2895 (28043 bp) chr 2896 (27915 bp) chr 2897 (27868 bp) chr 2898 (27812 bp) chr 2899 (27753 bp) chr 2900 (27736 bp) chr 2901 (27653 bp) chr 2902 (27424 bp) chr 2903 (27534 bp) chr 2904 (27445 bp) chr 2905 (27478 bp) chr 2906 (27406 bp) chr 2907 (27382 bp) chr 2908 (27361 bp) chr 2909 (27302 bp) chr 2910 (27265 bp) chr 2911 (27190 bp) chr 2912 (27166 bp) chr 2913 (27009 bp) chr 2914 (26835 bp) chr 2915 (26846 bp) chr 2916 (26770 bp) chr 2917 (29091 bp) chr 2918 (26684 bp) chr 2919 (26626 bp) chr 2920 (26507 bp) chr 2921 (26491 bp) chr 2922 (26348 bp) chr 2923 (26319 bp) chr 2924 (26211 bp) chr 2925 (26263 bp) chr 2926 (26260 bp) chr 2927 (25984 bp) chr 2928 (25973 bp) chr 2929 (25829 bp) chr 2930 (25849 bp) chr 2931 (25687 bp) chr 2932 (25576 bp) chr 2933 (25597 bp) chr 2934 (25546 bp) chr 2935 (25518 bp) chr 2936 (28007 bp) chr 2937 (25504 bp) chr 2938 (25100 bp) chr 2939 (25312 bp) chr 2940 (25255 bp) chr 2941 (25250 bp) chr 2942 (25294 bp) chr 2943 (25289 bp) chr 2944 (25208 bp) chr 2945 (25280 bp) chr 2946 (25155 bp) chr 2947 (25302 bp) chr 2948 (25068 bp) chr 2949 (25012 bp) chr 2950 (25006 bp) chr 2951 (25055 bp) chr 2952 (24917 bp) chr 2953 (24821 bp) chr 2954 (24739 bp) chr 2955 (24790 bp) chr 2956 (24789 bp) chr 2957 (24749 bp) chr 2958 (22684 bp) chr 2959 (24761 bp) chr 2960 (24536 bp) chr 2961 (24478 bp) chr 2962 (24482 bp) chr 2963 (24359 bp) chr 2964 (24378 bp) chr 2965 (24330 bp) chr 2966 (24293 bp) chr 2967 (24291 bp) chr 2968 (24243 bp) chr 2969 (24178 bp) chr 2970 (24139 bp) chr 2971 (24105 bp) chr 2972 (24012 bp) chr 2973 (23966 bp) chr 2974 (23833 bp) chr 2975 (23789 bp) chr 2976 (23679 bp) chr 2977 (23552 bp) chr 2978 (23582 bp) chr 2979 (23794 bp) chr 2980 (23459 bp) chr 2981 (25111 bp) chr 2982 (23540 bp) chr 2983 (23411 bp) chr 2984 (23411 bp) chr 2985 (23330 bp) chr 2986 (23229 bp) chr 2987 (23419 bp) chr 2988 (23135 bp) chr 2989 (23013 bp) chr 2990 (23012 bp) chr 2991 (40996 bp) chr 2992 (22997 bp) chr 2993 (23586 bp) chr 2994 (22841 bp) chr 2995 (22705 bp) chr 2996 (22602 bp) chr 2997 (22500 bp) chr 2998 (22441 bp) chr 2999 (22498 bp) chr 3000 (22428 bp) chr 3001 (22402 bp) chr 3002 (22366 bp) chr 3003 (22320 bp) chr 3004 (22354 bp) chr 3005 (22398 bp) chr 3006 (22239 bp) chr 3007 (22223 bp) chr 3008 (22192 bp) chr 3009 (21962 bp) chr 3010 (21929 bp) chr 3011 (21769 bp) chr 3012 (21743 bp) chr 3013 (21724 bp) chr 3014 (21688 bp) chr 3015 (21590 bp) chr 3016 (21462 bp) chr 3017 (21378 bp) chr 3018 (21398 bp) chr 3019 (21226 bp) chr 3020 (21142 bp) chr 3021 (21088 bp) chr 3022 (21029 bp) chr 3023 (20978 bp) chr 3024 (20979 bp) chr 3025 (20911 bp) chr 3026 (20532 bp) chr 3027 (20919 bp) chr 3028 (20817 bp) chr 3029 (20652 bp) chr 3030 (20462 bp) chr 3031 (20791 bp) chr 3032 (20632 bp) chr 3033 (20540 bp) chr 3034 (20616 bp) chr 3035 (20535 bp) chr 3036 (20509 bp) chr 3037 (20511 bp) chr 3038 (20399 bp) chr 3039 (20437 bp) chr 3040 (20260 bp) chr 3041 (20304 bp) chr 3042 (20219 bp) chr 3043 (20160 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth7_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth7_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth7_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth7_R1_001.fastq.gz to Meth7_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth7_R1_001.fastq.gz to Meth7_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth7_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth7_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth7_R2_001.fastq.gz to Meth7_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth7_R2_001.fastq.gz to Meth7_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth7_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth7_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth7_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth7_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth7_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth7_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth7_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:22209:1000_1:N:0:CAAGCTAG+NCATAGCG/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTTAATGTTTTATATAATAAATAATGTATTATATTTTATATTGAAATTTAAATTAAATATGAAAAAAAATATTTTGTTATATATATATATTTTTTGATAATTAAATATAATAATTAAAATTTTTTTAGATTGGAAGAGTATATGTTTG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:22209:1000_2:N:0:CAAGCTAG+NCATAGCG/2 141 * 0 0 * * 0 0 AAAAAAATTTTAATTATTATATTTAATTATCAAAAAATATATATATATAACAAAATATTTTTTTTCATATTTAATTTAAATTTCAATATAAAATATAATACATTATTTATTATATAAAACATTAAAAAAAATCAAAAAAACATCATCTAA FFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFF:,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFF,FFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth7_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth7_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:22209:1000_1:N:0:CAAGCTAG+NCATAGCG/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNCCCAACACCTTACACAATAAACAACACACTACATTCTACATCAAAACTTAAATCAAATACAAAAAAAAACATCTCACCATATATACATACCCTCCAATAATCAAACATAACAATTAAAACTCCCCTAAATCAAAAAAACACACATCTA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:22209:1000_2:N:0:CAAGCTAG+NCATAGCG/2 141 * 0 0 * * 0 0 AGGGGAGTTTTAATTGTTATGTTTGATTATTGGAGGGTATGTATATATGGTGAGATGTTTTTTTTTGTATTTGATTTAAGTTTTGATGTAGAATGTAGTGTGTTGTTTATTGTGTAAGGTGTTGGGGGAGATTGGAAGAGTGTTGTTTAG FFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFF:,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFF,FFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth7_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth7_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:22209:1000_1:N:0:CAAGCTAG+NCATAGCG/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNCCCAACACCTTACACAATAAACAACACACTACATTCTACATCAAAACTTAAATCAAATACAAAAAAAAACATCTCACCATATATACATACCCTCCAATAATCAAACATAACAATTAAAACTCCCCTAAATCAAAAAAACACACATCTA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:22209:1000_2:N:0:CAAGCTAG+NCATAGCG/2 141 * 0 0 * * 0 0 AGGGGAGTTTTAATTGTTATGTTTGATTATTGGAGGGTATGTATATATGGTGAGATGTTTTTTTTTGTATTTGATTTAAGTTTTGATGTAGAATGTAGTGTGTTGTTTATTGTGTAAGGTGTTGGGGGAGATTGGAAGAGTGTTGTTTAG FFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFF:,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFF,FFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth7_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth7_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:22209:1000_1:N:0:CAAGCTAG+NCATAGCG/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTTAATGTTTTATATAATAAATAATGTATTATATTTTATATTGAAATTTAAATTAAATATGAAAAAAAATATTTTGTTATATATATATATTTTTTGATAATTAAATATAATAATTAAAATTTTTTTAGATTGGAAGAGTATATGTTTG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:22209:1000_2:N:0:CAAGCTAG+NCATAGCG/2 141 * 0 0 * * 0 0 AAAAAAATTTTAATTATTATATTTAATTATCAAAAAATATATATATATAACAAAATATTTTTTTTCATATTTAATTTAAATTTCAATATAAAATATAATACATTATTTATTATATAAAACATTAAAAAAAATCAAAAAAACATCATCTAA FFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFF:,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFF,FFF YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth7_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth7_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth7_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9987 (99.87%) aligned concordantly 0 times 5 (0.05%) aligned concordantly exactly 1 time 8 (0.08%) aligned concordantly >1 times 0.13% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9989 (99.89%) aligned concordantly 0 times 2 (0.02%) aligned concordantly exactly 1 time 9 (0.09%) aligned concordantly >1 times 0.11% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9989 (99.89%) aligned concordantly 0 times 1 (0.01%) aligned concordantly exactly 1 time 10 (0.10%) aligned concordantly >1 times 0.11% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9987 (99.87%) aligned concordantly 0 times 4 (0.04%) aligned concordantly exactly 1 time 9 (0.09%) aligned concordantly >1 times 0.13% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth7_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth7_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth7_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth7_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 13 Mapping efficiency: 0.1% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9975 Sequence pairs did not map uniquely: 12 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 3 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 1 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 2 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 7 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 951 Total methylated C's in CpG context: 49 Total methylated C's in CHG context: 3 Total methylated C's in CHH context: 6 Total methylated C's in Unknown context: 0 Total unmethylated C's in CpG context: 40 Total unmethylated C's in CHG context: 168 Total unmethylated C's in CHH context: 685 Total unmethylated C's in Unknown context: 0 C methylated in CpG context: 55.1% C methylated in CHG context: 1.8% C methylated in CHH context: 0.9% Can't determine percentage of methylated Cs in unknown context (CN or CHN) if value was 0 Bismark completed in 0d 0h 0m 19s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth8_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth8_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-rutgers/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ chr 1 (3259165 bp) chr 2 (3468816 bp) chr 3 (700192 bp) chr 4 (2934407 bp) chr 5 (2430108 bp) chr 6 (2758956 bp) chr 7 (2199593 bp) chr 8 (63180 bp) chr 9 (2265284 bp) chr 10 (2133031 bp) chr 11 (321139 bp) chr 12 (2060969 bp) chr 13 (2130412 bp) chr 14 (1997637 bp) chr 15 (2070015 bp) chr 16 (1944206 bp) chr 17 (2086788 bp) chr 18 (1961032 bp) chr 19 (2784121 bp) chr 20 (1774193 bp) chr 21 (1917492 bp) chr 22 (767896 bp) chr 23 (1953587 bp) chr 24 (1911142 bp) chr 25 (1913817 bp) chr 26 (1804681 bp) chr 27 (1851931 bp) chr 28 (1794943 bp) chr 29 (1682159 bp) chr 30 (1713494 bp) chr 31 (1624384 bp) chr 32 (1703322 bp) chr 33 (1697854 bp) chr 34 (1681457 bp) chr 35 (1704315 bp) chr 36 (1721755 bp) chr 37 (1579056 bp) chr 38 (1642316 bp) chr 39 (1597355 bp) chr 40 (1433356 bp) chr 41 (1582095 bp) chr 42 (1566444 bp) chr 43 (1583760 bp) chr 44 (1653614 bp) chr 45 (1587174 bp) chr 46 (1577616 bp) chr 47 (1582068 bp) chr 48 (1222503 bp) chr 49 (1471897 bp) chr 50 (1542380 bp) chr 51 (1424199 bp) chr 52 (1087915 bp) chr 53 (1509770 bp) chr 54 (1439035 bp) chr 55 (1535113 bp) chr 56 (1467872 bp) chr 57 (1372705 bp) 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/gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth8_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth8_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth8_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth8_R1_001.fastq.gz to Meth8_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth8_R1_001.fastq.gz to Meth8_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth8_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth8_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth8_R2_001.fastq.gz to Meth8_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth8_R2_001.fastq.gz to Meth8_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth8_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth8_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth8_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth8_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth8_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth8_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth8_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23674:1000_1:N:0:TGGATCGA+NTGCGATA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTAATTTATTTATTTTTTTTTATAAAAATTTTTTAAATAAAAAAATTGATGATATTAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTGGATTGAATTTTGTATTTTTGAATTTGTATGAAAAAAGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:,:,,:,,,,,,,,,,,,:FFF,,,,F:FFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23674:1000_2:N:0:TGGATCGA+NTGCGATA/2 141 * 0 0 * * 0 0 AATATCATCAATTTTTTTATTTAAAAAATTTTTATAAAAAAAAATAAATAAATTAAAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATTATCACACATATTAATAACAAAAAAAACCAAATCAATTAAAAACAAAAAAAAAAAAAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF::FFFFF:FFF::FFFF:FF,,,,,,,,,F,F:F,F,,,,,,,,,,,:F:,:,,,F:FFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth8_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth8_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23674:1000_1:N:0:TGGATCGA+NTGCGATA/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNCAATCTATCTATCTCTCTCTACAAAAACCCCCCAAATAAAAAAATCAACAACACCAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACTAAATCAAATCTCATATTCCCAAATCTACATAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:,:,,:,,,,,,,,,,,,:FFF,,,,F:FFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23674:1000_2:N:0:TGGATCGA+NTGCGATA/2 141 * 0 0 * * 0 0 GGTGTTGTTGATTTTTTTATTTGGGGGGTTTTTGTAGAGAGAGATAGATAGATTGAGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTATTGTATGTGTTGATGGTGGGGGGGGTTGGATTAATTAAAAATGGGGGGGGGGGGGGGG FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF::FFFFF:FFF::FFFF:FF,,,,,,,,,F,F:F,F,,,,,,,,,,,:F:,:,,,F:FFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth8_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth8_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23674:1000_1:N:0:TGGATCGA+NTGCGATA/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNCAATCTATCTATCTCTCTCTACAAAAACCCCCCAAATAAAAAAATCAACAACACCAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACTAAATCAAATCTCATATTCCCAAATCTACATAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:,:,,:,,,,,,,,,,,,:FFF,,,,F:FFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23674:1000_2:N:0:TGGATCGA+NTGCGATA/2 141 * 0 0 * * 0 0 GGTGTTGTTGATTTTTTTATTTGGGGGGTTTTTGTAGAGAGAGATAGATAGATTGAGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTATTGTATGTGTTGATGGTGGGGGGGGTTGGATTAATTAAAAATGGGGGGGGGGGGGGGG FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF::FFFFF:FFF::FFFF:FF,,,,,,,,,F,F:F,F,,,,,,,,,,,:F:,:,,,F:FFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth8_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth8_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23674:1000_1:N:0:TGGATCGA+NTGCGATA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTAATTTATTTATTTTTTTTTATAAAAATTTTTTAAATAAAAAAATTGATGATATTAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTGGATTGAATTTTGTATTTTTGAATTTGTATGAAAAAAGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:,:,,:,,,,,,,,,,,,:FFF,,,,F:FFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23674:1000_2:N:0:TGGATCGA+NTGCGATA/2 141 * 0 0 * * 0 0 AATATCATCAATTTTTTTATTTAAAAAATTTTTATAAAAAAAAATAAATAAATTAAAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATTATCACACATATTAATAACAAAAAAAACCAAATCAATTAAAAACAAAAAAAAAAAAAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF::FFFFF:FFF::FFFF:FF,,,,,,,,,F,F:F,F,,,,,,,,,,,:F:,:,,,F:FFFFFFFFFFFF YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth8_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth8_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth8_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9992 (99.92%) aligned concordantly 0 times 5 (0.05%) aligned concordantly exactly 1 time 3 (0.03%) aligned concordantly >1 times 0.08% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9996 (99.96%) aligned concordantly 0 times 0 (0.00%) aligned concordantly exactly 1 time 4 (0.04%) aligned concordantly >1 times 0.04% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9992 (99.92%) aligned concordantly 0 times 1 (0.01%) aligned concordantly exactly 1 time 7 (0.07%) aligned concordantly >1 times 0.08% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9993 (99.93%) aligned concordantly 0 times 3 (0.03%) aligned concordantly exactly 1 time 4 (0.04%) aligned concordantly >1 times 0.07% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth8_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth8_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth8_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth8_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 3 Mapping efficiency: 0.0% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9985 Sequence pairs did not map uniquely: 12 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 0 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 0 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 0 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 3 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 219 Total methylated C's in CpG context: 23 Total methylated C's in CHG context: 0 Total methylated C's in CHH context: 4 Total methylated C's in Unknown context: 0 Total unmethylated C's in CpG context: 7 Total unmethylated C's in CHG context: 33 Total unmethylated C's in CHH context: 152 Total unmethylated C's in Unknown context: 0 C methylated in CpG context: 76.7% C methylated in CHG context: 0.0% C methylated in CHH context: 2.6% Can't determine percentage of methylated Cs in unknown context (CN or CHN) if value was 0 Bismark completed in 0d 0h 0m 19s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth9_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth9_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-rutgers/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ chr 1 (3259165 bp) chr 2 (3468816 bp) chr 3 (700192 bp) chr 4 (2934407 bp) chr 5 (2430108 bp) chr 6 (2758956 bp) chr 7 (2199593 bp) chr 8 (63180 bp) chr 9 (2265284 bp) chr 10 (2133031 bp) chr 11 (321139 bp) chr 12 (2060969 bp) chr 13 (2130412 bp) chr 14 (1997637 bp) chr 15 (2070015 bp) chr 16 (1944206 bp) chr 17 (2086788 bp) chr 18 (1961032 bp) chr 19 (2784121 bp) chr 20 (1774193 bp) chr 21 (1917492 bp) chr 22 (767896 bp) chr 23 (1953587 bp) chr 24 (1911142 bp) chr 25 (1913817 bp) chr 26 (1804681 bp) chr 27 (1851931 bp) chr 28 (1794943 bp) chr 29 (1682159 bp) chr 30 (1713494 bp) chr 31 (1624384 bp) chr 32 (1703322 bp) chr 33 (1697854 bp) chr 34 (1681457 bp) chr 35 (1704315 bp) chr 36 (1721755 bp) chr 37 (1579056 bp) chr 38 (1642316 bp) chr 39 (1597355 bp) chr 40 (1433356 bp) chr 41 (1582095 bp) chr 42 (1566444 bp) chr 43 (1583760 bp) chr 44 (1653614 bp) chr 45 (1587174 bp) chr 46 (1577616 bp) chr 47 (1582068 bp) chr 48 (1222503 bp) chr 49 (1471897 bp) chr 50 (1542380 bp) chr 51 (1424199 bp) chr 52 (1087915 bp) chr 53 (1509770 bp) chr 54 (1439035 bp) chr 55 (1535113 bp) chr 56 (1467872 bp) chr 57 (1372705 bp) chr 58 (1438549 bp) chr 59 (1557456 bp) chr 60 (1426376 bp) chr 61 (1458472 bp) chr 62 (1445116 bp) chr 63 (1399039 bp) chr 64 (1378723 bp) chr 65 (1416935 bp) chr 66 (1386521 bp) chr 67 (1432112 bp) chr 68 (1392272 bp) chr 69 (1372986 bp) chr 70 (1462355 bp) chr 71 (984453 bp) chr 72 (1297698 bp) chr 73 (1293992 bp) chr 74 (1357986 bp) chr 75 (1318972 bp) chr 76 (1367416 bp) chr 77 (1208092 bp) chr 78 (27441 bp) chr 79 (1327496 bp) chr 80 (1309361 bp) chr 81 (1341618 bp) chr 82 (1346785 bp) chr 83 (1333289 bp) chr 84 (1211459 bp) chr 85 (1283853 bp) chr 86 (1290567 bp) chr 87 (1192965 bp) chr 88 (1291894 bp) chr 89 (1260068 bp) chr 90 (1252728 bp) chr 91 (1271595 bp) chr 92 (1230537 bp) chr 93 (1237625 bp) chr 94 (1187499 bp) chr 95 (85829 bp) chr 96 (1221334 bp) chr 97 (1247042 bp) chr 98 (1216221 bp) chr 99 (1155919 bp) chr 100 (1199322 bp) chr 101 (1184412 bp) chr 102 (1192881 bp) chr 103 (82712 bp) chr 104 (1213056 bp) chr 105 (1209205 bp) chr 106 (1178971 bp) chr 107 (1185100 bp) chr 108 (1138319 bp) chr 109 (1182366 bp) chr 110 (1186349 bp) chr 111 (1196341 bp) chr 112 (1222398 bp) chr 113 (1182707 bp) chr 114 (1166526 bp) chr 115 (1117742 bp) chr 116 (1129122 bp) chr 117 (1155377 bp) chr 118 (1105652 bp) chr 119 (1033356 bp) chr 120 (1125959 bp) chr 121 (1081563 bp) chr 122 (1136263 bp) chr 123 (1129561 bp) chr 124 (1088222 bp) chr 125 (1134195 bp) chr 126 (1122153 bp) chr 127 (1090085 bp) chr 128 (1108877 bp) chr 129 (1069273 bp) chr 130 (81855 bp) chr 131 (1051189 bp) chr 132 (1107173 bp) chr 133 (1100872 bp) chr 134 (1069836 bp) chr 135 (1014124 bp) chr 136 (1077171 bp) chr 137 (1075285 bp) chr 138 (965987 bp) chr 139 (1064949 bp) chr 140 (972370 bp) chr 141 (1092226 bp) chr 142 (1076623 bp) chr 143 (1039113 bp) chr 144 (1056367 bp) chr 145 (1167597 bp) chr 146 (1057422 bp) chr 147 (1036731 bp) chr 148 (490519 bp) chr 149 (1032677 bp) chr 150 (1030587 bp) chr 151 (1016839 bp) chr 152 (890088 bp) chr 153 (923157 bp) chr 154 (1012331 bp) chr 155 (1019570 bp) chr 156 (1026825 bp) chr 157 (105424 bp) chr 158 (969835 bp) chr 159 (1008575 bp) chr 160 (1017669 bp) chr 161 (998356 bp) chr 162 (1111810 bp) chr 163 (980324 bp) chr 164 (997944 bp) chr 165 (976097 bp) chr 166 (22261 bp) chr 167 (997443 bp) chr 168 (986231 bp) chr 169 (990085 bp) chr 170 (1026670 bp) chr 171 (991344 bp) chr 172 (992414 bp) chr 173 (983620 bp) chr 174 (984199 bp) chr 175 (855127 bp) chr 176 (974323 bp) chr 177 (771339 bp) chr 178 (909260 bp) chr 179 (966406 bp) chr 180 (979842 bp) chr 181 (947336 bp) chr 182 (961385 bp) chr 183 (956308 bp) chr 184 (949239 bp) chr 185 (939692 bp) chr 186 (939789 bp) chr 187 (904200 bp) chr 188 (945029 bp) chr 189 (951017 bp) chr 190 (941056 bp) chr 191 (950888 bp) chr 192 (920528 bp) chr 193 (924255 bp) chr 194 (925527 bp) chr 195 (948614 bp) chr 196 (885086 bp) chr 197 (863395 bp) chr 198 (949918 bp) chr 199 (927707 bp) chr 200 (767822 bp) chr 201 (76909 bp) chr 202 (950804 bp) chr 203 (876878 bp) chr 204 (925796 bp) chr 205 (927892 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2955 (24790 bp) chr 2956 (24789 bp) chr 2957 (24749 bp) chr 2958 (22684 bp) chr 2959 (24761 bp) chr 2960 (24536 bp) chr 2961 (24478 bp) chr 2962 (24482 bp) chr 2963 (24359 bp) chr 2964 (24378 bp) chr 2965 (24330 bp) chr 2966 (24293 bp) chr 2967 (24291 bp) chr 2968 (24243 bp) chr 2969 (24178 bp) chr 2970 (24139 bp) chr 2971 (24105 bp) chr 2972 (24012 bp) chr 2973 (23966 bp) chr 2974 (23833 bp) chr 2975 (23789 bp) chr 2976 (23679 bp) chr 2977 (23552 bp) chr 2978 (23582 bp) chr 2979 (23794 bp) chr 2980 (23459 bp) chr 2981 (25111 bp) chr 2982 (23540 bp) chr 2983 (23411 bp) chr 2984 (23411 bp) chr 2985 (23330 bp) chr 2986 (23229 bp) chr 2987 (23419 bp) chr 2988 (23135 bp) chr 2989 (23013 bp) chr 2990 (23012 bp) chr 2991 (40996 bp) chr 2992 (22997 bp) chr 2993 (23586 bp) chr 2994 (22841 bp) chr 2995 (22705 bp) chr 2996 (22602 bp) chr 2997 (22500 bp) chr 2998 (22441 bp) chr 2999 (22498 bp) chr 3000 (22428 bp) chr 3001 (22402 bp) chr 3002 (22366 bp) chr 3003 (22320 bp) chr 3004 (22354 bp) chr 3005 (22398 bp) chr 3006 (22239 bp) chr 3007 (22223 bp) chr 3008 (22192 bp) chr 3009 (21962 bp) chr 3010 (21929 bp) chr 3011 (21769 bp) chr 3012 (21743 bp) chr 3013 (21724 bp) chr 3014 (21688 bp) chr 3015 (21590 bp) chr 3016 (21462 bp) chr 3017 (21378 bp) chr 3018 (21398 bp) chr 3019 (21226 bp) chr 3020 (21142 bp) chr 3021 (21088 bp) chr 3022 (21029 bp) chr 3023 (20978 bp) chr 3024 (20979 bp) chr 3025 (20911 bp) chr 3026 (20532 bp) chr 3027 (20919 bp) chr 3028 (20817 bp) chr 3029 (20652 bp) chr 3030 (20462 bp) chr 3031 (20791 bp) chr 3032 (20632 bp) chr 3033 (20540 bp) chr 3034 (20616 bp) chr 3035 (20535 bp) chr 3036 (20509 bp) chr 3037 (20511 bp) chr 3038 (20399 bp) chr 3039 (20437 bp) chr 3040 (20260 bp) chr 3041 (20304 bp) chr 3042 (20219 bp) chr 3043 (20160 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth9_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth9_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth9_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth9_R1_001.fastq.gz to Meth9_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth9_R1_001.fastq.gz to Meth9_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth9_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth9_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth9_R2_001.fastq.gz to Meth9_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth9_R2_001.fastq.gz to Meth9_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth9_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth9_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth9_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth9_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth9_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth9_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth9_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21612:1000_1:N:0:AGTTCAGG+NCAACAGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTAAATTATTTTTTAAAATATTAAATTTAAAATTTTTTATAATAATTAATTTATATTATTAATTTATTAATAATATTAAATTATTTTATTATATTTTTTTATAGAGAGATTGGAAGAGTAGTAGATTGGAAGAGTATATATTTGAATTT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21612:1000_2:N:0:AGTTCAGG+NCAACAGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 ACTACTCTTCCAATCTCTCTATAAAAAAATATAATAAAATAATTTAATATTATTAATAAATTAATAATATAAATTAATTATTATAAAAAATTTTAAATTTAATATTTTAAAAAATAATTTAAAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFF:FFFF:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFF,:FFFFFFFFFFF,FFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FF:FFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth9_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth9_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21612:1000_1:N:0:AGTTCAGG+NCAACAGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNCAAACTACTTTTCAAAACATCAAATTTAAAACTCTTTACAACAACCAATTTACATTATCAACTCATTAATAATACTAAATTACCTTATCATACTCTCTCACAAAAAAATCAAAAAAACAATAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTC F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21612:1000_2:N:0:AGTTCAGG+NCAACAGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 ATTGTTTTTTTGATTTTTTTGTGAGAGAGTATGATAAGGTAATTTAGTATTATTAATGAGTTGATAATGTAAATTGGTTGTTGTAAAGAGTTTTAAATTTGATGTTTTGAAAAGTAGTTTGAAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFF:FFFF:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFF,:FFFFFFFFFFF,FFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FF:FFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth9_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth9_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21612:1000_1:N:0:AGTTCAGG+NCAACAGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNCAAACTACTTTTCAAAACATCAAATTTAAAACTCTTTACAACAACCAATTTACATTATCAACTCATTAATAATACTAAATTACCTTATCATACTCTCTCACAAAAAAATCAAAAAAACAATAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTC F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21612:1000_2:N:0:AGTTCAGG+NCAACAGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 ATTGTTTTTTTGATTTTTTTGTGAGAGAGTATGATAAGGTAATTTAGTATTATTAATGAGTTGATAATGTAAATTGGTTGTTGTAAAGAGTTTTAAATTTGATGTTTTGAAAAGTAGTTTGAAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFF:FFFF:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFF,:FFFFFFFFFFF,FFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FF:FFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth9_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth9_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21612:1000_1:N:0:AGTTCAGG+NCAACAGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTAAATTATTTTTTAAAATATTAAATTTAAAATTTTTTATAATAATTAATTTATATTATTAATTTATTAATAATATTAAATTATTTTATTATATTTTTTTATAGAGAGATTGGAAGAGTAGTAGATTGGAAGAGTATATATTTGAATTT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21612:1000_2:N:0:AGTTCAGG+NCAACAGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 ACTACTCTTCCAATCTCTCTATAAAAAAATATAATAAAATAATTTAATATTATTAATAAATTAATAATATAAATTAATTATTATAAAAAATTTTAAATTTAATATTTTAAAAAATAATTTAAAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFF:FFFF:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFF,:FFFFFFFFFFF,FFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FF:FFFF YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth9_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth9_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth9_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9993 (99.93%) aligned concordantly 0 times 2 (0.02%) aligned concordantly exactly 1 time 5 (0.05%) aligned concordantly >1 times 0.07% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9992 (99.92%) aligned concordantly 0 times 4 (0.04%) aligned concordantly exactly 1 time 4 (0.04%) aligned concordantly >1 times 0.08% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9996 (99.96%) aligned concordantly 0 times 0 (0.00%) aligned concordantly exactly 1 time 4 (0.04%) aligned concordantly >1 times 0.04% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9995 (99.95%) aligned concordantly 0 times 2 (0.02%) aligned concordantly exactly 1 time 3 (0.03%) aligned concordantly >1 times 0.05% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth9_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth9_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth9_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth9_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 6 Mapping efficiency: 0.1% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9987 Sequence pairs did not map uniquely: 7 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 1 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 2 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 2 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 1 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 351 Total methylated C's in CpG context: 28 Total methylated C's in CHG context: 4 Total methylated C's in CHH context: 2 Total methylated C's in Unknown context: 0 Total unmethylated C's in CpG context: 28 Total unmethylated C's in CHG context: 49 Total unmethylated C's in CHH context: 240 Total unmethylated C's in Unknown context: 0 C methylated in CpG context: 50.0% C methylated in CHG context: 7.5% C methylated in CHH context: 0.8% Can't determine percentage of methylated Cs in unknown context (CN or CHN) if value was 0 Bismark completed in 0d 0h 0m 19s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth10_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth10_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Created output directory Mcap_test06-NCBI/! Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-NCBI/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ chr RDEB01000001.1 (2051086 bp) chr RDEB01000002.1 (1931859 bp) chr RDEB01000003.1 (1909126 bp) chr RDEB01000004.1 (1580737 bp) chr RDEB01000005.1 (1562395 bp) chr RDEB01000006.1 (1561676 bp) chr RDEB01000007.1 (1468524 bp) chr RDEB01000008.1 (1449017 bp) chr RDEB01000009.1 (1288384 bp) chr RDEB01000010.1 (1267912 bp) chr RDEB01000011.1 (1226981 bp) chr RDEB01000012.1 (1203453 bp) chr RDEB01000013.1 (1196056 bp) chr RDEB01000014.1 (1161273 bp) chr RDEB01000015.1 (1155058 bp) chr RDEB01000016.1 (1154061 bp) chr 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alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth10_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth10_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth10_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth10_R1_001.fastq.gz to Meth10_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth10_R1_001.fastq.gz to Meth10_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth10_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth10_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth10_R2_001.fastq.gz to Meth10_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth10_R2_001.fastq.gz to Meth10_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth10_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth10_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth10_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth10_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth10_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth10_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth10_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23204:1000_1:N:0:AACCTGAA+NTGGTGAG/1 77 * 0 0 * * 0 0 GNGTGTGAAGATGTGGAGTTTGTTTTTATTTTGTGGGGTGTTTTTGTTTGTATTTTTTTTAAAAATAAAGATATTGATAAATTGAAATTATTTTTGTTAATAGTTTTGGTTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATAATT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23204:1000_2:N:0:AACCTGAA+NTGGTGAG/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAACCAAAACTATTAACAAAAATAATTTCAATTTATCAATATCTTTATTTTTAAAAAAAATACAAACAAAAACACCCCACAAAATAAAAACAAACTCCACATCTTCACACACAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATCTCAC FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,FFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFF,FF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF,FFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth10_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth10_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23204:1000_1:N:0:AACCTGAA+NTGGTGAG/1 77 * 0 0 * * 0 0 ANATATAAAAATATAAAATTTATTTTTATTTTATAAAATATTTTTATTTATATTTTTTTTAAAAATAAAAATATTAATAAATTAAAATTATTTTTATTAATAATTTTAATTAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACAACC F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23204:1000_2:N:0:AACCTGAA+NTGGTGAG/2 141 * 0 0 * * 0 0 TAATTAAAATTATTAATAAAAATAATTTTAATTTATTAATATTTTTATTTTTAAAAAAAATATAAATAAAAATATTTTATAAAATAAAAATAAATTTTATATTTTTATATATAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTTTAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,FFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFF,FF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF,FFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth10_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth10_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23204:1000_1:N:0:AACCTGAA+NTGGTGAG/1 77 * 0 0 * * 0 0 ANATATAAAAATATAAAATTTATTTTTATTTTATAAAATATTTTTATTTATATTTTTTTTAAAAATAAAAATATTAATAAATTAAAATTATTTTTATTAATAATTTTAATTAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACAACC F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23204:1000_2:N:0:AACCTGAA+NTGGTGAG/2 141 * 0 0 * * 0 0 TAATTAAAATTATTAATAAAAATAATTTTAATTTATTAATATTTTTATTTTTAAAAAAAATATAAATAAAAATATTTTATAAAATAAAAATAAATTTTATATTTTTATATATAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTTTAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,FFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFF,FF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF,FFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth10_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth10_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23204:1000_1:N:0:AACCTGAA+NTGGTGAG/1 77 * 0 0 * * 0 0 GNGTGTGAAGATGTGGAGTTTGTTTTTATTTTGTGGGGTGTTTTTGTTTGTATTTTTTTTAAAAATAAAGATATTGATAAATTGAAATTATTTTTGTTAATAGTTTTGGTTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATAATT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23204:1000_2:N:0:AACCTGAA+NTGGTGAG/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAACCAAAACTATTAACAAAAATAATTTCAATTTATCAATATCTTTATTTTTAAAAAAAATACAAACAAAAACACCCCACAAAATAAAAACAAACTCCACATCTTCACACACAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATCTCAC FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,FFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFF,FF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF,FFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth10_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth10_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth10_R2_001.fastq.gz Chromosomal sequence could not be extracted for A00387:192:GW191111360th:4:1101:26051:2049_1:N:0:GACCTGAA+TTGGTGAG RDEB01016445.1 1 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9550 (95.50%) aligned concordantly 0 times 311 (3.11%) aligned concordantly exactly 1 time 139 (1.39%) aligned concordantly >1 times 4.50% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9569 (95.69%) aligned concordantly 0 times 271 (2.71%) aligned concordantly exactly 1 time 160 (1.60%) aligned concordantly >1 times 4.31% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9582 (95.82%) aligned concordantly 0 times 287 (2.87%) aligned concordantly exactly 1 time 131 (1.31%) aligned concordantly >1 times 4.18% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9578 (95.78%) aligned concordantly 0 times 277 (2.77%) aligned concordantly exactly 1 time 145 (1.45%) aligned concordantly >1 times 4.22% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth10_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth10_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth10_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth10_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 1203 Mapping efficiency: 12.0% Sequence pairs with no alignments under any condition: 8609 Sequence pairs did not map uniquely: 188 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 1 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 296 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 328 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 298 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 280 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 72442 Total methylated C's in CpG context: 1402 Total methylated C's in CHG context: 164 Total methylated C's in CHH context: 496 Total methylated C's in Unknown context: 23 Total unmethylated C's in CpG context: 10143 Total unmethylated C's in CHG context: 12674 Total unmethylated C's in CHH context: 47563 Total unmethylated C's in Unknown context: 85 C methylated in CpG context: 12.1% C methylated in CHG context: 1.3% C methylated in CHH context: 1.0% C methylated in unknown context (CN or CHN): 21.3% Bismark completed in 0d 0h 0m 28s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth11_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth11_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-NCBI/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ chr RDEB01000001.1 (2051086 bp) chr RDEB01000002.1 (1931859 bp) chr RDEB01000003.1 (1909126 bp) chr RDEB01000004.1 (1580737 bp) chr RDEB01000005.1 (1562395 bp) chr RDEB01000006.1 (1561676 bp) chr RDEB01000007.1 (1468524 bp) chr RDEB01000008.1 (1449017 bp) chr RDEB01000009.1 (1288384 bp) chr RDEB01000010.1 (1267912 bp) chr RDEB01000011.1 (1226981 bp) chr RDEB01000012.1 (1203453 bp) chr RDEB01000013.1 (1196056 bp) chr RDEB01000014.1 (1161273 bp) chr RDEB01000015.1 (1155058 bp) chr RDEB01000016.1 (1154061 bp) chr RDEB01000017.1 (1126579 bp) chr RDEB01000018.1 (1112599 bp) chr RDEB01000019.1 (1105743 bp) chr RDEB01000020.1 (1047533 bp) chr RDEB01000021.1 (1042078 bp) chr RDEB01000022.1 (1027815 bp) chr RDEB01000023.1 (1026134 bp) chr RDEB01000024.1 (1017152 bp) chr RDEB01000025.1 (1013905 bp) chr RDEB01000026.1 (1011462 bp) chr RDEB01000027.1 (997532 bp) chr RDEB01000028.1 (977069 bp) chr RDEB01000029.1 (970043 bp) chr RDEB01000030.1 (959368 bp) chr RDEB01000031.1 (946529 bp) chr RDEB01000032.1 (941419 bp) chr RDEB01000033.1 (938138 bp) chr RDEB01000034.1 (914659 bp) chr RDEB01000035.1 (910955 bp) chr RDEB01000036.1 (910339 bp) chr RDEB01000037.1 (907300 bp) chr RDEB01000038.1 (906231 bp) chr RDEB01000039.1 (898108 bp) chr RDEB01000040.1 (891924 bp) chr RDEB01000041.1 (881484 bp) chr RDEB01000042.1 (873709 bp) chr RDEB01000043.1 (872072 bp) chr RDEB01000044.1 (860338 bp) chr RDEB01000045.1 (852749 bp) chr RDEB01000046.1 (845408 bp) chr RDEB01000047.1 (844817 bp) chr RDEB01000048.1 (841333 bp) chr RDEB01000049.1 (838287 bp) chr RDEB01000050.1 (837738 bp) chr RDEB01000051.1 (831214 bp) chr RDEB01000052.1 (821654 bp) chr RDEB01000053.1 (807789 bp) chr RDEB01000054.1 (804604 bp) chr RDEB01000055.1 (801587 bp) chr RDEB01000056.1 (789434 bp) chr RDEB01000057.1 (791485 bp) chr RDEB01000058.1 (791387 bp) chr RDEB01000059.1 (787461 bp) chr RDEB01000060.1 (785475 bp) chr RDEB01000061.1 (776585 bp) chr RDEB01000062.1 (765173 bp) chr RDEB01000063.1 (762781 bp) chr RDEB01000064.1 (756547 bp) chr RDEB01000065.1 (750445 bp) chr RDEB01000066.1 (750425 bp) chr RDEB01000067.1 (748716 bp) chr RDEB01000068.1 (744853 bp) chr RDEB01000069.1 (743781 bp) chr RDEB01000070.1 (736536 bp) chr RDEB01000071.1 (735828 bp) chr RDEB01000072.1 (735810 bp) chr RDEB01000073.1 (734211 bp) chr RDEB01000074.1 (727944 bp) chr RDEB01000075.1 (714259 bp) chr RDEB01000076.1 (710645 bp) chr RDEB01000077.1 (709730 bp) chr RDEB01000078.1 (706098 bp) chr RDEB01000079.1 (702875 bp) chr RDEB01000080.1 (697409 bp) chr RDEB01000081.1 (697225 bp) chr RDEB01000082.1 (696462 bp) chr RDEB01000083.1 (691775 bp) chr RDEB01000084.1 (689230 bp) chr RDEB01000085.1 (689149 bp) chr RDEB01000086.1 (685932 bp) chr RDEB01000087.1 (683424 bp) chr RDEB01000088.1 (683185 bp) chr RDEB01000089.1 (682905 bp) chr RDEB01000090.1 (680182 bp) chr RDEB01000091.1 (670709 bp) chr RDEB01000092.1 (670410 bp) chr RDEB01000093.1 (668648 bp) chr RDEB01000094.1 (668448 bp) chr RDEB01000095.1 (664016 bp) chr RDEB01000096.1 (659099 bp) chr RDEB01000097.1 (657048 bp) chr RDEB01000098.1 (656749 bp) chr RDEB01000099.1 (652702 bp) chr RDEB01000100.1 (651628 bp) chr RDEB01000101.1 (651613 bp) chr RDEB01000102.1 (650710 bp) chr RDEB01000103.1 (647275 bp) chr RDEB01000104.1 (646764 bp) chr RDEB01000105.1 (646518 bp) chr RDEB01000106.1 (646260 bp) chr RDEB01000107.1 (644930 bp) chr RDEB01000108.1 (642161 bp) chr RDEB01000109.1 (640493 bp) chr RDEB01000110.1 (638532 bp) chr RDEB01000111.1 (637376 bp) chr RDEB01000112.1 (633474 bp) chr RDEB01000113.1 (628029 bp) chr RDEB01000114.1 (627396 bp) chr RDEB01000115.1 (627002 bp) chr RDEB01000116.1 (626913 bp) chr RDEB01000117.1 (625838 bp) chr RDEB01000118.1 (622393 bp) chr RDEB01000119.1 (621998 bp) chr RDEB01000120.1 (621618 bp) chr RDEB01000121.1 (611718 bp) chr RDEB01000122.1 (599855 bp) chr RDEB01000123.1 (592820 bp) chr RDEB01000124.1 (590584 bp) chr RDEB01000125.1 (589842 bp) chr RDEB01000126.1 (585859 bp) chr RDEB01000127.1 (580331 bp) chr RDEB01000128.1 (579729 bp) chr RDEB01000129.1 (579409 bp) chr RDEB01000130.1 (578342 bp) chr RDEB01000131.1 (577645 bp) chr 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RDEB01027780.1 (790 bp) chr RDEB01027781.1 (774 bp) chr RDEB01027782.1 (773 bp) chr RDEB01027783.1 (773 bp) chr RDEB01027784.1 (771 bp) chr RDEB01027785.1 (764 bp) chr RDEB01027786.1 (757 bp) chr RDEB01027787.1 (756 bp) chr RDEB01027788.1 (750 bp) chr RDEB01027789.1 (749 bp) chr RDEB01027790.1 (749 bp) chr RDEB01027791.1 (743 bp) chr RDEB01027792.1 (741 bp) chr RDEB01027793.1 (738 bp) chr RDEB01027794.1 (730 bp) chr RDEB01027795.1 (729 bp) chr RDEB01027796.1 (726 bp) chr RDEB01027797.1 (725 bp) chr RDEB01027798.1 (724 bp) chr RDEB01027799.1 (724 bp) chr RDEB01027800.1 (721 bp) chr RDEB01027801.1 (713 bp) chr RDEB01027802.1 (711 bp) chr RDEB01027803.1 (710 bp) chr RDEB01027804.1 (708 bp) chr RDEB01027805.1 (708 bp) chr RDEB01027806.1 (706 bp) chr RDEB01027807.1 (703 bp) chr RDEB01027808.1 (700 bp) chr RDEB01027809.1 (696 bp) chr RDEB01027810.1 (693 bp) chr RDEB01027811.1 (692 bp) chr RDEB01027812.1 (690 bp) chr RDEB01027813.1 (687 bp) chr RDEB01027814.1 (684 bp) chr RDEB01027815.1 (683 bp) chr RDEB01027816.1 (683 bp) chr RDEB01027817.1 (683 bp) chr RDEB01027818.1 (677 bp) chr RDEB01027819.1 (676 bp) chr RDEB01027820.1 (669 bp) chr RDEB01027821.1 (655 bp) chr RDEB01027822.1 (648 bp) chr RDEB01027823.1 (647 bp) chr RDEB01027824.1 (644 bp) chr RDEB01027825.1 (642 bp) chr RDEB01027826.1 (635 bp) chr RDEB01027827.1 (632 bp) chr RDEB01027828.1 (630 bp) chr RDEB01027829.1 (628 bp) chr RDEB01027830.1 (627 bp) chr RDEB01027831.1 (626 bp) chr RDEB01027832.1 (625 bp) chr RDEB01027833.1 (622 bp) chr RDEB01027834.1 (618 bp) chr RDEB01027835.1 (611 bp) chr RDEB01027836.1 (605 bp) chr RDEB01027837.1 (603 bp) chr RDEB01027838.1 (602 bp) chr RDEB01027839.1 (602 bp) chr RDEB01027840.1 (595 bp) chr RDEB01027841.1 (587 bp) chr RDEB01027842.1 (573 bp) chr RDEB01027843.1 (580 bp) chr RDEB01027844.1 (580 bp) chr RDEB01027845.1 (579 bp) chr RDEB01027846.1 (578 bp) chr RDEB01027847.1 (577 bp) chr RDEB01027848.1 (569 bp) chr RDEB01027849.1 (563 bp) chr RDEB01027850.1 (562 bp) chr RDEB01027851.1 (561 bp) chr RDEB01027852.1 (551 bp) chr RDEB01027853.1 (546 bp) chr RDEB01027854.1 (543 bp) chr RDEB01027855.1 (536 bp) chr RDEB01027856.1 (536 bp) chr RDEB01027857.1 (531 bp) chr RDEB01027858.1 (529 bp) chr RDEB01027859.1 (527 bp) chr RDEB01027860.1 (517 bp) chr RDEB01027861.1 (517 bp) chr RDEB01027862.1 (513 bp) chr RDEB01027863.1 (509 bp) chr RDEB01027864.1 (508 bp) chr RDEB01027865.1 (507 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth11_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth11_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth11_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth11_R1_001.fastq.gz to Meth11_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth11_R1_001.fastq.gz to Meth11_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth11_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth11_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth11_R2_001.fastq.gz to Meth11_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth11_R2_001.fastq.gz to Meth11_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth11_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth11_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth11_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth11_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth11_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth11_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth11_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23095:1000_1:N:0:TCTCTACT+NGCGGTTC/1 77 * 0 0 * * 0 0 ANAAGGTATGGGTAAAGTAAGTTGTTAGTTGTGAATATTTTGTGAAAGAGTTGGTTTAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTTTTTATTATTTTGTATGTTGTTTTTTGTTTGAAAAGTGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG F#FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF,FFFFFFFFF,FFF::FFFFFFFF:,,::FFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23095:1000_2:N:0:TCTCTACT+NGCGGTTC/2 141 * 0 0 * * 0 0 AAACCAACTCTTTCACAAAATATTCACAACTAACAACTTACTTTACCCATACCTTTTAAATCAAAAAAACATCAAATAAAAACAAAATATAAACCACAATATAAATCTCAAAAAACACCATATCATTTCAATAAAAAAAAAAAAAAAAAA FFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF::FFFFFFFFFF:FFFFF:FF,FF,FFF,,FFFF:FFFF,FFFFFF,F,,F,:,,,:F,FF:,F,,F,,,:,,:,,,,,,::FFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth11_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth11_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23095:1000_1:N:0:TCTCTACT+NGCGGTTC/1 77 * 0 0 * * 0 0 ANAAAATATAAATAAAATAAATCATTAATCACAAATATTTTACAAAAAAATTAACCCAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACTCTCTACTATCTCATATACCATCTTCTACTTAAAAAACAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA F#FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF,FFFFFFFFF,FFF::FFFFFFFF:,,::FFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23095:1000_2:N:0:TCTCTACT+NGCGGTTC/2 141 * 0 0 * * 0 0 GGGTTAATTTTTTTGTAAAATATTTGTGATTAATGATTTATTTTATTTATATTTTTTAGATTGGAAGAGTGTTGGGTAGGGATAGAGTGTGAATTGTGGTGTAGGTTTTGGGGGGTGTTGTGTTGTTTTAATGGGGGGGGGGGGGGGGGG FFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF::FFFFFFFFFF:FFFFF:FF,FF,FFF,,FFFF:FFFF,FFFFFF,F,,F,:,,,:F,FF:,F,,F,,,:,,:,,,,,,::FFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth11_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth11_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23095:1000_1:N:0:TCTCTACT+NGCGGTTC/1 77 * 0 0 * * 0 0 ANAAAATATAAATAAAATAAATCATTAATCACAAATATTTTACAAAAAAATTAACCCAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACTCTCTACTATCTCATATACCATCTTCTACTTAAAAAACAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA F#FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF,FFFFFFFFF,FFF::FFFFFFFF:,,::FFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23095:1000_2:N:0:TCTCTACT+NGCGGTTC/2 141 * 0 0 * * 0 0 GGGTTAATTTTTTTGTAAAATATTTGTGATTAATGATTTATTTTATTTATATTTTTTAGATTGGAAGAGTGTTGGGTAGGGATAGAGTGTGAATTGTGGTGTAGGTTTTGGGGGGTGTTGTGTTGTTTTAATGGGGGGGGGGGGGGGGGG FFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF::FFFFFFFFFF:FFFFF:FF,FF,FFF,,FFFF:FFFF,FFFFFF,F,,F,:,,,:F,FF:,F,,F,,,:,,:,,,,,,::FFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth11_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth11_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23095:1000_1:N:0:TCTCTACT+NGCGGTTC/1 77 * 0 0 * * 0 0 ANAAGGTATGGGTAAAGTAAGTTGTTAGTTGTGAATATTTTGTGAAAGAGTTGGTTTAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTTTTTATTATTTTGTATGTTGTTTTTTGTTTGAAAAGTGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG F#FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF,FFFFFFFFF,FFF::FFFFFFFF:,,::FFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23095:1000_2:N:0:TCTCTACT+NGCGGTTC/2 141 * 0 0 * * 0 0 AAACCAACTCTTTCACAAAATATTCACAACTAACAACTTACTTTACCCATACCTTTTAAATCAAAAAAACATCAAATAAAAACAAAATATAAACCACAATATAAATCTCAAAAAACACCATATCATTTCAATAAAAAAAAAAAAAAAAAA FFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF::FFFFFFFFFF:FFFFF:FF,FF,FFF,,FFFF:FFFF,FFFFFF,F,,F,:,,,:F,FF:,F,,F,,,:,,:,,,,,,::FFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth11_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth11_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth11_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9519 (95.19%) aligned concordantly 0 times 341 (3.41%) aligned concordantly exactly 1 time 140 (1.40%) aligned concordantly >1 times 4.81% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9384 (93.84%) aligned concordantly 0 times 418 (4.18%) aligned concordantly exactly 1 time 198 (1.98%) aligned concordantly >1 times 6.16% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9433 (94.33%) aligned concordantly 0 times 376 (3.76%) aligned concordantly exactly 1 time 191 (1.91%) aligned concordantly >1 times 5.67% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9577 (95.77%) aligned concordantly 0 times 287 (2.87%) aligned concordantly exactly 1 time 136 (1.36%) aligned concordantly >1 times 4.23% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth11_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth11_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth11_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth11_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 1522 Mapping efficiency: 15.2% Sequence pairs with no alignments under any condition: 8295 Sequence pairs did not map uniquely: 183 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 293 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 454 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 410 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 365 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 91020 Total methylated C's in CpG context: 2133 Total methylated C's in CHG context: 196 Total methylated C's in CHH context: 696 Total methylated C's in Unknown context: 20 Total unmethylated C's in CpG context: 12972 Total unmethylated C's in CHG context: 16410 Total unmethylated C's in CHH context: 58613 Total unmethylated C's in Unknown context: 75 C methylated in CpG context: 14.1% C methylated in CHG context: 1.2% C methylated in CHH context: 1.2% C methylated in unknown context (CN or CHN): 21.1% Bismark completed in 0d 0h 0m 28s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth12_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth12_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-NCBI/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ chr RDEB01000001.1 (2051086 bp) chr RDEB01000002.1 (1931859 bp) chr RDEB01000003.1 (1909126 bp) chr RDEB01000004.1 (1580737 bp) chr RDEB01000005.1 (1562395 bp) chr RDEB01000006.1 (1561676 bp) chr RDEB01000007.1 (1468524 bp) chr RDEB01000008.1 (1449017 bp) chr RDEB01000009.1 (1288384 bp) chr RDEB01000010.1 (1267912 bp) chr RDEB01000011.1 (1226981 bp) chr RDEB01000012.1 (1203453 bp) chr RDEB01000013.1 (1196056 bp) chr RDEB01000014.1 (1161273 bp) chr RDEB01000015.1 (1155058 bp) chr RDEB01000016.1 (1154061 bp) chr RDEB01000017.1 (1126579 bp) chr RDEB01000018.1 (1112599 bp) chr RDEB01000019.1 (1105743 bp) chr RDEB01000020.1 (1047533 bp) chr RDEB01000021.1 (1042078 bp) chr RDEB01000022.1 (1027815 bp) chr RDEB01000023.1 (1026134 bp) chr RDEB01000024.1 (1017152 bp) chr RDEB01000025.1 (1013905 bp) chr RDEB01000026.1 (1011462 bp) chr RDEB01000027.1 (997532 bp) chr RDEB01000028.1 (977069 bp) chr RDEB01000029.1 (970043 bp) chr RDEB01000030.1 (959368 bp) chr RDEB01000031.1 (946529 bp) chr RDEB01000032.1 (941419 bp) chr RDEB01000033.1 (938138 bp) chr RDEB01000034.1 (914659 bp) chr RDEB01000035.1 (910955 bp) chr 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RDEB01027640.1 (1181 bp) chr RDEB01027641.1 (1178 bp) chr RDEB01027642.1 (1174 bp) chr RDEB01027643.1 (1169 bp) chr RDEB01027644.1 (1165 bp) chr RDEB01027645.1 (1162 bp) chr RDEB01027646.1 (1160 bp) chr RDEB01027647.1 (1160 bp) chr RDEB01027648.1 (1159 bp) chr RDEB01027649.1 (1156 bp) chr RDEB01027650.1 (1156 bp) chr RDEB01027651.1 (1153 bp) chr RDEB01027652.1 (1152 bp) chr RDEB01027653.1 (1149 bp) chr RDEB01027654.1 (1147 bp) chr RDEB01027655.1 (1144 bp) chr RDEB01027656.1 (1141 bp) chr RDEB01027657.1 (1139 bp) chr RDEB01027658.1 (1138 bp) chr RDEB01027659.1 (1137 bp) chr RDEB01027660.1 (1126 bp) chr RDEB01027661.1 (1133 bp) chr RDEB01027662.1 (1132 bp) chr RDEB01027663.1 (1131 bp) chr RDEB01027664.1 (1130 bp) chr RDEB01027665.1 (1126 bp) chr RDEB01027666.1 (1125 bp) chr RDEB01027667.1 (1124 bp) chr RDEB01027668.1 (1124 bp) chr RDEB01027669.1 (1122 bp) chr RDEB01027670.1 (1118 bp) chr RDEB01027671.1 (1114 bp) chr RDEB01027672.1 (1111 bp) chr RDEB01027673.1 (1096 bp) chr RDEB01027674.1 (1104 bp) chr RDEB01027675.1 (1096 bp) chr RDEB01027676.1 (1093 bp) chr RDEB01027677.1 (1092 bp) chr RDEB01027678.1 (1084 bp) chr RDEB01027679.1 (1084 bp) chr RDEB01027680.1 (1079 bp) chr RDEB01027681.1 (1078 bp) chr RDEB01027682.1 (1076 bp) chr RDEB01027683.1 (1076 bp) chr RDEB01027684.1 (1072 bp) chr RDEB01027685.1 (1071 bp) chr RDEB01027686.1 (1064 bp) chr RDEB01027687.1 (1063 bp) chr RDEB01027688.1 (1060 bp) chr RDEB01027689.1 (1055 bp) chr RDEB01027690.1 (1046 bp) chr RDEB01027691.1 (1042 bp) chr RDEB01027692.1 (1042 bp) chr RDEB01027693.1 (1041 bp) chr RDEB01027694.1 (1041 bp) chr RDEB01027695.1 (1040 bp) chr RDEB01027696.1 (1038 bp) chr RDEB01027697.1 (1029 bp) chr RDEB01027698.1 (1028 bp) chr RDEB01027699.1 (1026 bp) chr RDEB01027700.1 (1024 bp) chr RDEB01027701.1 (1019 bp) chr RDEB01027702.1 (1019 bp) chr RDEB01027703.1 (1012 bp) chr RDEB01027704.1 (1010 bp) chr RDEB01027705.1 (1009 bp) chr RDEB01027706.1 (1008 bp) chr RDEB01027707.1 (1004 bp) chr RDEB01027708.1 (1002 bp) chr RDEB01027709.1 (1001 bp) chr RDEB01027710.1 (998 bp) chr RDEB01027711.1 (996 bp) chr RDEB01027712.1 (991 bp) chr RDEB01027713.1 (989 bp) chr RDEB01027714.1 (986 bp) chr RDEB01027715.1 (981 bp) chr RDEB01027716.1 (980 bp) chr RDEB01027717.1 (979 bp) chr RDEB01027718.1 (979 bp) chr RDEB01027719.1 (979 bp) chr RDEB01027720.1 (976 bp) chr RDEB01027721.1 (968 bp) chr RDEB01027722.1 (963 bp) chr RDEB01027723.1 (960 bp) chr RDEB01027724.1 (956 bp) chr RDEB01027725.1 (952 bp) chr RDEB01027726.1 (945 bp) chr RDEB01027727.1 (944 bp) chr RDEB01027728.1 (942 bp) chr RDEB01027729.1 (942 bp) chr RDEB01027730.1 (939 bp) chr RDEB01027731.1 (937 bp) chr RDEB01027732.1 (932 bp) chr RDEB01027733.1 (931 bp) chr RDEB01027734.1 (925 bp) chr RDEB01027735.1 (920 bp) chr RDEB01027736.1 (918 bp) chr RDEB01027737.1 (917 bp) chr RDEB01027738.1 (915 bp) chr RDEB01027739.1 (911 bp) chr RDEB01027740.1 (910 bp) chr RDEB01027741.1 (901 bp) chr RDEB01027742.1 (897 bp) chr RDEB01027743.1 (891 bp) chr RDEB01027744.1 (890 bp) chr RDEB01027745.1 (890 bp) chr RDEB01027746.1 (888 bp) chr RDEB01027747.1 (883 bp) chr RDEB01027748.1 (879 bp) chr RDEB01027749.1 (875 bp) chr RDEB01027750.1 (874 bp) chr RDEB01027751.1 (869 bp) chr RDEB01027752.1 (866 bp) chr RDEB01027753.1 (866 bp) chr RDEB01027754.1 (864 bp) chr RDEB01027755.1 (863 bp) chr RDEB01027756.1 (852 bp) chr RDEB01027757.1 (852 bp) chr RDEB01027758.1 (850 bp) chr RDEB01027759.1 (848 bp) chr RDEB01027760.1 (846 bp) chr RDEB01027761.1 (841 bp) chr RDEB01027762.1 (840 bp) chr RDEB01027763.1 (827 bp) chr RDEB01027764.1 (827 bp) chr RDEB01027765.1 (825 bp) chr RDEB01027766.1 (821 bp) chr RDEB01027767.1 (817 bp) chr RDEB01027768.1 (816 bp) chr RDEB01027769.1 (813 bp) chr RDEB01027770.1 (811 bp) chr RDEB01027771.1 (809 bp) chr RDEB01027772.1 (808 bp) chr RDEB01027773.1 (806 bp) chr RDEB01027774.1 (806 bp) chr RDEB01027775.1 (798 bp) chr RDEB01027776.1 (796 bp) chr RDEB01027777.1 (795 bp) chr RDEB01027778.1 (795 bp) chr RDEB01027779.1 (791 bp) chr RDEB01027780.1 (790 bp) chr RDEB01027781.1 (774 bp) chr RDEB01027782.1 (773 bp) chr RDEB01027783.1 (773 bp) chr RDEB01027784.1 (771 bp) chr RDEB01027785.1 (764 bp) chr RDEB01027786.1 (757 bp) chr RDEB01027787.1 (756 bp) chr RDEB01027788.1 (750 bp) chr RDEB01027789.1 (749 bp) chr RDEB01027790.1 (749 bp) chr RDEB01027791.1 (743 bp) chr RDEB01027792.1 (741 bp) chr RDEB01027793.1 (738 bp) chr RDEB01027794.1 (730 bp) chr RDEB01027795.1 (729 bp) chr RDEB01027796.1 (726 bp) chr RDEB01027797.1 (725 bp) chr RDEB01027798.1 (724 bp) chr RDEB01027799.1 (724 bp) chr RDEB01027800.1 (721 bp) chr RDEB01027801.1 (713 bp) chr RDEB01027802.1 (711 bp) chr RDEB01027803.1 (710 bp) chr RDEB01027804.1 (708 bp) chr RDEB01027805.1 (708 bp) chr RDEB01027806.1 (706 bp) chr RDEB01027807.1 (703 bp) chr RDEB01027808.1 (700 bp) chr RDEB01027809.1 (696 bp) chr RDEB01027810.1 (693 bp) chr RDEB01027811.1 (692 bp) chr RDEB01027812.1 (690 bp) chr RDEB01027813.1 (687 bp) chr RDEB01027814.1 (684 bp) chr RDEB01027815.1 (683 bp) chr RDEB01027816.1 (683 bp) chr RDEB01027817.1 (683 bp) chr RDEB01027818.1 (677 bp) chr RDEB01027819.1 (676 bp) chr RDEB01027820.1 (669 bp) chr RDEB01027821.1 (655 bp) chr RDEB01027822.1 (648 bp) chr RDEB01027823.1 (647 bp) chr RDEB01027824.1 (644 bp) chr RDEB01027825.1 (642 bp) chr RDEB01027826.1 (635 bp) chr RDEB01027827.1 (632 bp) chr RDEB01027828.1 (630 bp) chr RDEB01027829.1 (628 bp) chr RDEB01027830.1 (627 bp) chr RDEB01027831.1 (626 bp) chr RDEB01027832.1 (625 bp) chr RDEB01027833.1 (622 bp) chr RDEB01027834.1 (618 bp) chr RDEB01027835.1 (611 bp) chr RDEB01027836.1 (605 bp) chr RDEB01027837.1 (603 bp) chr RDEB01027838.1 (602 bp) chr RDEB01027839.1 (602 bp) chr RDEB01027840.1 (595 bp) chr RDEB01027841.1 (587 bp) chr RDEB01027842.1 (573 bp) chr RDEB01027843.1 (580 bp) chr RDEB01027844.1 (580 bp) chr RDEB01027845.1 (579 bp) chr RDEB01027846.1 (578 bp) chr RDEB01027847.1 (577 bp) chr RDEB01027848.1 (569 bp) chr RDEB01027849.1 (563 bp) chr RDEB01027850.1 (562 bp) chr RDEB01027851.1 (561 bp) chr RDEB01027852.1 (551 bp) chr RDEB01027853.1 (546 bp) chr RDEB01027854.1 (543 bp) chr RDEB01027855.1 (536 bp) chr RDEB01027856.1 (536 bp) chr RDEB01027857.1 (531 bp) chr RDEB01027858.1 (529 bp) chr RDEB01027859.1 (527 bp) chr RDEB01027860.1 (517 bp) chr RDEB01027861.1 (517 bp) chr RDEB01027862.1 (513 bp) chr RDEB01027863.1 (509 bp) chr RDEB01027864.1 (508 bp) chr RDEB01027865.1 (507 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth12_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth12_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth12_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth12_R1_001.fastq.gz to Meth12_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth12_R1_001.fastq.gz to Meth12_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth12_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth12_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth12_R2_001.fastq.gz to Meth12_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth12_R2_001.fastq.gz to Meth12_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth12_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth12_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth12_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth12_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth12_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth12_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth12_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:22318:1000_1:N:0:CTCTCGTC+NATAACCT/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTTTTATTGATGAAGTATTATTATAAGTGTGATTTTTTGAATTATTAAATGATTTTGAAAAAATATTGTGTTGAGTTAATATAGGAATTTTGTTATTTTGGTAAATTTTTATGTTATTTATTTTTTAAGGTGATATGGAAATGTTTTT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFF:FFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:22318:1000_2:N:0:CTCTCGTC+NATAACCT/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAAAATCAAAAAATTCAATTTAATAACAAAAAAAATAAAAACATTTCCATATCACCTTAAAAAATAAATAACATAAAAATTTACCAAAATAACAAAATTCCTATATTAACTCAACACAATATTTTTTCAAAATCATTTAATAATTCAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth12_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth12_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:22318:1000_1:N:0:CTCTCGTC+NATAACCT/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTTTTATTAATAAAATATTATTATAAATATAATTTTTTAAATTATTAAATAATTTTAAAAAAATATTATATTAAATTAATATAAAAATTTTATTATTTTAATAAATTTTTATATTATTTATTTTTTAAAATAATATAAAAATATTTTT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFF:FFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:22318:1000_2:N:0:CTCTCGTC+NATAACCT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TAAAATTAAAAAATTTAATTTAATAATAAAAAAAATAAAAATATTTTTATATTATTTTAAAAAATAAATAATATAAAAATTTATTAAAATAATAAAATTTTTATATTAATTTAATATAATATTTTTTTAAAATTATTTAATAATTTAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth12_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth12_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:22318:1000_1:N:0:CTCTCGTC+NATAACCT/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTTTTATTAATAAAATATTATTATAAATATAATTTTTTAAATTATTAAATAATTTTAAAAAAATATTATATTAAATTAATATAAAAATTTTATTATTTTAATAAATTTTTATATTATTTATTTTTTAAAATAATATAAAAATATTTTT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFF:FFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:22318:1000_2:N:0:CTCTCGTC+NATAACCT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TAAAATTAAAAAATTTAATTTAATAATAAAAAAAATAAAAATATTTTTATATTATTTTAAAAAATAAATAATATAAAAATTTATTAAAATAATAAAATTTTTATATTAATTTAATATAATATTTTTTTAAAATTATTTAATAATTTAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth12_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth12_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:22318:1000_1:N:0:CTCTCGTC+NATAACCT/1 83 RDEB01025051.1_GA_converted 84876 42 150M = 84840 -186 AAAAACATTTCCATATCACCTTAAAAAATAAATAACATAAAAATTTACCAAAATAACAAAATTCCTATATTAACTCAACACAATATTTTTTCAAAATCATTTAATAATTCAAAAAATCACACTTATAATAATACTTCATCAATAAAAANA FFFFFFFF:FFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF#F AS:i:-1 XN:i:0 XM:i:1 XO:i:0 XG:i:0 NM:i:1 MD:Z:148A1 YS:i:0 YT:Z:CP A00387:192:GW191111360th:4:1101:22318:1000_2:N:0:CTCTCGTC+NATAACCT/2 163 RDEB01025051.1_GA_converted 84840 42 150M = 84876 186 CAAAATCAAAAAATTCAATTTAATAACAAAAAAAATAAAAACATTTCCATATCACCTTAAAAAATAAATAACATAAAAATTTACCAAAATAACAAAATTCCTATATTAACTCAACACAATATTTTTTCAAAATCATTTAATAATTCAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF AS:i:0 XN:i:0 XM:i:0 XO:i:0 XG:i:0 NM:i:0 MD:Z:150 YS:i:-1 YT:Z:CP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth12_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth12_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth12_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9535 (95.35%) aligned concordantly 0 times 325 (3.25%) aligned concordantly exactly 1 time 140 (1.40%) aligned concordantly >1 times 4.65% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9550 (95.50%) aligned concordantly 0 times 322 (3.22%) aligned concordantly exactly 1 time 128 (1.28%) aligned concordantly >1 times 4.50% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9589 (95.89%) aligned concordantly 0 times 289 (2.89%) aligned concordantly exactly 1 time 122 (1.22%) aligned concordantly >1 times 4.11% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9586 (95.86%) aligned concordantly 0 times 284 (2.84%) aligned concordantly exactly 1 time 130 (1.30%) aligned concordantly >1 times 4.14% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth12_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth12_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth12_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth12_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 1311 Mapping efficiency: 13.1% Sequence pairs with no alignments under any condition: 8551 Sequence pairs did not map uniquely: 138 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 313 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 346 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 351 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 301 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 77961 Total methylated C's in CpG context: 1862 Total methylated C's in CHG context: 150 Total methylated C's in CHH context: 545 Total methylated C's in Unknown context: 19 Total unmethylated C's in CpG context: 11027 Total unmethylated C's in CHG context: 13913 Total unmethylated C's in CHH context: 50464 Total unmethylated C's in Unknown context: 41 C methylated in CpG context: 14.4% C methylated in CHG context: 1.1% C methylated in CHH context: 1.1% C methylated in unknown context (CN or CHN): 31.7% Bismark completed in 0d 0h 0m 26s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth13_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth13_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-NCBI/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ chr RDEB01000001.1 (2051086 bp) chr RDEB01000002.1 (1931859 bp) chr RDEB01000003.1 (1909126 bp) chr RDEB01000004.1 (1580737 bp) chr RDEB01000005.1 (1562395 bp) chr RDEB01000006.1 (1561676 bp) chr RDEB01000007.1 (1468524 bp) chr RDEB01000008.1 (1449017 bp) chr RDEB01000009.1 (1288384 bp) chr RDEB01000010.1 (1267912 bp) chr RDEB01000011.1 (1226981 bp) chr RDEB01000012.1 (1203453 bp) chr RDEB01000013.1 (1196056 bp) chr RDEB01000014.1 (1161273 bp) chr RDEB01000015.1 (1155058 bp) chr RDEB01000016.1 (1154061 bp) chr RDEB01000017.1 (1126579 bp) chr RDEB01000018.1 (1112599 bp) chr RDEB01000019.1 (1105743 bp) chr RDEB01000020.1 (1047533 bp) chr RDEB01000021.1 (1042078 bp) chr RDEB01000022.1 (1027815 bp) chr RDEB01000023.1 (1026134 bp) chr RDEB01000024.1 (1017152 bp) chr RDEB01000025.1 (1013905 bp) chr RDEB01000026.1 (1011462 bp) chr RDEB01000027.1 (997532 bp) chr RDEB01000028.1 (977069 bp) chr RDEB01000029.1 (970043 bp) chr RDEB01000030.1 (959368 bp) chr RDEB01000031.1 (946529 bp) chr RDEB01000032.1 (941419 bp) chr RDEB01000033.1 (938138 bp) chr RDEB01000034.1 (914659 bp) chr RDEB01000035.1 (910955 bp) chr RDEB01000036.1 (910339 bp) chr RDEB01000037.1 (907300 bp) chr RDEB01000038.1 (906231 bp) chr RDEB01000039.1 (898108 bp) chr RDEB01000040.1 (891924 bp) chr RDEB01000041.1 (881484 bp) chr RDEB01000042.1 (873709 bp) chr RDEB01000043.1 (872072 bp) chr RDEB01000044.1 (860338 bp) chr RDEB01000045.1 (852749 bp) chr RDEB01000046.1 (845408 bp) chr RDEB01000047.1 (844817 bp) chr RDEB01000048.1 (841333 bp) chr RDEB01000049.1 (838287 bp) chr RDEB01000050.1 (837738 bp) chr RDEB01000051.1 (831214 bp) chr RDEB01000052.1 (821654 bp) chr RDEB01000053.1 (807789 bp) chr RDEB01000054.1 (804604 bp) chr RDEB01000055.1 (801587 bp) chr RDEB01000056.1 (789434 bp) chr RDEB01000057.1 (791485 bp) chr RDEB01000058.1 (791387 bp) chr RDEB01000059.1 (787461 bp) chr RDEB01000060.1 (785475 bp) chr RDEB01000061.1 (776585 bp) chr RDEB01000062.1 (765173 bp) chr RDEB01000063.1 (762781 bp) chr RDEB01000064.1 (756547 bp) chr RDEB01000065.1 (750445 bp) chr RDEB01000066.1 (750425 bp) chr RDEB01000067.1 (748716 bp) chr RDEB01000068.1 (744853 bp) chr RDEB01000069.1 (743781 bp) chr RDEB01000070.1 (736536 bp) chr RDEB01000071.1 (735828 bp) chr RDEB01000072.1 (735810 bp) chr RDEB01000073.1 (734211 bp) chr RDEB01000074.1 (727944 bp) chr RDEB01000075.1 (714259 bp) chr RDEB01000076.1 (710645 bp) chr RDEB01000077.1 (709730 bp) chr RDEB01000078.1 (706098 bp) chr RDEB01000079.1 (702875 bp) chr RDEB01000080.1 (697409 bp) chr RDEB01000081.1 (697225 bp) chr RDEB01000082.1 (696462 bp) chr RDEB01000083.1 (691775 bp) chr RDEB01000084.1 (689230 bp) chr RDEB01000085.1 (689149 bp) chr RDEB01000086.1 (685932 bp) chr RDEB01000087.1 (683424 bp) chr RDEB01000088.1 (683185 bp) chr RDEB01000089.1 (682905 bp) chr RDEB01000090.1 (680182 bp) chr RDEB01000091.1 (670709 bp) chr RDEB01000092.1 (670410 bp) chr RDEB01000093.1 (668648 bp) chr RDEB01000094.1 (668448 bp) chr RDEB01000095.1 (664016 bp) chr RDEB01000096.1 (659099 bp) chr RDEB01000097.1 (657048 bp) chr RDEB01000098.1 (656749 bp) chr RDEB01000099.1 (652702 bp) chr RDEB01000100.1 (651628 bp) chr RDEB01000101.1 (651613 bp) chr RDEB01000102.1 (650710 bp) chr RDEB01000103.1 (647275 bp) chr RDEB01000104.1 (646764 bp) chr RDEB01000105.1 (646518 bp) chr RDEB01000106.1 (646260 bp) chr RDEB01000107.1 (644930 bp) chr RDEB01000108.1 (642161 bp) chr RDEB01000109.1 (640493 bp) chr RDEB01000110.1 (638532 bp) chr RDEB01000111.1 (637376 bp) chr RDEB01000112.1 (633474 bp) chr RDEB01000113.1 (628029 bp) chr RDEB01000114.1 (627396 bp) chr RDEB01000115.1 (627002 bp) chr RDEB01000116.1 (626913 bp) chr RDEB01000117.1 (625838 bp) chr RDEB01000118.1 (622393 bp) chr RDEB01000119.1 (621998 bp) chr RDEB01000120.1 (621618 bp) chr RDEB01000121.1 (611718 bp) chr RDEB01000122.1 (599855 bp) chr RDEB01000123.1 (592820 bp) chr RDEB01000124.1 (590584 bp) chr RDEB01000125.1 (589842 bp) chr RDEB01000126.1 (585859 bp) chr RDEB01000127.1 (580331 bp) chr RDEB01000128.1 (579729 bp) chr RDEB01000129.1 (579409 bp) chr RDEB01000130.1 (578342 bp) chr RDEB01000131.1 (577645 bp) chr RDEB01000132.1 (576140 bp) chr RDEB01000133.1 (573363 bp) chr RDEB01000134.1 (565908 bp) chr RDEB01000135.1 (561686 bp) chr RDEB01000136.1 (560038 bp) chr RDEB01000137.1 (559863 bp) chr RDEB01000138.1 (559035 bp) chr RDEB01000139.1 (553853 bp) chr RDEB01000140.1 (551847 bp) chr RDEB01000141.1 (547763 bp) chr RDEB01000142.1 (546238 bp) chr RDEB01000143.1 (544418 bp) chr RDEB01000144.1 (537790 bp) chr RDEB01000145.1 (540332 bp) chr RDEB01000146.1 (533656 bp) chr RDEB01000147.1 (506090 bp) chr RDEB01000148.1 (528813 bp) chr RDEB01000149.1 (528059 bp) chr RDEB01000150.1 (524987 bp) chr RDEB01000151.1 (524665 bp) chr RDEB01000152.1 (524542 bp) chr RDEB01000153.1 (524444 bp) chr RDEB01000154.1 (523657 bp) chr RDEB01000155.1 (523369 bp) chr RDEB01000156.1 (522933 bp) chr RDEB01000157.1 (520578 bp) chr RDEB01000158.1 (520359 bp) chr RDEB01000159.1 (519025 bp) chr RDEB01000160.1 (518877 bp) chr RDEB01000161.1 (518178 bp) chr RDEB01000162.1 (517381 bp) chr RDEB01000163.1 (516614 bp) chr 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bp) chr RDEB01027816.1 (683 bp) chr RDEB01027817.1 (683 bp) chr RDEB01027818.1 (677 bp) chr RDEB01027819.1 (676 bp) chr RDEB01027820.1 (669 bp) chr RDEB01027821.1 (655 bp) chr RDEB01027822.1 (648 bp) chr RDEB01027823.1 (647 bp) chr RDEB01027824.1 (644 bp) chr RDEB01027825.1 (642 bp) chr RDEB01027826.1 (635 bp) chr RDEB01027827.1 (632 bp) chr RDEB01027828.1 (630 bp) chr RDEB01027829.1 (628 bp) chr RDEB01027830.1 (627 bp) chr RDEB01027831.1 (626 bp) chr RDEB01027832.1 (625 bp) chr RDEB01027833.1 (622 bp) chr RDEB01027834.1 (618 bp) chr RDEB01027835.1 (611 bp) chr RDEB01027836.1 (605 bp) chr RDEB01027837.1 (603 bp) chr RDEB01027838.1 (602 bp) chr RDEB01027839.1 (602 bp) chr RDEB01027840.1 (595 bp) chr RDEB01027841.1 (587 bp) chr RDEB01027842.1 (573 bp) chr RDEB01027843.1 (580 bp) chr RDEB01027844.1 (580 bp) chr RDEB01027845.1 (579 bp) chr RDEB01027846.1 (578 bp) chr RDEB01027847.1 (577 bp) chr RDEB01027848.1 (569 bp) chr RDEB01027849.1 (563 bp) chr RDEB01027850.1 (562 bp) chr RDEB01027851.1 (561 bp) chr RDEB01027852.1 (551 bp) chr RDEB01027853.1 (546 bp) chr RDEB01027854.1 (543 bp) chr RDEB01027855.1 (536 bp) chr RDEB01027856.1 (536 bp) chr RDEB01027857.1 (531 bp) chr RDEB01027858.1 (529 bp) chr RDEB01027859.1 (527 bp) chr RDEB01027860.1 (517 bp) chr RDEB01027861.1 (517 bp) chr RDEB01027862.1 (513 bp) chr RDEB01027863.1 (509 bp) chr RDEB01027864.1 (508 bp) chr RDEB01027865.1 (507 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth13_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth13_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth13_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth13_R1_001.fastq.gz to Meth13_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth13_R1_001.fastq.gz to Meth13_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth13_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth13_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth13_R2_001.fastq.gz to Meth13_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth13_R2_001.fastq.gz to Meth13_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth13_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth13_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth13_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth13_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth13_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth13_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth13_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21974:1000_1:N:0:CCAAGTCT+NAGGATGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNGTTGTGTTGAAGTATGGTATGTGTTGTAAAATATTTTGGTTGGTTTTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTTAAGTTTATTTTGTATGTTGTTTTTTGTTTGAAAAAAGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG ,#,:FFFFF,:FFF:FF:,FFFFF:FFFFFFFFFF,,F::FFFFFFFFF:FFFF::FFF:FF:FFF:FF::FFFFFF:FFFFFF::FFFFFFFFFFFFFF:F,:F,F:F,FF:FFFFFFF,,,,,FF,:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21974:1000_2:N:0:CCAAGTCT+NAGGATGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAAAACCAACCAAAATATTTTACAACACATACCATACTTCAACACAACCAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATTCATCCTTATATATATCTCAATAATCACCATATCATTAAAAAAAATTTTTTTCAAACTATTAACAAC ,FFFF,,FF::FFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFF,FFFFFFF:FFFFFFFF:FF,F::F:FFFFFF,::FFFFF:::FF:FFF:FFFF,FF,F:FF:,F:F,F:,F,FFF:,FFFFFFFFF,F,FF,,,F,,,,,,,,,,,::,, YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth13_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth13_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21974:1000_1:N:0:CCAAGTCT+NAGGATGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNATTATATTAAAATATAATATATATTATAAAATATTTTAATTAATTTCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACCCAAATCTATCTCATATACCATCTTCTACTTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA ,#,:FFFFF,:FFF:FF:,FFFFF:FFFFFFFFFF,,F::FFFFFFFFF:FFFF::FFF:FF:FFF:FF::FFFFFF:FFFFFF::FFFFFFFFFFFFFF:F,:F,F:F,FF:FFFFFFF,,,,,FF,:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21974:1000_2:N:0:CCAAGTCT+NAGGATGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGAAATTAATTAAAATATTTTATAATATATATTATATTTTAATATAATTAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTTATTTTTGTGTATATTTTGGTGGTTGTTGTATTATTAAAAAAAATTTTTTTTAAGTTGTTGATGGT ,FFFF,,FF::FFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFF,FFFFFFF:FFFFFFFF:FF,F::F:FFFFFF,::FFFFF:::FF:FFF:FFFF,FF,F:FF:,F:F,F:,F,FFF:,FFFFFFFFF,F,FF,,,F,,,,,,,,,,,::,, YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth13_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth13_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21974:1000_1:N:0:CCAAGTCT+NAGGATGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNATTATATTAAAATATAATATATATTATAAAATATTTTAATTAATTTCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACCCAAATCTATCTCATATACCATCTTCTACTTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA ,#,:FFFFF,:FFF:FF:,FFFFF:FFFFFFFFFF,,F::FFFFFFFFF:FFFF::FFF:FF:FFF:FF::FFFFFF:FFFFFF::FFFFFFFFFFFFFF:F,:F,F:F,FF:FFFFFFF,,,,,FF,:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21974:1000_2:N:0:CCAAGTCT+NAGGATGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGAAATTAATTAAAATATTTTATAATATATATTATATTTTAATATAATTAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTTATTTTTGTGTATATTTTGGTGGTTGTTGTATTATTAAAAAAAATTTTTTTTAAGTTGTTGATGGT ,FFFF,,FF::FFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFF,FFFFFFF:FFFFFFFF:FF,F::F:FFFFFF,::FFFFF:::FF:FFF:FFFF,FF,F:FF:,F:F,F:,F,FFF:,FFFFFFFFF,F,FF,,,F,,,,,,,,,,,::,, YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth13_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth13_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21974:1000_1:N:0:CCAAGTCT+NAGGATGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNGTTGTGTTGAAGTATGGTATGTGTTGTAAAATATTTTGGTTGGTTTTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTTAAGTTTATTTTGTATGTTGTTTTTTGTTTGAAAAAAGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG ,#,:FFFFF,:FFF:FF:,FFFFF:FFFFFFFFFF,,F::FFFFFFFFF:FFFF::FFF:FF:FFF:FF::FFFFFF:FFFFFF::FFFFFFFFFFFFFF:F,:F,F:F,FF:FFFFFFF,,,,,FF,:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21974:1000_2:N:0:CCAAGTCT+NAGGATGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAAAACCAACCAAAATATTTTACAACACATACCATACTTCAACACAACCAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATTCATCCTTATATATATCTCAATAATCACCATATCATTAAAAAAAATTTTTTTCAAACTATTAACAAC ,FFFF,,FF::FFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFF,FFFFFFF:FFFFFFFF:FF,F::F:FFFFFF,::FFFFF:::FF:FFF:FFFF,FF,F:FF:,F:F,F:,F,FFF:,FFFFFFFFF,F,FF,,,F,,,,,,,,,,,::,, YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth13_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth13_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth13_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9123 (91.23%) aligned concordantly 0 times 561 (5.61%) aligned concordantly exactly 1 time 316 (3.16%) aligned concordantly >1 times 8.77% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9144 (91.44%) aligned concordantly 0 times 519 (5.19%) aligned concordantly exactly 1 time 337 (3.37%) aligned concordantly >1 times 8.56% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9102 (91.02%) aligned concordantly 0 times 605 (6.05%) aligned concordantly exactly 1 time 293 (2.93%) aligned concordantly >1 times 8.98% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9155 (91.55%) aligned concordantly 0 times 520 (5.20%) aligned concordantly exactly 1 time 325 (3.25%) aligned concordantly >1 times 8.45% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth13_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth13_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth13_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth13_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 2457 Mapping efficiency: 24.6% Sequence pairs with no alignments under any condition: 7221 Sequence pairs did not map uniquely: 322 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 595 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 648 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 619 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 595 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 149228 Total methylated C's in CpG context: 3595 Total methylated C's in CHG context: 198 Total methylated C's in CHH context: 548 Total methylated C's in Unknown context: 17 Total unmethylated C's in CpG context: 28032 Total unmethylated C's in CHG context: 25768 Total unmethylated C's in CHH context: 91087 Total unmethylated C's in Unknown context: 86 C methylated in CpG context: 11.4% C methylated in CHG context: 0.8% C methylated in CHH context: 0.6% C methylated in unknown context (CN or CHN): 16.5% Bismark completed in 0d 0h 0m 27s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth14_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth14_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-NCBI/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ chr RDEB01000001.1 (2051086 bp) chr RDEB01000002.1 (1931859 bp) chr RDEB01000003.1 (1909126 bp) chr RDEB01000004.1 (1580737 bp) chr RDEB01000005.1 (1562395 bp) chr RDEB01000006.1 (1561676 bp) chr RDEB01000007.1 (1468524 bp) chr RDEB01000008.1 (1449017 bp) chr RDEB01000009.1 (1288384 bp) chr RDEB01000010.1 (1267912 bp) chr RDEB01000011.1 (1226981 bp) chr RDEB01000012.1 (1203453 bp) chr RDEB01000013.1 (1196056 bp) chr RDEB01000014.1 (1161273 bp) chr RDEB01000015.1 (1155058 bp) chr RDEB01000016.1 (1154061 bp) chr RDEB01000017.1 (1126579 bp) chr RDEB01000018.1 (1112599 bp) chr RDEB01000019.1 (1105743 bp) chr RDEB01000020.1 (1047533 bp) chr RDEB01000021.1 (1042078 bp) chr RDEB01000022.1 (1027815 bp) chr RDEB01000023.1 (1026134 bp) chr RDEB01000024.1 (1017152 bp) chr RDEB01000025.1 (1013905 bp) chr RDEB01000026.1 (1011462 bp) chr RDEB01000027.1 (997532 bp) chr RDEB01000028.1 (977069 bp) chr RDEB01000029.1 (970043 bp) chr RDEB01000030.1 (959368 bp) chr RDEB01000031.1 (946529 bp) chr RDEB01000032.1 (941419 bp) chr RDEB01000033.1 (938138 bp) chr RDEB01000034.1 (914659 bp) chr RDEB01000035.1 (910955 bp) chr 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(1104 bp) chr RDEB01027675.1 (1096 bp) chr RDEB01027676.1 (1093 bp) chr RDEB01027677.1 (1092 bp) chr RDEB01027678.1 (1084 bp) chr RDEB01027679.1 (1084 bp) chr RDEB01027680.1 (1079 bp) chr RDEB01027681.1 (1078 bp) chr RDEB01027682.1 (1076 bp) chr RDEB01027683.1 (1076 bp) chr RDEB01027684.1 (1072 bp) chr RDEB01027685.1 (1071 bp) chr RDEB01027686.1 (1064 bp) chr RDEB01027687.1 (1063 bp) chr RDEB01027688.1 (1060 bp) chr RDEB01027689.1 (1055 bp) chr RDEB01027690.1 (1046 bp) chr RDEB01027691.1 (1042 bp) chr RDEB01027692.1 (1042 bp) chr RDEB01027693.1 (1041 bp) chr RDEB01027694.1 (1041 bp) chr RDEB01027695.1 (1040 bp) chr RDEB01027696.1 (1038 bp) chr RDEB01027697.1 (1029 bp) chr RDEB01027698.1 (1028 bp) chr RDEB01027699.1 (1026 bp) chr RDEB01027700.1 (1024 bp) chr RDEB01027701.1 (1019 bp) chr RDEB01027702.1 (1019 bp) chr RDEB01027703.1 (1012 bp) chr RDEB01027704.1 (1010 bp) chr RDEB01027705.1 (1009 bp) chr RDEB01027706.1 (1008 bp) chr RDEB01027707.1 (1004 bp) chr RDEB01027708.1 (1002 bp) chr RDEB01027709.1 (1001 bp) chr RDEB01027710.1 (998 bp) chr RDEB01027711.1 (996 bp) chr RDEB01027712.1 (991 bp) chr RDEB01027713.1 (989 bp) chr RDEB01027714.1 (986 bp) chr RDEB01027715.1 (981 bp) chr RDEB01027716.1 (980 bp) chr RDEB01027717.1 (979 bp) chr RDEB01027718.1 (979 bp) chr RDEB01027719.1 (979 bp) chr RDEB01027720.1 (976 bp) chr RDEB01027721.1 (968 bp) chr RDEB01027722.1 (963 bp) chr RDEB01027723.1 (960 bp) chr RDEB01027724.1 (956 bp) chr RDEB01027725.1 (952 bp) chr RDEB01027726.1 (945 bp) chr RDEB01027727.1 (944 bp) chr RDEB01027728.1 (942 bp) chr RDEB01027729.1 (942 bp) chr RDEB01027730.1 (939 bp) chr RDEB01027731.1 (937 bp) chr RDEB01027732.1 (932 bp) chr RDEB01027733.1 (931 bp) chr RDEB01027734.1 (925 bp) chr RDEB01027735.1 (920 bp) chr RDEB01027736.1 (918 bp) chr RDEB01027737.1 (917 bp) chr RDEB01027738.1 (915 bp) chr RDEB01027739.1 (911 bp) chr RDEB01027740.1 (910 bp) chr RDEB01027741.1 (901 bp) chr RDEB01027742.1 (897 bp) chr RDEB01027743.1 (891 bp) chr RDEB01027744.1 (890 bp) chr RDEB01027745.1 (890 bp) chr RDEB01027746.1 (888 bp) chr RDEB01027747.1 (883 bp) chr RDEB01027748.1 (879 bp) chr RDEB01027749.1 (875 bp) chr RDEB01027750.1 (874 bp) chr RDEB01027751.1 (869 bp) chr RDEB01027752.1 (866 bp) chr RDEB01027753.1 (866 bp) chr RDEB01027754.1 (864 bp) chr RDEB01027755.1 (863 bp) chr RDEB01027756.1 (852 bp) chr RDEB01027757.1 (852 bp) chr RDEB01027758.1 (850 bp) chr RDEB01027759.1 (848 bp) chr RDEB01027760.1 (846 bp) chr RDEB01027761.1 (841 bp) chr RDEB01027762.1 (840 bp) chr RDEB01027763.1 (827 bp) chr RDEB01027764.1 (827 bp) chr RDEB01027765.1 (825 bp) chr RDEB01027766.1 (821 bp) chr RDEB01027767.1 (817 bp) chr RDEB01027768.1 (816 bp) chr RDEB01027769.1 (813 bp) chr RDEB01027770.1 (811 bp) chr RDEB01027771.1 (809 bp) chr RDEB01027772.1 (808 bp) chr RDEB01027773.1 (806 bp) chr RDEB01027774.1 (806 bp) chr RDEB01027775.1 (798 bp) chr RDEB01027776.1 (796 bp) chr RDEB01027777.1 (795 bp) chr RDEB01027778.1 (795 bp) chr RDEB01027779.1 (791 bp) chr 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bp) chr RDEB01027816.1 (683 bp) chr RDEB01027817.1 (683 bp) chr RDEB01027818.1 (677 bp) chr RDEB01027819.1 (676 bp) chr RDEB01027820.1 (669 bp) chr RDEB01027821.1 (655 bp) chr RDEB01027822.1 (648 bp) chr RDEB01027823.1 (647 bp) chr RDEB01027824.1 (644 bp) chr RDEB01027825.1 (642 bp) chr RDEB01027826.1 (635 bp) chr RDEB01027827.1 (632 bp) chr RDEB01027828.1 (630 bp) chr RDEB01027829.1 (628 bp) chr RDEB01027830.1 (627 bp) chr RDEB01027831.1 (626 bp) chr RDEB01027832.1 (625 bp) chr RDEB01027833.1 (622 bp) chr RDEB01027834.1 (618 bp) chr RDEB01027835.1 (611 bp) chr RDEB01027836.1 (605 bp) chr RDEB01027837.1 (603 bp) chr RDEB01027838.1 (602 bp) chr RDEB01027839.1 (602 bp) chr RDEB01027840.1 (595 bp) chr RDEB01027841.1 (587 bp) chr RDEB01027842.1 (573 bp) chr RDEB01027843.1 (580 bp) chr RDEB01027844.1 (580 bp) chr RDEB01027845.1 (579 bp) chr RDEB01027846.1 (578 bp) chr RDEB01027847.1 (577 bp) chr RDEB01027848.1 (569 bp) chr RDEB01027849.1 (563 bp) chr RDEB01027850.1 (562 bp) chr RDEB01027851.1 (561 bp) chr RDEB01027852.1 (551 bp) chr RDEB01027853.1 (546 bp) chr RDEB01027854.1 (543 bp) chr RDEB01027855.1 (536 bp) chr RDEB01027856.1 (536 bp) chr RDEB01027857.1 (531 bp) chr RDEB01027858.1 (529 bp) chr RDEB01027859.1 (527 bp) chr RDEB01027860.1 (517 bp) chr RDEB01027861.1 (517 bp) chr RDEB01027862.1 (513 bp) chr RDEB01027863.1 (509 bp) chr RDEB01027864.1 (508 bp) chr RDEB01027865.1 (507 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth14_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth14_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth14_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth14_R1_001.fastq.gz to Meth14_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth14_R1_001.fastq.gz to Meth14_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth14_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth14_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth14_R2_001.fastq.gz to Meth14_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth14_R2_001.fastq.gz to Meth14_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth14_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth14_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth14_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth14_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth14_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth14_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth14_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21468:1000_1:N:0:TTAGACTC+NGAAGCAG/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNATATATAAAAATAATTTTTGAATTTTAAATTTTAATATTGTAATTGTTTATTATTGATTTTTATATAAAAATAAATAAAAAATTGAATTAAATTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTTAGATTTATTTTGTATGT F#FFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21468:1000_2:N:0:TTAGACTC+NGAAGCAG/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAATTTAATTCAATTTTTTATTTATTTTTATATAAAAATCAATAATAAACAATTACAATATTAAAATTTAAAATTCAAAAATTATTTTTATATATCAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATCTACTTCCATATAAATCTCA FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF::FFFFF:FFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF::FF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF,FFFFF:FFFFFFF,FFF,FFFFFFFFF,FF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth14_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth14_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21468:1000_1:N:0:TTAGACTC+NGAAGCAG/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNATATATAAAAATAATTTTCAAACTCTAAACCTTAATACCATAACCACTTATTATCAATCTTCACATAAAAATAAACAAAAAACCAAATCAAACCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACTTAAACTCATCTCATATAC F#FFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21468:1000_2:N:0:TTAGACTC+NGAAGCAG/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGGTTTGATTTGGTTTTTTGTTTATTTTTATGTGAAGATTGATAATAAGTGGTTATGGTATTAAGGTTTAGAGTTTGAAAATTATTTTTATATATTGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTTGTTTTTGTGTAGATTTTG FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF::FFFFF:FFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF::FF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF,FFFFF:FFFFFFF,FFF,FFFFFFFFF,FF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth14_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth14_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21468:1000_1:N:0:TTAGACTC+NGAAGCAG/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNATATATAAAAATAATTTTCAAACTCTAAACCTTAATACCATAACCACTTATTATCAATCTTCACATAAAAATAAACAAAAAACCAAATCAAACCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACTTAAACTCATCTCATATAC F#FFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21468:1000_2:N:0:TTAGACTC+NGAAGCAG/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGGTTTGATTTGGTTTTTTGTTTATTTTTATGTGAAGATTGATAATAAGTGGTTATGGTATTAAGGTTTAGAGTTTGAAAATTATTTTTATATATTGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTTGTTTTTGTGTAGATTTTG FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF::FFFFF:FFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF::FF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF,FFFFF:FFFFFFF,FFF,FFFFFFFFF,FF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth14_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth14_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21468:1000_1:N:0:TTAGACTC+NGAAGCAG/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNATATATAAAAATAATTTTTGAATTTTAAATTTTAATATTGTAATTGTTTATTATTGATTTTTATATAAAAATAAATAAAAAATTGAATTAAATTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTTAGATTTATTTTGTATGT F#FFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21468:1000_2:N:0:TTAGACTC+NGAAGCAG/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAATTTAATTCAATTTTTTATTTATTTTTATATAAAAATCAATAATAAACAATTACAATATTAAAATTTAAAATTCAAAAATTATTTTTATATATCAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATCTACTTCCATATAAATCTCA FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF::FFFFF:FFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF::FF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF,FFFFF:FFFFFFF,FFF,FFFFFFFFF,FF YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth14_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth14_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth14_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9300 (93.00%) aligned concordantly 0 times 458 (4.58%) aligned concordantly exactly 1 time 242 (2.42%) aligned concordantly >1 times 7.00% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9301 (93.01%) aligned concordantly 0 times 461 (4.61%) aligned concordantly exactly 1 time 238 (2.38%10000) aligned concordantly >1 times reads; of these: 6.99 % overall alignment rate10000 (100.00%) were paired; of these: 9193 (91.93%) aligned concordantly 0 times 507 (5.07%) aligned concordantly exactly 1 time 300 (3.00%) aligned concordantly >1 times 8.07% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9195 (91.95%) aligned concordantly 0 times 480 (4.80%) aligned concordantly exactly 1 time 325 (3.25%) aligned concordantly >1 times 8.05% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth14_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth14_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth14_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth14_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 2134 Mapping efficiency: 21.3% Sequence pairs with no alignments under any condition: 7604 Sequence pairs did not map uniquely: 262 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 563 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 508 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 502 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 561 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 129470 Total methylated C's in CpG context: 3274 Total methylated C's in CHG context: 208 Total methylated C's in CHH context: 555 Total methylated C's in Unknown context: 22 Total unmethylated C's in CpG context: 25305 Total unmethylated C's in CHG context: 22226 Total unmethylated C's in CHH context: 77902 Total unmethylated C's in Unknown context: 80 C methylated in CpG context: 11.5% C methylated in CHG context: 0.9% C methylated in CHH context: 0.7% C methylated in unknown context (CN or CHN): 21.6% Bismark completed in 0d 0h 0m 26s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth15_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth15_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-NCBI/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ chr RDEB01000001.1 (2051086 bp) chr RDEB01000002.1 (1931859 bp) chr RDEB01000003.1 (1909126 bp) chr RDEB01000004.1 (1580737 bp) chr RDEB01000005.1 (1562395 bp) chr RDEB01000006.1 (1561676 bp) chr RDEB01000007.1 (1468524 bp) chr RDEB01000008.1 (1449017 bp) chr RDEB01000009.1 (1288384 bp) chr RDEB01000010.1 (1267912 bp) chr RDEB01000011.1 (1226981 bp) chr RDEB01000012.1 (1203453 bp) chr RDEB01000013.1 (1196056 bp) chr RDEB01000014.1 (1161273 bp) chr RDEB01000015.1 (1155058 bp) chr RDEB01000016.1 (1154061 bp) chr RDEB01000017.1 (1126579 bp) chr RDEB01000018.1 (1112599 bp) chr RDEB01000019.1 (1105743 bp) chr RDEB01000020.1 (1047533 bp) chr RDEB01000021.1 (1042078 bp) chr RDEB01000022.1 (1027815 bp) chr RDEB01000023.1 (1026134 bp) chr RDEB01000024.1 (1017152 bp) chr RDEB01000025.1 (1013905 bp) chr RDEB01000026.1 (1011462 bp) chr RDEB01000027.1 (997532 bp) chr RDEB01000028.1 (977069 bp) chr RDEB01000029.1 (970043 bp) chr RDEB01000030.1 (959368 bp) chr RDEB01000031.1 (946529 bp) chr RDEB01000032.1 (941419 bp) chr RDEB01000033.1 (938138 bp) chr RDEB01000034.1 (914659 bp) chr RDEB01000035.1 (910955 bp) chr RDEB01000036.1 (910339 bp) chr RDEB01000037.1 (907300 bp) chr RDEB01000038.1 (906231 bp) chr RDEB01000039.1 (898108 bp) chr RDEB01000040.1 (891924 bp) chr RDEB01000041.1 (881484 bp) chr RDEB01000042.1 (873709 bp) chr RDEB01000043.1 (872072 bp) chr RDEB01000044.1 (860338 bp) chr RDEB01000045.1 (852749 bp) chr RDEB01000046.1 (845408 bp) chr RDEB01000047.1 (844817 bp) chr RDEB01000048.1 (841333 bp) chr RDEB01000049.1 (838287 bp) chr RDEB01000050.1 (837738 bp) chr RDEB01000051.1 (831214 bp) chr RDEB01000052.1 (821654 bp) chr RDEB01000053.1 (807789 bp) chr RDEB01000054.1 (804604 bp) chr RDEB01000055.1 (801587 bp) chr RDEB01000056.1 (789434 bp) chr RDEB01000057.1 (791485 bp) chr RDEB01000058.1 (791387 bp) chr RDEB01000059.1 (787461 bp) chr RDEB01000060.1 (785475 bp) chr RDEB01000061.1 (776585 bp) chr RDEB01000062.1 (765173 bp) chr RDEB01000063.1 (762781 bp) chr RDEB01000064.1 (756547 bp) chr RDEB01000065.1 (750445 bp) chr RDEB01000066.1 (750425 bp) chr RDEB01000067.1 (748716 bp) chr RDEB01000068.1 (744853 bp) chr RDEB01000069.1 (743781 bp) chr RDEB01000070.1 (736536 bp) chr RDEB01000071.1 (735828 bp) chr RDEB01000072.1 (735810 bp) chr RDEB01000073.1 (734211 bp) chr RDEB01000074.1 (727944 bp) chr RDEB01000075.1 (714259 bp) chr RDEB01000076.1 (710645 bp) chr RDEB01000077.1 (709730 bp) chr RDEB01000078.1 (706098 bp) chr RDEB01000079.1 (702875 bp) chr RDEB01000080.1 (697409 bp) chr RDEB01000081.1 (697225 bp) chr RDEB01000082.1 (696462 bp) chr RDEB01000083.1 (691775 bp) chr RDEB01000084.1 (689230 bp) chr RDEB01000085.1 (689149 bp) chr RDEB01000086.1 (685932 bp) chr RDEB01000087.1 (683424 bp) chr RDEB01000088.1 (683185 bp) chr RDEB01000089.1 (682905 bp) chr RDEB01000090.1 (680182 bp) chr RDEB01000091.1 (670709 bp) chr RDEB01000092.1 (670410 bp) chr RDEB01000093.1 (668648 bp) chr RDEB01000094.1 (668448 bp) chr RDEB01000095.1 (664016 bp) chr RDEB01000096.1 (659099 bp) chr RDEB01000097.1 (657048 bp) chr RDEB01000098.1 (656749 bp) chr RDEB01000099.1 (652702 bp) chr RDEB01000100.1 (651628 bp) chr RDEB01000101.1 (651613 bp) chr RDEB01000102.1 (650710 bp) chr RDEB01000103.1 (647275 bp) chr RDEB01000104.1 (646764 bp) chr RDEB01000105.1 (646518 bp) chr RDEB01000106.1 (646260 bp) chr RDEB01000107.1 (644930 bp) chr RDEB01000108.1 (642161 bp) chr RDEB01000109.1 (640493 bp) chr RDEB01000110.1 (638532 bp) chr RDEB01000111.1 (637376 bp) chr RDEB01000112.1 (633474 bp) chr RDEB01000113.1 (628029 bp) chr RDEB01000114.1 (627396 bp) chr RDEB01000115.1 (627002 bp) chr RDEB01000116.1 (626913 bp) chr RDEB01000117.1 (625838 bp) chr RDEB01000118.1 (622393 bp) chr RDEB01000119.1 (621998 bp) chr RDEB01000120.1 (621618 bp) chr RDEB01000121.1 (611718 bp) chr RDEB01000122.1 (599855 bp) chr RDEB01000123.1 (592820 bp) chr RDEB01000124.1 (590584 bp) chr RDEB01000125.1 (589842 bp) chr RDEB01000126.1 (585859 bp) chr RDEB01000127.1 (580331 bp) chr RDEB01000128.1 (579729 bp) chr RDEB01000129.1 (579409 bp) chr RDEB01000130.1 (578342 bp) chr RDEB01000131.1 (577645 bp) chr RDEB01000132.1 (576140 bp) chr RDEB01000133.1 (573363 bp) chr RDEB01000134.1 (565908 bp) chr RDEB01000135.1 (561686 bp) chr RDEB01000136.1 (560038 bp) chr RDEB01000137.1 (559863 bp) chr RDEB01000138.1 (559035 bp) chr RDEB01000139.1 (553853 bp) chr RDEB01000140.1 (551847 bp) chr RDEB01000141.1 (547763 bp) chr RDEB01000142.1 (546238 bp) chr RDEB01000143.1 (544418 bp) chr RDEB01000144.1 (537790 bp) chr RDEB01000145.1 (540332 bp) chr RDEB01000146.1 (533656 bp) chr RDEB01000147.1 (506090 bp) chr RDEB01000148.1 (528813 bp) chr RDEB01000149.1 (528059 bp) chr RDEB01000150.1 (524987 bp) chr RDEB01000151.1 (524665 bp) chr RDEB01000152.1 (524542 bp) chr RDEB01000153.1 (524444 bp) chr RDEB01000154.1 (523657 bp) chr RDEB01000155.1 (523369 bp) chr RDEB01000156.1 (522933 bp) chr RDEB01000157.1 (520578 bp) chr RDEB01000158.1 (520359 bp) chr RDEB01000159.1 (519025 bp) chr RDEB01000160.1 (518877 bp) chr RDEB01000161.1 (518178 bp) chr RDEB01000162.1 (517381 bp) chr RDEB01000163.1 (516614 bp) chr 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bp) chr RDEB01027816.1 (683 bp) chr RDEB01027817.1 (683 bp) chr RDEB01027818.1 (677 bp) chr RDEB01027819.1 (676 bp) chr RDEB01027820.1 (669 bp) chr RDEB01027821.1 (655 bp) chr RDEB01027822.1 (648 bp) chr RDEB01027823.1 (647 bp) chr RDEB01027824.1 (644 bp) chr RDEB01027825.1 (642 bp) chr RDEB01027826.1 (635 bp) chr RDEB01027827.1 (632 bp) chr RDEB01027828.1 (630 bp) chr RDEB01027829.1 (628 bp) chr RDEB01027830.1 (627 bp) chr RDEB01027831.1 (626 bp) chr RDEB01027832.1 (625 bp) chr RDEB01027833.1 (622 bp) chr RDEB01027834.1 (618 bp) chr RDEB01027835.1 (611 bp) chr RDEB01027836.1 (605 bp) chr RDEB01027837.1 (603 bp) chr RDEB01027838.1 (602 bp) chr RDEB01027839.1 (602 bp) chr RDEB01027840.1 (595 bp) chr RDEB01027841.1 (587 bp) chr RDEB01027842.1 (573 bp) chr RDEB01027843.1 (580 bp) chr RDEB01027844.1 (580 bp) chr RDEB01027845.1 (579 bp) chr RDEB01027846.1 (578 bp) chr RDEB01027847.1 (577 bp) chr RDEB01027848.1 (569 bp) chr RDEB01027849.1 (563 bp) chr RDEB01027850.1 (562 bp) chr RDEB01027851.1 (561 bp) chr RDEB01027852.1 (551 bp) chr RDEB01027853.1 (546 bp) chr RDEB01027854.1 (543 bp) chr RDEB01027855.1 (536 bp) chr RDEB01027856.1 (536 bp) chr RDEB01027857.1 (531 bp) chr RDEB01027858.1 (529 bp) chr RDEB01027859.1 (527 bp) chr RDEB01027860.1 (517 bp) chr RDEB01027861.1 (517 bp) chr RDEB01027862.1 (513 bp) chr RDEB01027863.1 (509 bp) chr RDEB01027864.1 (508 bp) chr RDEB01027865.1 (507 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth15_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth15_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth15_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth15_R1_001.fastq.gz to Meth15_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth15_R1_001.fastq.gz to Meth15_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth15_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth15_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth15_R2_001.fastq.gz to Meth15_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth15_R2_001.fastq.gz to Meth15_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth15_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth15_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth15_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth15_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth15_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth15_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth15_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21793:1000_1:N:0:GGCTTAAG+NCGTGACC/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNGGATTTGGTGTTATATGTGGGTTGAGTTTGTTGGTTTATTATTTTGTATTGAGAGGTTTTTTTTATGTATTTTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATGGTTTAAGATTTTGTATGTTGTTTTTTGTTTGAAAAAAGG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,,, YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21793:1000_2:N:0:GGCTTAAG+NCGTGACC/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAAAATACATAAAAAAAACCTCTCAATACAAAATAATAAACCAACAAACTCAACCCACATATAACACCAAATCCCAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATAATCACAAATATAAATCTCAAAAATCACCAACTCATTAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,FFF:FF,FF,,F:FF,,,F:F,,:,, YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth15_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth15_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21793:1000_1:N:0:GGCTTAAG+NCGTGACC/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNAAATTTAATATTATATATAAATTAAATTTATTAATTTATTATTTTATATTAAAAAATTTTTTTTATATATTTCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACAACTTAAAATCTCATATACCATCTTCTACTTAAAAAAAAA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,,, YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21793:1000_2:N:0:GGCTTAAG+NCGTGACC/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGAAATATATAAAAAAAATTTTTTAATATAAAATAATAAATTAATAAATTTAATTTATATATAATATTAAATTTTAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTGGTTATGAGTGTAGATTTTGGGGGTTGTTGGTTTATTAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,FFF:FF,FF,,F:FF,,,F:F,,:,, YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth15_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth15_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21793:1000_1:N:0:GGCTTAAG+NCGTGACC/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNAAATTTAATATTATATATAAATTAAATTTATTAATTTATTATTTTATATTAAAAAATTTTTTTTATATATTTCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACAACTTAAAATCTCATATACCATCTTCTACTTAAAAAAAAA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,,, YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21793:1000_2:N:0:GGCTTAAG+NCGTGACC/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGAAATATATAAAAAAAATTTTTTAATATAAAATAATAAATTAATAAATTTAATTTATATATAATATTAAATTTTAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTGGTTATGAGTGTAGATTTTGGGGGTTGTTGGTTTATTAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,FFF:FF,FF,,F:FF,,,F:F,,:,, YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth15_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth15_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21793:1000_1:N:0:GGCTTAAG+NCGTGACC/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNGGATTTGGTGTTATATGTGGGTTGAGTTTGTTGGTTTATTATTTTGTATTGAGAGGTTTTTTTTATGTATTTTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATGGTTTAAGATTTTGTATGTTGTTTTTTGTTTGAAAAAAGG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,,, YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21793:1000_2:N:0:GGCTTAAG+NCGTGACC/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAAAATACATAAAAAAAACCTCTCAATACAAAATAATAAACCAACAAACTCAACCCACATATAACACCAAATCCCAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATAATCACAAATATAAATCTCAAAAATCACCAACTCATTAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,FFF:FF,FF,,F:FF,,,F:F,,:,, YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth15_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth15_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth15_R2_001.fastq.gz Chromosomal sequence could not be extracted for A00387:192:GW191111360th:4:1101:12427:1877_1:N:0:GGCTTAAG+TCGTGACC RDEB01001302.1 1 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9347 (93.47%) aligned concordantly 0 times 383 (3.83%) aligned concordantly exactly 1 time 270 (2.70%) aligned concordantly >1 times 6.53% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9186 (91.86%) aligned concordantly 0 times 530 (5.30%) aligned concordantly exactly 1 time 284 (2.84%) aligned concordantly >1 times 8.14% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9195 (91.95%) aligned concordantly 0 times 516 (5.16%) aligned concordantly exactly 1 time 289 (2.89%) aligned concordantly >1 times 8.05% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9302 (93.02%) aligned concordantly 0 times 434 (4.34%) aligned concordantly exactly 1 time 264 (2.64%) aligned concordantly >1 times 6.98% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth15_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth15_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth15_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth15_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 2054 Mapping efficiency: 20.5% Sequence pairs with no alignments under any condition: 7650 Sequence pairs did not map uniquely: 296 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 1 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 439 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 575 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 563 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 476 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 124446 Total methylated C's in CpG context: 2905 Total methylated C's in CHG context: 309 Total methylated C's in CHH context: 882 Total methylated C's in Unknown context: 32 Total unmethylated C's in CpG context: 23174 Total unmethylated C's in CHG context: 21596 Total unmethylated C's in CHH context: 75580 Total unmethylated C's in Unknown context: 76 C methylated in CpG context: 11.1% C methylated in CHG context: 1.4% C methylated in CHH context: 1.2% C methylated in unknown context (CN or CHN): 29.6% Bismark completed in 0d 0h 0m 27s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth16_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth16_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-NCBI/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ chr RDEB01000001.1 (2051086 bp) chr RDEB01000002.1 (1931859 bp) chr RDEB01000003.1 (1909126 bp) chr RDEB01000004.1 (1580737 bp) 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(1104 bp) chr RDEB01027675.1 (1096 bp) chr RDEB01027676.1 (1093 bp) chr RDEB01027677.1 (1092 bp) chr RDEB01027678.1 (1084 bp) chr RDEB01027679.1 (1084 bp) chr RDEB01027680.1 (1079 bp) chr RDEB01027681.1 (1078 bp) chr RDEB01027682.1 (1076 bp) chr RDEB01027683.1 (1076 bp) chr RDEB01027684.1 (1072 bp) chr RDEB01027685.1 (1071 bp) chr RDEB01027686.1 (1064 bp) chr RDEB01027687.1 (1063 bp) chr RDEB01027688.1 (1060 bp) chr RDEB01027689.1 (1055 bp) chr RDEB01027690.1 (1046 bp) chr RDEB01027691.1 (1042 bp) chr RDEB01027692.1 (1042 bp) chr RDEB01027693.1 (1041 bp) chr RDEB01027694.1 (1041 bp) chr RDEB01027695.1 (1040 bp) chr RDEB01027696.1 (1038 bp) chr RDEB01027697.1 (1029 bp) chr RDEB01027698.1 (1028 bp) chr RDEB01027699.1 (1026 bp) chr RDEB01027700.1 (1024 bp) chr RDEB01027701.1 (1019 bp) chr RDEB01027702.1 (1019 bp) chr RDEB01027703.1 (1012 bp) chr RDEB01027704.1 (1010 bp) chr RDEB01027705.1 (1009 bp) chr RDEB01027706.1 (1008 bp) chr RDEB01027707.1 (1004 bp) chr RDEB01027708.1 (1002 bp) chr RDEB01027709.1 (1001 bp) chr RDEB01027710.1 (998 bp) chr RDEB01027711.1 (996 bp) chr RDEB01027712.1 (991 bp) chr RDEB01027713.1 (989 bp) chr RDEB01027714.1 (986 bp) chr RDEB01027715.1 (981 bp) chr RDEB01027716.1 (980 bp) chr RDEB01027717.1 (979 bp) chr RDEB01027718.1 (979 bp) chr RDEB01027719.1 (979 bp) chr RDEB01027720.1 (976 bp) chr RDEB01027721.1 (968 bp) chr RDEB01027722.1 (963 bp) chr RDEB01027723.1 (960 bp) chr RDEB01027724.1 (956 bp) chr RDEB01027725.1 (952 bp) chr RDEB01027726.1 (945 bp) chr RDEB01027727.1 (944 bp) chr RDEB01027728.1 (942 bp) chr RDEB01027729.1 (942 bp) chr RDEB01027730.1 (939 bp) chr RDEB01027731.1 (937 bp) chr RDEB01027732.1 (932 bp) chr RDEB01027733.1 (931 bp) chr RDEB01027734.1 (925 bp) chr RDEB01027735.1 (920 bp) chr RDEB01027736.1 (918 bp) chr RDEB01027737.1 (917 bp) chr RDEB01027738.1 (915 bp) chr RDEB01027739.1 (911 bp) chr RDEB01027740.1 (910 bp) chr RDEB01027741.1 (901 bp) chr RDEB01027742.1 (897 bp) chr RDEB01027743.1 (891 bp) chr RDEB01027744.1 (890 bp) chr RDEB01027745.1 (890 bp) chr RDEB01027746.1 (888 bp) chr RDEB01027747.1 (883 bp) chr RDEB01027748.1 (879 bp) chr RDEB01027749.1 (875 bp) chr RDEB01027750.1 (874 bp) chr RDEB01027751.1 (869 bp) chr RDEB01027752.1 (866 bp) chr RDEB01027753.1 (866 bp) chr RDEB01027754.1 (864 bp) chr RDEB01027755.1 (863 bp) chr RDEB01027756.1 (852 bp) chr RDEB01027757.1 (852 bp) chr RDEB01027758.1 (850 bp) chr RDEB01027759.1 (848 bp) chr RDEB01027760.1 (846 bp) chr RDEB01027761.1 (841 bp) chr RDEB01027762.1 (840 bp) chr RDEB01027763.1 (827 bp) chr RDEB01027764.1 (827 bp) chr RDEB01027765.1 (825 bp) chr RDEB01027766.1 (821 bp) chr RDEB01027767.1 (817 bp) chr RDEB01027768.1 (816 bp) chr RDEB01027769.1 (813 bp) chr RDEB01027770.1 (811 bp) chr RDEB01027771.1 (809 bp) chr RDEB01027772.1 (808 bp) chr RDEB01027773.1 (806 bp) chr RDEB01027774.1 (806 bp) chr RDEB01027775.1 (798 bp) chr RDEB01027776.1 (796 bp) chr RDEB01027777.1 (795 bp) chr RDEB01027778.1 (795 bp) chr RDEB01027779.1 (791 bp) chr 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bp) chr RDEB01027816.1 (683 bp) chr RDEB01027817.1 (683 bp) chr RDEB01027818.1 (677 bp) chr RDEB01027819.1 (676 bp) chr RDEB01027820.1 (669 bp) chr RDEB01027821.1 (655 bp) chr RDEB01027822.1 (648 bp) chr RDEB01027823.1 (647 bp) chr RDEB01027824.1 (644 bp) chr RDEB01027825.1 (642 bp) chr RDEB01027826.1 (635 bp) chr RDEB01027827.1 (632 bp) chr RDEB01027828.1 (630 bp) chr RDEB01027829.1 (628 bp) chr RDEB01027830.1 (627 bp) chr RDEB01027831.1 (626 bp) chr RDEB01027832.1 (625 bp) chr RDEB01027833.1 (622 bp) chr RDEB01027834.1 (618 bp) chr RDEB01027835.1 (611 bp) chr RDEB01027836.1 (605 bp) chr RDEB01027837.1 (603 bp) chr RDEB01027838.1 (602 bp) chr RDEB01027839.1 (602 bp) chr RDEB01027840.1 (595 bp) chr RDEB01027841.1 (587 bp) chr RDEB01027842.1 (573 bp) chr RDEB01027843.1 (580 bp) chr RDEB01027844.1 (580 bp) chr RDEB01027845.1 (579 bp) chr RDEB01027846.1 (578 bp) chr RDEB01027847.1 (577 bp) chr RDEB01027848.1 (569 bp) chr RDEB01027849.1 (563 bp) chr RDEB01027850.1 (562 bp) chr RDEB01027851.1 (561 bp) chr RDEB01027852.1 (551 bp) chr RDEB01027853.1 (546 bp) chr RDEB01027854.1 (543 bp) chr RDEB01027855.1 (536 bp) chr RDEB01027856.1 (536 bp) chr RDEB01027857.1 (531 bp) chr RDEB01027858.1 (529 bp) chr RDEB01027859.1 (527 bp) chr RDEB01027860.1 (517 bp) chr RDEB01027861.1 (517 bp) chr RDEB01027862.1 (513 bp) chr RDEB01027863.1 (509 bp) chr RDEB01027864.1 (508 bp) chr RDEB01027865.1 (507 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth16_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth16_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth16_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth16_R1_001.fastq.gz to Meth16_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth16_R1_001.fastq.gz to Meth16_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth16_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth16_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth16_R2_001.fastq.gz to Meth16_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth16_R2_001.fastq.gz to Meth16_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth16_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth16_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth16_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth16_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth16_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth16_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth16_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21414:1000_1:N:0:AATCCGGA+NTACAGTT/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTGGTTTTTTTGATTTTAATAATAATTATTATTATAATTATTATATTTAAAATTAATTAAATAAAAAATTTAAAATTTTAAATATAAAATAAATATAAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATAATTTGGAATTGTGTATT F#FFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FF,,,, YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21414:1000_2:N:0:AATCCGGA+NTACAGTT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TATATTTATTTTATATTTAAAATTTTAAATTTTTTATTTAATTAATTTTAAATATAATAATTATAATAATAATTATTATTAAAATCAAAAAAACCATAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATAACTATAAATATAAAACTC FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF::FFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,:FF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth16_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth16_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21414:1000_1:N:0:AATCCGGA+NTACAGTT/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNCAACTCTTCCAATCTCAACAACAATCATCATTACAACCATCACACTTAAAATTAACTAAATAAAAAATTCAAAATCTTAAATACAAAACAAACACAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACAATCCAAAATCACATATT F#FFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FF,,,, YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21414:1000_2:N:0:AATCCGGA+NTACAGTT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGTGTTTGTTTTGTATTTAAGATTTTGAATTTTTTATTTAGTTAATTTTAAGTGTGATGGTTGTAATGATGATTGTTGTTGAGATTGGAAGAGTTGTGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTAATTGTAGGTGTAGAGTTT FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF::FFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,:FF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth16_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth16_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21414:1000_1:N:0:AATCCGGA+NTACAGTT/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNCAACTCTTCCAATCTCAACAACAATCATCATTACAACCATCACACTTAAAATTAACTAAATAAAAAATTCAAAATCTTAAATACAAAACAAACACAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACAATCCAAAATCACATATT F#FFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FF,,,, YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21414:1000_2:N:0:AATCCGGA+NTACAGTT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGTGTTTGTTTTGTATTTAAGATTTTGAATTTTTTATTTAGTTAATTTTAAGTGTGATGGTTGTAATGATGATTGTTGTTGAGATTGGAAGAGTTGTGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTAATTGTAGGTGTAGAGTTT FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF::FFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,:FF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth16_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth16_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21414:1000_1:N:0:AATCCGGA+NTACAGTT/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTGGTTTTTTTGATTTTAATAATAATTATTATTATAATTATTATATTTAAAATTAATTAAATAAAAAATTTAAAATTTTAAATATAAAATAAATATAAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATAATTTGGAATTGTGTATT F#FFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FF,,,, YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21414:1000_2:N:0:AATCCGGA+NTACAGTT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TATATTTATTTTATATTTAAAATTTTAAATTTTTTATTTAATTAATTTTAAATATAATAATTATAATAATAATTATTATTAAAATCAAAAAAACCATAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATAACTATAAATATAAAACTC FFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF::FFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,,:FF YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth16_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth16_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth16_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9771 (97.71%) aligned concordantly 0 times 146 (1.46%) aligned concordantly exactly 1 time 83 (0.83%) aligned concordantly >1 times 2.29% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9758 (97.58%) aligned concordantly 0 times 169 (1.69%) aligned concordantly exactly 1 time 73 (0.73%) aligned concordantly >1 times 2.42% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9752 (97.52%) aligned concordantly 0 times 176 (1.76%) aligned concordantly exactly 1 time 72 (0.72%) aligned concordantly >1 times 2.48% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9758 (97.58%) aligned concordantly 0 times 150 (1.50%) aligned concordantly exactly 1 time 92 (0.92%) aligned concordantly >1 times 2.42% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth16_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth16_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth16_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth16_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 688 Mapping efficiency: 6.9% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9220 Sequence pairs did not map uniquely: 92 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 156 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 179 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 186 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 167 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 42061 Total methylated C's in CpG context: 1066 Total methylated C's in CHG context: 98 Total methylated C's in CHH context: 244 Total methylated C's in Unknown context: 11 Total unmethylated C's in CpG context: 6009 Total unmethylated C's in CHG context: 7508 Total unmethylated C's in CHH context: 27136 Total unmethylated C's in Unknown context: 41 C methylated in CpG context: 15.1% C methylated in CHG context: 1.3% C methylated in CHH context: 0.9% C methylated in unknown context (CN or CHN): 21.2% Bismark completed in 0d 0h 0m 26s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth17_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth17_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-NCBI/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ chr RDEB01000001.1 (2051086 bp) chr RDEB01000002.1 (1931859 bp) chr RDEB01000003.1 (1909126 bp) chr RDEB01000004.1 (1580737 bp) chr RDEB01000005.1 (1562395 bp) chr RDEB01000006.1 (1561676 bp) chr RDEB01000007.1 (1468524 bp) chr RDEB01000008.1 (1449017 bp) chr RDEB01000009.1 (1288384 bp) chr RDEB01000010.1 (1267912 bp) chr RDEB01000011.1 (1226981 bp) chr RDEB01000012.1 (1203453 bp) chr RDEB01000013.1 (1196056 bp) chr RDEB01000014.1 (1161273 bp) chr RDEB01000015.1 (1155058 bp) chr RDEB01000016.1 (1154061 bp) chr RDEB01000017.1 (1126579 bp) chr RDEB01000018.1 (1112599 bp) chr RDEB01000019.1 (1105743 bp) chr RDEB01000020.1 (1047533 bp) chr RDEB01000021.1 (1042078 bp) chr RDEB01000022.1 (1027815 bp) chr RDEB01000023.1 (1026134 bp) chr RDEB01000024.1 (1017152 bp) chr RDEB01000025.1 (1013905 bp) chr RDEB01000026.1 (1011462 bp) chr RDEB01000027.1 (997532 bp) chr RDEB01000028.1 (977069 bp) chr RDEB01000029.1 (970043 bp) chr RDEB01000030.1 (959368 bp) chr RDEB01000031.1 (946529 bp) chr RDEB01000032.1 (941419 bp) chr RDEB01000033.1 (938138 bp) chr RDEB01000034.1 (914659 bp) chr RDEB01000035.1 (910955 bp) chr RDEB01000036.1 (910339 bp) chr RDEB01000037.1 (907300 bp) chr RDEB01000038.1 (906231 bp) chr RDEB01000039.1 (898108 bp) chr RDEB01000040.1 (891924 bp) chr RDEB01000041.1 (881484 bp) chr RDEB01000042.1 (873709 bp) chr RDEB01000043.1 (872072 bp) chr RDEB01000044.1 (860338 bp) chr RDEB01000045.1 (852749 bp) chr RDEB01000046.1 (845408 bp) chr RDEB01000047.1 (844817 bp) chr RDEB01000048.1 (841333 bp) chr RDEB01000049.1 (838287 bp) chr RDEB01000050.1 (837738 bp) chr RDEB01000051.1 (831214 bp) chr RDEB01000052.1 (821654 bp) chr RDEB01000053.1 (807789 bp) chr RDEB01000054.1 (804604 bp) chr RDEB01000055.1 (801587 bp) chr RDEB01000056.1 (789434 bp) chr RDEB01000057.1 (791485 bp) chr RDEB01000058.1 (791387 bp) chr RDEB01000059.1 (787461 bp) chr RDEB01000060.1 (785475 bp) chr RDEB01000061.1 (776585 bp) chr RDEB01000062.1 (765173 bp) chr RDEB01000063.1 (762781 bp) chr RDEB01000064.1 (756547 bp) chr RDEB01000065.1 (750445 bp) chr RDEB01000066.1 (750425 bp) chr RDEB01000067.1 (748716 bp) chr RDEB01000068.1 (744853 bp) chr RDEB01000069.1 (743781 bp) chr RDEB01000070.1 (736536 bp) chr RDEB01000071.1 (735828 bp) chr RDEB01000072.1 (735810 bp) chr RDEB01000073.1 (734211 bp) chr RDEB01000074.1 (727944 bp) chr RDEB01000075.1 (714259 bp) chr RDEB01000076.1 (710645 bp) chr RDEB01000077.1 (709730 bp) chr RDEB01000078.1 (706098 bp) chr RDEB01000079.1 (702875 bp) chr RDEB01000080.1 (697409 bp) chr RDEB01000081.1 (697225 bp) chr RDEB01000082.1 (696462 bp) chr RDEB01000083.1 (691775 bp) chr RDEB01000084.1 (689230 bp) chr RDEB01000085.1 (689149 bp) chr RDEB01000086.1 (685932 bp) chr RDEB01000087.1 (683424 bp) chr RDEB01000088.1 (683185 bp) chr RDEB01000089.1 (682905 bp) chr RDEB01000090.1 (680182 bp) chr RDEB01000091.1 (670709 bp) chr RDEB01000092.1 (670410 bp) chr RDEB01000093.1 (668648 bp) chr RDEB01000094.1 (668448 bp) chr RDEB01000095.1 (664016 bp) chr RDEB01000096.1 (659099 bp) chr RDEB01000097.1 (657048 bp) chr RDEB01000098.1 (656749 bp) chr RDEB01000099.1 (652702 bp) chr RDEB01000100.1 (651628 bp) chr RDEB01000101.1 (651613 bp) chr RDEB01000102.1 (650710 bp) chr RDEB01000103.1 (647275 bp) chr RDEB01000104.1 (646764 bp) chr RDEB01000105.1 (646518 bp) chr RDEB01000106.1 (646260 bp) chr RDEB01000107.1 (644930 bp) chr RDEB01000108.1 (642161 bp) chr RDEB01000109.1 (640493 bp) chr RDEB01000110.1 (638532 bp) chr RDEB01000111.1 (637376 bp) chr RDEB01000112.1 (633474 bp) chr RDEB01000113.1 (628029 bp) chr RDEB01000114.1 (627396 bp) chr RDEB01000115.1 (627002 bp) chr RDEB01000116.1 (626913 bp) chr RDEB01000117.1 (625838 bp) chr RDEB01000118.1 (622393 bp) chr RDEB01000119.1 (621998 bp) chr RDEB01000120.1 (621618 bp) chr RDEB01000121.1 (611718 bp) chr RDEB01000122.1 (599855 bp) chr RDEB01000123.1 (592820 bp) chr RDEB01000124.1 (590584 bp) chr RDEB01000125.1 (589842 bp) chr RDEB01000126.1 (585859 bp) chr RDEB01000127.1 (580331 bp) chr RDEB01000128.1 (579729 bp) chr RDEB01000129.1 (579409 bp) chr RDEB01000130.1 (578342 bp) chr RDEB01000131.1 (577645 bp) chr RDEB01000132.1 (576140 bp) chr RDEB01000133.1 (573363 bp) chr RDEB01000134.1 (565908 bp) chr RDEB01000135.1 (561686 bp) chr RDEB01000136.1 (560038 bp) chr RDEB01000137.1 (559863 bp) chr RDEB01000138.1 (559035 bp) chr RDEB01000139.1 (553853 bp) chr RDEB01000140.1 (551847 bp) chr RDEB01000141.1 (547763 bp) chr RDEB01000142.1 (546238 bp) chr RDEB01000143.1 (544418 bp) chr RDEB01000144.1 (537790 bp) chr RDEB01000145.1 (540332 bp) chr RDEB01000146.1 (533656 bp) chr RDEB01000147.1 (506090 bp) chr RDEB01000148.1 (528813 bp) chr RDEB01000149.1 (528059 bp) chr RDEB01000150.1 (524987 bp) chr RDEB01000151.1 (524665 bp) chr RDEB01000152.1 (524542 bp) chr RDEB01000153.1 (524444 bp) chr RDEB01000154.1 (523657 bp) chr RDEB01000155.1 (523369 bp) chr RDEB01000156.1 (522933 bp) chr RDEB01000157.1 (520578 bp) chr RDEB01000158.1 (520359 bp) chr RDEB01000159.1 (519025 bp) chr RDEB01000160.1 (518877 bp) chr RDEB01000161.1 (518178 bp) chr RDEB01000162.1 (517381 bp) chr RDEB01000163.1 (516614 bp) chr 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bp) chr RDEB01027816.1 (683 bp) chr RDEB01027817.1 (683 bp) chr RDEB01027818.1 (677 bp) chr RDEB01027819.1 (676 bp) chr RDEB01027820.1 (669 bp) chr RDEB01027821.1 (655 bp) chr RDEB01027822.1 (648 bp) chr RDEB01027823.1 (647 bp) chr RDEB01027824.1 (644 bp) chr RDEB01027825.1 (642 bp) chr RDEB01027826.1 (635 bp) chr RDEB01027827.1 (632 bp) chr RDEB01027828.1 (630 bp) chr RDEB01027829.1 (628 bp) chr RDEB01027830.1 (627 bp) chr RDEB01027831.1 (626 bp) chr RDEB01027832.1 (625 bp) chr RDEB01027833.1 (622 bp) chr RDEB01027834.1 (618 bp) chr RDEB01027835.1 (611 bp) chr RDEB01027836.1 (605 bp) chr RDEB01027837.1 (603 bp) chr RDEB01027838.1 (602 bp) chr RDEB01027839.1 (602 bp) chr RDEB01027840.1 (595 bp) chr RDEB01027841.1 (587 bp) chr RDEB01027842.1 (573 bp) chr RDEB01027843.1 (580 bp) chr RDEB01027844.1 (580 bp) chr RDEB01027845.1 (579 bp) chr RDEB01027846.1 (578 bp) chr RDEB01027847.1 (577 bp) chr RDEB01027848.1 (569 bp) chr RDEB01027849.1 (563 bp) chr RDEB01027850.1 (562 bp) chr RDEB01027851.1 (561 bp) chr RDEB01027852.1 (551 bp) chr RDEB01027853.1 (546 bp) chr RDEB01027854.1 (543 bp) chr RDEB01027855.1 (536 bp) chr RDEB01027856.1 (536 bp) chr RDEB01027857.1 (531 bp) chr RDEB01027858.1 (529 bp) chr RDEB01027859.1 (527 bp) chr RDEB01027860.1 (517 bp) chr RDEB01027861.1 (517 bp) chr RDEB01027862.1 (513 bp) chr RDEB01027863.1 (509 bp) chr RDEB01027864.1 (508 bp) chr RDEB01027865.1 (507 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth17_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth17_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth17_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth17_R1_001.fastq.gz to Meth17_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth17_R1_001.fastq.gz to Meth17_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth17_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth17_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth17_R2_001.fastq.gz to Meth17_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth17_R2_001.fastq.gz to Meth17_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth17_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth17_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth17_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth17_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth17_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth17_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth17_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21323:1000_1:N:0:TAATACAG+NTATTCAC/1 77 * 0 0 * * 0 0 ANTATAGTTTGTTTGGTTATGAATAGAGGTTAGATTAAGTGGTATTATAGTAAATTGGGTGTTTGTTTTTTTTTGTAGAAATAGTATTTTGTAGTTGTTTGGAATGGATATTAGGTTATGTAGGTTTTGTTTTGTTTTTGTGGTTATTGT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21323:1000_2:N:0:TAATACAG+NTATTCAC/2 141 * 0 0 * * 0 0 ATCTACTCTTCCAATCTCTTTTTACCACAAACAATACTTAAAAAAACCCAACAAAAACTAATTAATTTTCATAACTCCAATTTATCCTTAATAAAAATAAACCATCACTCCAACAAAATAATCACAATAACCACAAAAACAAAACAAAAC FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:F::FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFF::FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFF: YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth17_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth17_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21323:1000_1:N:0:TAATACAG+NTATTCAC/1 77 * 0 0 * * 0 0 ANCATAATCTACCTAACCATAAATAAAAACCAAATTAAACAACACCATAACAAACTAAATACTTACTCCCCCTTACAAAAACAATACCTTATAATTATCCAAAACAAACATCAAATCACACAAATCCCACTCCACTTTCATAACCATTAC F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21323:1000_2:N:0:TAATACAG+NTATTCAC/2 141 * 0 0 * * 0 0 GTTTGTTTTTTTGATTTTTTTTTGTTGTAAGTGGTGTTTGAAAGAGTTTAGTAAGAATTGGTTGATTTTTGTGGTTTTGGTTTGTTTTTAATGGAGATGAGTTATTGTTTTGATGAGGTGGTTGTAATGGTTATGAAAGTGGAGTGGGAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:F::FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFF::FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFF: YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth17_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth17_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21323:1000_1:N:0:TAATACAG+NTATTCAC/1 77 * 0 0 * * 0 0 ANCATAATCTACCTAACCATAAATAAAAACCAAATTAAACAACACCATAACAAACTAAATACTTACTCCCCCTTACAAAAACAATACCTTATAATTATCCAAAACAAACATCAAATCACACAAATCCCACTCCACTTTCATAACCATTAC F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21323:1000_2:N:0:TAATACAG+NTATTCAC/2 141 * 0 0 * * 0 0 GTTTGTTTTTTTGATTTTTTTTTGTTGTAAGTGGTGTTTGAAAGAGTTTAGTAAGAATTGGTTGATTTTTGTGGTTTTGGTTTGTTTTTAATGGAGATGAGTTATTGTTTTGATGAGGTGGTTGTAATGGTTATGAAAGTGGAGTGGGAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:F::FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFF::FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFF: YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth17_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth17_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21323:1000_1:N:0:TAATACAG+NTATTCAC/1 77 * 0 0 * * 0 0 ANTATAGTTTGTTTGGTTATGAATAGAGGTTAGATTAAGTGGTATTATAGTAAATTGGGTGTTTGTTTTTTTTTGTAGAAATAGTATTTTGTAGTTGTTTGGAATGGATATTAGGTTATGTAGGTTTTGTTTTGTTTTTGTGGTTATTGT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21323:1000_2:N:0:TAATACAG+NTATTCAC/2 141 * 0 0 * * 0 0 ATCTACTCTTCCAATCTCTTTTTACCACAAACAATACTTAAAAAAACCCAACAAAAACTAATTAATTTTCATAACTCCAATTTATCCTTAATAAAAATAAACCATCACTCCAACAAAATAATCACAATAACCACAAAAACAAAACAAAAC FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:F::FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFF::FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFF: YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth17_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth17_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth17_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9792 (97.92%) aligned concordantly 0 times 130 (1.30%) aligned concordantly exactly 1 time 78 (0.78%) aligned concordantly >1 times 2.08% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9801 (98.01%) aligned concordantly 0 times 131 (1.31%) aligned concordantly exactly 1 time 68 (0.68%) aligned concordantly >1 times 1.99% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9761 (97.61%) aligned concordantly 0 times 160 (1.60%) aligned concordantly exactly 1 time 79 (0.79%) aligned concordantly >1 times 2.39% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9788 (97.88%) aligned concordantly 0 times 142 (1.42%) aligned concordantly exactly 1 time 70 (0.70%) aligned concordantly >1 times 2.12% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth17_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth17_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth17_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth17_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 592 Mapping efficiency: 5.9% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9309 Sequence pairs did not map uniquely: 99 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 146 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 150 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 161 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 135 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 36127 Total methylated C's in CpG context: 995 Total methylated C's in CHG context: 53 Total methylated C's in CHH context: 247 Total methylated C's in Unknown context: 8 Total unmethylated C's in CpG context: 5533 Total unmethylated C's in CHG context: 6350 Total unmethylated C's in CHH context: 22949 Total unmethylated C's in Unknown context: 51 C methylated in CpG context: 15.2% C methylated in CHG context: 0.8% C methylated in CHH context: 1.1% C methylated in unknown context (CN or CHN): 13.6% Bismark completed in 0d 0h 0m 26s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth18_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth18_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-NCBI/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ chr RDEB01000001.1 (2051086 bp) chr RDEB01000002.1 (1931859 bp) chr RDEB01000003.1 (1909126 bp) chr RDEB01000004.1 (1580737 bp) 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(1104 bp) chr RDEB01027675.1 (1096 bp) chr RDEB01027676.1 (1093 bp) chr RDEB01027677.1 (1092 bp) chr RDEB01027678.1 (1084 bp) chr RDEB01027679.1 (1084 bp) chr RDEB01027680.1 (1079 bp) chr RDEB01027681.1 (1078 bp) chr RDEB01027682.1 (1076 bp) chr RDEB01027683.1 (1076 bp) chr RDEB01027684.1 (1072 bp) chr RDEB01027685.1 (1071 bp) chr RDEB01027686.1 (1064 bp) chr RDEB01027687.1 (1063 bp) chr RDEB01027688.1 (1060 bp) chr RDEB01027689.1 (1055 bp) chr RDEB01027690.1 (1046 bp) chr RDEB01027691.1 (1042 bp) chr RDEB01027692.1 (1042 bp) chr RDEB01027693.1 (1041 bp) chr RDEB01027694.1 (1041 bp) chr RDEB01027695.1 (1040 bp) chr RDEB01027696.1 (1038 bp) chr RDEB01027697.1 (1029 bp) chr RDEB01027698.1 (1028 bp) chr RDEB01027699.1 (1026 bp) chr RDEB01027700.1 (1024 bp) chr RDEB01027701.1 (1019 bp) chr RDEB01027702.1 (1019 bp) chr RDEB01027703.1 (1012 bp) chr RDEB01027704.1 (1010 bp) chr RDEB01027705.1 (1009 bp) chr RDEB01027706.1 (1008 bp) chr RDEB01027707.1 (1004 bp) chr RDEB01027708.1 (1002 bp) chr RDEB01027709.1 (1001 bp) chr RDEB01027710.1 (998 bp) chr RDEB01027711.1 (996 bp) chr RDEB01027712.1 (991 bp) chr RDEB01027713.1 (989 bp) chr RDEB01027714.1 (986 bp) chr RDEB01027715.1 (981 bp) chr RDEB01027716.1 (980 bp) chr RDEB01027717.1 (979 bp) chr RDEB01027718.1 (979 bp) chr RDEB01027719.1 (979 bp) chr RDEB01027720.1 (976 bp) chr RDEB01027721.1 (968 bp) chr RDEB01027722.1 (963 bp) chr RDEB01027723.1 (960 bp) chr RDEB01027724.1 (956 bp) chr RDEB01027725.1 (952 bp) chr RDEB01027726.1 (945 bp) chr RDEB01027727.1 (944 bp) chr RDEB01027728.1 (942 bp) chr RDEB01027729.1 (942 bp) chr RDEB01027730.1 (939 bp) chr RDEB01027731.1 (937 bp) chr RDEB01027732.1 (932 bp) chr RDEB01027733.1 (931 bp) chr RDEB01027734.1 (925 bp) chr RDEB01027735.1 (920 bp) chr RDEB01027736.1 (918 bp) chr RDEB01027737.1 (917 bp) chr RDEB01027738.1 (915 bp) chr RDEB01027739.1 (911 bp) chr RDEB01027740.1 (910 bp) chr RDEB01027741.1 (901 bp) chr RDEB01027742.1 (897 bp) chr RDEB01027743.1 (891 bp) chr RDEB01027744.1 (890 bp) chr RDEB01027745.1 (890 bp) chr RDEB01027746.1 (888 bp) chr RDEB01027747.1 (883 bp) chr RDEB01027748.1 (879 bp) chr RDEB01027749.1 (875 bp) chr RDEB01027750.1 (874 bp) chr RDEB01027751.1 (869 bp) chr RDEB01027752.1 (866 bp) chr RDEB01027753.1 (866 bp) chr RDEB01027754.1 (864 bp) chr RDEB01027755.1 (863 bp) chr RDEB01027756.1 (852 bp) chr RDEB01027757.1 (852 bp) chr RDEB01027758.1 (850 bp) chr RDEB01027759.1 (848 bp) chr RDEB01027760.1 (846 bp) chr RDEB01027761.1 (841 bp) chr RDEB01027762.1 (840 bp) chr RDEB01027763.1 (827 bp) chr RDEB01027764.1 (827 bp) chr RDEB01027765.1 (825 bp) chr RDEB01027766.1 (821 bp) chr RDEB01027767.1 (817 bp) chr RDEB01027768.1 (816 bp) chr RDEB01027769.1 (813 bp) chr RDEB01027770.1 (811 bp) chr RDEB01027771.1 (809 bp) chr RDEB01027772.1 (808 bp) chr RDEB01027773.1 (806 bp) chr RDEB01027774.1 (806 bp) chr RDEB01027775.1 (798 bp) chr RDEB01027776.1 (796 bp) chr RDEB01027777.1 (795 bp) chr RDEB01027778.1 (795 bp) chr RDEB01027779.1 (791 bp) chr 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bp) chr RDEB01027816.1 (683 bp) chr RDEB01027817.1 (683 bp) chr RDEB01027818.1 (677 bp) chr RDEB01027819.1 (676 bp) chr RDEB01027820.1 (669 bp) chr RDEB01027821.1 (655 bp) chr RDEB01027822.1 (648 bp) chr RDEB01027823.1 (647 bp) chr RDEB01027824.1 (644 bp) chr RDEB01027825.1 (642 bp) chr RDEB01027826.1 (635 bp) chr RDEB01027827.1 (632 bp) chr RDEB01027828.1 (630 bp) chr RDEB01027829.1 (628 bp) chr RDEB01027830.1 (627 bp) chr RDEB01027831.1 (626 bp) chr RDEB01027832.1 (625 bp) chr RDEB01027833.1 (622 bp) chr RDEB01027834.1 (618 bp) chr RDEB01027835.1 (611 bp) chr RDEB01027836.1 (605 bp) chr RDEB01027837.1 (603 bp) chr RDEB01027838.1 (602 bp) chr RDEB01027839.1 (602 bp) chr RDEB01027840.1 (595 bp) chr RDEB01027841.1 (587 bp) chr RDEB01027842.1 (573 bp) chr RDEB01027843.1 (580 bp) chr RDEB01027844.1 (580 bp) chr RDEB01027845.1 (579 bp) chr RDEB01027846.1 (578 bp) chr RDEB01027847.1 (577 bp) chr RDEB01027848.1 (569 bp) chr RDEB01027849.1 (563 bp) chr RDEB01027850.1 (562 bp) chr RDEB01027851.1 (561 bp) chr RDEB01027852.1 (551 bp) chr RDEB01027853.1 (546 bp) chr RDEB01027854.1 (543 bp) chr RDEB01027855.1 (536 bp) chr RDEB01027856.1 (536 bp) chr RDEB01027857.1 (531 bp) chr RDEB01027858.1 (529 bp) chr RDEB01027859.1 (527 bp) chr RDEB01027860.1 (517 bp) chr RDEB01027861.1 (517 bp) chr RDEB01027862.1 (513 bp) chr RDEB01027863.1 (509 bp) chr RDEB01027864.1 (508 bp) chr RDEB01027865.1 (507 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth18_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth18_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth18_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth18_R1_001.fastq.gz to Meth18_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth18_R1_001.fastq.gz to Meth18_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth18_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth18_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth18_R2_001.fastq.gz to Meth18_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth18_R2_001.fastq.gz to Meth18_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth18_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth18_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth18_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth18_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth18_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth18_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth18_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21395:1000_1:N:0:CGGCGTGA+NCGCCTGT/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTTAATATTTTATAATAATATTTTTTTTTAATTAAATATATTAAATAATTAATAAATTTAATATATTATTTATATATATATAATAATTATTTTTTAATAATATTATTTAAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTGGTG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21395:1000_2:N:0:CGGCGTGA+NCGCCTGT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TAAATAATATTATTAAAAAATAATTATTATATATATATAAATAATATATTAAATTTATTAATTATTTAATATATTTAATTAAAAAAAAATATTATTATAAAATATTAAAAAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATACAAAC FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFF:F YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth18_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth18_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21395:1000_1:N:0:CGGCGTGA+NCGCCTGT/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNTCTAATACTTTACAACAACACCTCTTCCCAACCAAACACACCAAATAATTAATAAACTTAACATATCATTTACACATACATAATAATTACTTTTCAACAACATTACCCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACCAACA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21395:1000_2:N:0:CGGCGTGA+NCGCCTGT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGGGTAATGTTGTTGAAAAGTAATTATTATGTATGTGTAAATGATATGTTAAGTTTATTAATTATTTGGTGTGTTTGGTTGGGAAGAGGTGTTGTTGTAAAGTATTAGAGGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTATAGGT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFF:F YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth18_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth18_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21395:1000_1:N:0:CGGCGTGA+NCGCCTGT/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNTCTAATACTTTACAACAACACCTCTTCCCAACCAAACACACCAAATAATTAATAAACTTAACATATCATTTACACATACATAATAATTACTTTTCAACAACATTACCCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACCAACA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21395:1000_2:N:0:CGGCGTGA+NCGCCTGT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGGGTAATGTTGTTGAAAAGTAATTATTATGTATGTGTAAATGATATGTTAAGTTTATTAATTATTTGGTGTGTTTGGTTGGGAAGAGGTGTTGTTGTAAAGTATTAGAGGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTATAGGT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFF:F YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth18_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth18_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21395:1000_1:N:0:CGGCGTGA+NCGCCTGT/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTTAATATTTTATAATAATATTTTTTTTTAATTAAATATATTAAATAATTAATAAATTTAATATATTATTTATATATATATAATAATTATTTTTTAATAATATTATTTAAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTGGTG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21395:1000_2:N:0:CGGCGTGA+NCGCCTGT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TAAATAATATTATTAAAAAATAATTATTATATATATATAAATAATATATTAAATTTATTAATTATTTAATATATTTAATTAAAAAAAAATATTATTATAAAATATTAAAAAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATACAAAC FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFF:F YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth18_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth18_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth18_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9737 (97.37%) aligned concordantly 0 times 182 (1.82%) aligned concordantly exactly 1 time 81 (0.81%) aligned concordantly >1 times 2.63% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9760 (97.60%) aligned concordantly 0 times 153 (1.53%) aligned concordantly exactly 1 time 87 (0.87%) aligned concordantly >1 times 2.40% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9747 (97.47%) aligned concordantly 0 times 160 (1.60%) aligned concordantly exactly 1 time 93 (0.93%) aligned concordantly >1 times 2.53% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9759 (97.59%) aligned concordantly 0 times 156 (1.56%) aligned concordantly exactly 1 time 85 (0.85%) aligned concordantly >1 times 2.41% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth18_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth18_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth18_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth18_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 709 Mapping efficiency: 7.1% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9207 Sequence pairs did not map uniquely: 84 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 159 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 170 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 197 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 183 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 43146 Total methylated C's in CpG context: 1602 Total methylated C's in CHG context: 98 Total methylated C's in CHH context: 335 Total methylated C's in Unknown context: 8 Total unmethylated C's in CpG context: 6005 Total unmethylated C's in CHG context: 7518 Total unmethylated C's in CHH context: 27588 Total unmethylated C's in Unknown context: 34 C methylated in CpG context: 21.1% C methylated in CHG context: 1.3% C methylated in CHH context: 1.2% C methylated in unknown context (CN or CHN): 19.0% Bismark completed in 0d 0h 0m 26s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth2_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth2_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-NCBI/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ chr RDEB01000001.1 (2051086 bp) chr RDEB01000002.1 (1931859 bp) chr RDEB01000003.1 (1909126 bp) chr RDEB01000004.1 (1580737 bp) chr RDEB01000005.1 (1562395 bp) chr RDEB01000006.1 (1561676 bp) chr RDEB01000007.1 (1468524 bp) chr RDEB01000008.1 (1449017 bp) chr RDEB01000009.1 (1288384 bp) chr RDEB01000010.1 (1267912 bp) chr RDEB01000011.1 (1226981 bp) chr RDEB01000012.1 (1203453 bp) chr RDEB01000013.1 (1196056 bp) chr RDEB01000014.1 (1161273 bp) chr RDEB01000015.1 (1155058 bp) chr RDEB01000016.1 (1154061 bp) chr RDEB01000017.1 (1126579 bp) chr RDEB01000018.1 (1112599 bp) chr RDEB01000019.1 (1105743 bp) chr RDEB01000020.1 (1047533 bp) chr RDEB01000021.1 (1042078 bp) chr RDEB01000022.1 (1027815 bp) chr RDEB01000023.1 (1026134 bp) chr RDEB01000024.1 (1017152 bp) chr RDEB01000025.1 (1013905 bp) chr RDEB01000026.1 (1011462 bp) chr RDEB01000027.1 (997532 bp) chr RDEB01000028.1 (977069 bp) chr RDEB01000029.1 (970043 bp) chr RDEB01000030.1 (959368 bp) chr RDEB01000031.1 (946529 bp) chr RDEB01000032.1 (941419 bp) chr RDEB01000033.1 (938138 bp) chr RDEB01000034.1 (914659 bp) chr RDEB01000035.1 (910955 bp) chr RDEB01000036.1 (910339 bp) chr RDEB01000037.1 (907300 bp) chr RDEB01000038.1 (906231 bp) chr RDEB01000039.1 (898108 bp) chr RDEB01000040.1 (891924 bp) chr RDEB01000041.1 (881484 bp) chr RDEB01000042.1 (873709 bp) chr RDEB01000043.1 (872072 bp) chr RDEB01000044.1 (860338 bp) chr RDEB01000045.1 (852749 bp) chr RDEB01000046.1 (845408 bp) chr RDEB01000047.1 (844817 bp) chr RDEB01000048.1 (841333 bp) chr RDEB01000049.1 (838287 bp) chr RDEB01000050.1 (837738 bp) chr RDEB01000051.1 (831214 bp) chr RDEB01000052.1 (821654 bp) chr RDEB01000053.1 (807789 bp) chr RDEB01000054.1 (804604 bp) chr RDEB01000055.1 (801587 bp) chr RDEB01000056.1 (789434 bp) chr RDEB01000057.1 (791485 bp) chr RDEB01000058.1 (791387 bp) chr RDEB01000059.1 (787461 bp) chr RDEB01000060.1 (785475 bp) chr RDEB01000061.1 (776585 bp) chr RDEB01000062.1 (765173 bp) chr RDEB01000063.1 (762781 bp) chr RDEB01000064.1 (756547 bp) chr RDEB01000065.1 (750445 bp) chr RDEB01000066.1 (750425 bp) chr RDEB01000067.1 (748716 bp) chr RDEB01000068.1 (744853 bp) chr RDEB01000069.1 (743781 bp) chr RDEB01000070.1 (736536 bp) chr RDEB01000071.1 (735828 bp) chr RDEB01000072.1 (735810 bp) chr RDEB01000073.1 (734211 bp) chr RDEB01000074.1 (727944 bp) chr RDEB01000075.1 (714259 bp) chr RDEB01000076.1 (710645 bp) chr RDEB01000077.1 (709730 bp) chr RDEB01000078.1 (706098 bp) chr RDEB01000079.1 (702875 bp) chr RDEB01000080.1 (697409 bp) chr RDEB01000081.1 (697225 bp) chr RDEB01000082.1 (696462 bp) chr RDEB01000083.1 (691775 bp) chr RDEB01000084.1 (689230 bp) chr RDEB01000085.1 (689149 bp) chr RDEB01000086.1 (685932 bp) chr RDEB01000087.1 (683424 bp) chr RDEB01000088.1 (683185 bp) chr RDEB01000089.1 (682905 bp) chr RDEB01000090.1 (680182 bp) chr RDEB01000091.1 (670709 bp) chr RDEB01000092.1 (670410 bp) chr RDEB01000093.1 (668648 bp) chr RDEB01000094.1 (668448 bp) chr RDEB01000095.1 (664016 bp) chr RDEB01000096.1 (659099 bp) chr RDEB01000097.1 (657048 bp) chr RDEB01000098.1 (656749 bp) chr RDEB01000099.1 (652702 bp) chr RDEB01000100.1 (651628 bp) chr RDEB01000101.1 (651613 bp) chr RDEB01000102.1 (650710 bp) chr RDEB01000103.1 (647275 bp) chr RDEB01000104.1 (646764 bp) chr RDEB01000105.1 (646518 bp) chr RDEB01000106.1 (646260 bp) chr RDEB01000107.1 (644930 bp) chr RDEB01000108.1 (642161 bp) chr RDEB01000109.1 (640493 bp) chr RDEB01000110.1 (638532 bp) chr RDEB01000111.1 (637376 bp) chr RDEB01000112.1 (633474 bp) chr RDEB01000113.1 (628029 bp) chr RDEB01000114.1 (627396 bp) chr RDEB01000115.1 (627002 bp) chr RDEB01000116.1 (626913 bp) chr RDEB01000117.1 (625838 bp) chr RDEB01000118.1 (622393 bp) chr RDEB01000119.1 (621998 bp) chr RDEB01000120.1 (621618 bp) chr RDEB01000121.1 (611718 bp) chr RDEB01000122.1 (599855 bp) chr RDEB01000123.1 (592820 bp) chr RDEB01000124.1 (590584 bp) chr RDEB01000125.1 (589842 bp) chr RDEB01000126.1 (585859 bp) chr RDEB01000127.1 (580331 bp) chr RDEB01000128.1 (579729 bp) chr RDEB01000129.1 (579409 bp) chr RDEB01000130.1 (578342 bp) chr RDEB01000131.1 (577645 bp) chr RDEB01000132.1 (576140 bp) chr RDEB01000133.1 (573363 bp) chr RDEB01000134.1 (565908 bp) chr RDEB01000135.1 (561686 bp) chr RDEB01000136.1 (560038 bp) chr RDEB01000137.1 (559863 bp) chr RDEB01000138.1 (559035 bp) chr RDEB01000139.1 (553853 bp) chr RDEB01000140.1 (551847 bp) chr RDEB01000141.1 (547763 bp) chr RDEB01000142.1 (546238 bp) chr RDEB01000143.1 (544418 bp) chr RDEB01000144.1 (537790 bp) chr RDEB01000145.1 (540332 bp) chr RDEB01000146.1 (533656 bp) chr RDEB01000147.1 (506090 bp) chr RDEB01000148.1 (528813 bp) chr RDEB01000149.1 (528059 bp) chr RDEB01000150.1 (524987 bp) chr RDEB01000151.1 (524665 bp) chr RDEB01000152.1 (524542 bp) chr RDEB01000153.1 (524444 bp) chr RDEB01000154.1 (523657 bp) chr RDEB01000155.1 (523369 bp) chr RDEB01000156.1 (522933 bp) chr RDEB01000157.1 (520578 bp) chr RDEB01000158.1 (520359 bp) chr RDEB01000159.1 (519025 bp) chr RDEB01000160.1 (518877 bp) chr RDEB01000161.1 (518178 bp) chr RDEB01000162.1 (517381 bp) chr RDEB01000163.1 (516614 bp) chr 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bp) chr RDEB01027816.1 (683 bp) chr RDEB01027817.1 (683 bp) chr RDEB01027818.1 (677 bp) chr RDEB01027819.1 (676 bp) chr RDEB01027820.1 (669 bp) chr RDEB01027821.1 (655 bp) chr RDEB01027822.1 (648 bp) chr RDEB01027823.1 (647 bp) chr RDEB01027824.1 (644 bp) chr RDEB01027825.1 (642 bp) chr RDEB01027826.1 (635 bp) chr RDEB01027827.1 (632 bp) chr RDEB01027828.1 (630 bp) chr RDEB01027829.1 (628 bp) chr RDEB01027830.1 (627 bp) chr RDEB01027831.1 (626 bp) chr RDEB01027832.1 (625 bp) chr RDEB01027833.1 (622 bp) chr RDEB01027834.1 (618 bp) chr RDEB01027835.1 (611 bp) chr RDEB01027836.1 (605 bp) chr RDEB01027837.1 (603 bp) chr RDEB01027838.1 (602 bp) chr RDEB01027839.1 (602 bp) chr RDEB01027840.1 (595 bp) chr RDEB01027841.1 (587 bp) chr RDEB01027842.1 (573 bp) chr RDEB01027843.1 (580 bp) chr RDEB01027844.1 (580 bp) chr RDEB01027845.1 (579 bp) chr RDEB01027846.1 (578 bp) chr RDEB01027847.1 (577 bp) chr RDEB01027848.1 (569 bp) chr RDEB01027849.1 (563 bp) chr RDEB01027850.1 (562 bp) chr RDEB01027851.1 (561 bp) chr RDEB01027852.1 (551 bp) chr RDEB01027853.1 (546 bp) chr RDEB01027854.1 (543 bp) chr RDEB01027855.1 (536 bp) chr RDEB01027856.1 (536 bp) chr RDEB01027857.1 (531 bp) chr RDEB01027858.1 (529 bp) chr RDEB01027859.1 (527 bp) chr RDEB01027860.1 (517 bp) chr RDEB01027861.1 (517 bp) chr RDEB01027862.1 (513 bp) chr RDEB01027863.1 (509 bp) chr RDEB01027864.1 (508 bp) chr RDEB01027865.1 (507 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth2_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth2_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth2_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth2_R1_001.fastq.gz to Meth2_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth2_R1_001.fastq.gz to Meth2_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth2_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth2_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth2_R2_001.fastq.gz to Meth2_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth2_R2_001.fastq.gz to Meth2_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth2_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth2_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth2_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth2_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth2_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth2_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth2_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21540:1000_1:N:0:TTATAACC+NATATCGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTAATTATTTTTGTTTTAGTAAAGTAATTGGTTAGATAATAAGTAGTGTATTGTGGAAGTAAGGTGAAGTATTTTTATTGAGAATTTGATTGTATTTTTTTATTTTTAAGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTTAT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21540:1000_2:N:0:TTATAACC+NATATCGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 CTTAAAAATAAAAAAATACAATCAAATTCTCAATAAAAATACTTCACCTTACTTCCACAATACACTACTTATTATCTAACCAATTACTTTACTAAAACAAAAATAATTAAAAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATTCAAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF, YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth2_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth2_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21540:1000_1:N:0:TTATAACC+NATATCGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNCCAATTACTTTTATTTTAATAAAATAATTAATTAAATAATAAATAATATATTATAAAAATAAAATAAAATATTTTTATTAAAAATTTAATTATATTTTTTTATTTTTAAAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACTTAT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21540:1000_2:N:0:TTATAACC+NATATCGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 TTTAAAAATAAAAAAATATAATTAAATTTTTAATAAAAATATTTTATTTTATTTTTATAATATATTATTTATTATTTAATTAATTATTTTATTAAAATAAAAGTAATTGGAAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTTGAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF, YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth2_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth2_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21540:1000_1:N:0:TTATAACC+NATATCGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNCCAATTACTTTTATTTTAATAAAATAATTAATTAAATAATAAATAATATATTATAAAAATAAAATAAAATATTTTTATTAAAAATTTAATTATATTTTTTTATTTTTAAAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACTTAT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21540:1000_2:N:0:TTATAACC+NATATCGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 TTTAAAAATAAAAAAATATAATTAAATTTTTAATAAAAATATTTTATTTTATTTTTATAATATATTATTTATTATTTAATTAATTATTTTATTAAAATAAAAGTAATTGGAAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTTGAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF, YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth2_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth2_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21540:1000_1:N:0:TTATAACC+NATATCGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTAATTATTTTTGTTTTAGTAAAGTAATTGGTTAGATAATAAGTAGTGTATTGTGGAAGTAAGGTGAAGTATTTTTATTGAGAATTTGATTGTATTTTTTTATTTTTAAGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTTAT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21540:1000_2:N:0:TTATAACC+NATATCGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 CTTAAAAATAAAAAAATACAATCAAATTCTCAATAAAAATACTTCACCTTACTTCCACAATACACTACTTATTATCTAACCAATTACTTTACTAAAACAAAAATAATTAAAAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATTCAAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF, YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth2_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth2_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth2_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9996 (99.96%) aligned concordantly 0 times 0 (0.00%) aligned concordantly exactly 1 time 4 (0.04%) aligned concordantly >1 times 0.04% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9998 (99.98%) aligned concordantly 0 times 1 (0.01%) aligned concordantly exactly 1 time 1 (0.01%) aligned concordantly >1 times 0.02% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 10000 (100.00%) aligned concordantly 0 times 0 (0.00%) aligned concordantly exactly 1 time 0 (0.00%) aligned concordantly >1 times 0.00% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9992 (99.92%) aligned concordantly 0 times 3 (0.03%) aligned concordantly exactly 1 time 5 (0.05%) aligned concordantly >1 times 0.08% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth2_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth2_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth2_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth2_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 8 Mapping efficiency: 0.1% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9990 Sequence pairs did not map uniquely: 2 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 2 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 0 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 6 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 0 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 566 Total methylated C's in CpG context: 2 Total methylated C's in CHG context: 0 Total methylated C's in CHH context: 7 Total methylated C's in Unknown context: 0 Total unmethylated C's in CpG context: 58 Total unmethylated C's in CHG context: 100 Total unmethylated C's in CHH context: 399 Total unmethylated C's in Unknown context: 0 C methylated in CpG context: 3.3% C methylated in CHG context: 0.0% C methylated in CHH context: 1.7% Can't determine percentage of methylated Cs in unknown context (CN or CHN) if value was 0 Bismark completed in 0d 0h 0m 26s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth3_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth3_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-NCBI/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ chr RDEB01000001.1 (2051086 bp) chr RDEB01000002.1 (1931859 bp) chr RDEB01000003.1 (1909126 bp) chr RDEB01000004.1 (1580737 bp) 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RDEB01027640.1 (1181 bp) chr RDEB01027641.1 (1178 bp) chr RDEB01027642.1 (1174 bp) chr RDEB01027643.1 (1169 bp) chr RDEB01027644.1 (1165 bp) chr RDEB01027645.1 (1162 bp) chr RDEB01027646.1 (1160 bp) chr RDEB01027647.1 (1160 bp) chr RDEB01027648.1 (1159 bp) chr RDEB01027649.1 (1156 bp) chr RDEB01027650.1 (1156 bp) chr RDEB01027651.1 (1153 bp) chr RDEB01027652.1 (1152 bp) chr RDEB01027653.1 (1149 bp) chr RDEB01027654.1 (1147 bp) chr RDEB01027655.1 (1144 bp) chr RDEB01027656.1 (1141 bp) chr RDEB01027657.1 (1139 bp) chr RDEB01027658.1 (1138 bp) chr RDEB01027659.1 (1137 bp) chr RDEB01027660.1 (1126 bp) chr RDEB01027661.1 (1133 bp) chr RDEB01027662.1 (1132 bp) chr RDEB01027663.1 (1131 bp) chr RDEB01027664.1 (1130 bp) chr RDEB01027665.1 (1126 bp) chr RDEB01027666.1 (1125 bp) chr RDEB01027667.1 (1124 bp) chr RDEB01027668.1 (1124 bp) chr RDEB01027669.1 (1122 bp) chr RDEB01027670.1 (1118 bp) chr RDEB01027671.1 (1114 bp) chr RDEB01027672.1 (1111 bp) chr RDEB01027673.1 (1096 bp) chr RDEB01027674.1 (1104 bp) chr RDEB01027675.1 (1096 bp) chr RDEB01027676.1 (1093 bp) chr RDEB01027677.1 (1092 bp) chr RDEB01027678.1 (1084 bp) chr RDEB01027679.1 (1084 bp) chr RDEB01027680.1 (1079 bp) chr RDEB01027681.1 (1078 bp) chr RDEB01027682.1 (1076 bp) chr RDEB01027683.1 (1076 bp) chr RDEB01027684.1 (1072 bp) chr RDEB01027685.1 (1071 bp) chr RDEB01027686.1 (1064 bp) chr RDEB01027687.1 (1063 bp) chr RDEB01027688.1 (1060 bp) chr RDEB01027689.1 (1055 bp) chr RDEB01027690.1 (1046 bp) chr RDEB01027691.1 (1042 bp) chr RDEB01027692.1 (1042 bp) chr RDEB01027693.1 (1041 bp) chr RDEB01027694.1 (1041 bp) chr RDEB01027695.1 (1040 bp) chr RDEB01027696.1 (1038 bp) chr RDEB01027697.1 (1029 bp) chr RDEB01027698.1 (1028 bp) chr RDEB01027699.1 (1026 bp) chr RDEB01027700.1 (1024 bp) chr RDEB01027701.1 (1019 bp) chr RDEB01027702.1 (1019 bp) chr RDEB01027703.1 (1012 bp) chr RDEB01027704.1 (1010 bp) chr RDEB01027705.1 (1009 bp) chr RDEB01027706.1 (1008 bp) chr RDEB01027707.1 (1004 bp) chr RDEB01027708.1 (1002 bp) chr RDEB01027709.1 (1001 bp) chr RDEB01027710.1 (998 bp) chr RDEB01027711.1 (996 bp) chr RDEB01027712.1 (991 bp) chr RDEB01027713.1 (989 bp) chr RDEB01027714.1 (986 bp) chr RDEB01027715.1 (981 bp) chr RDEB01027716.1 (980 bp) chr RDEB01027717.1 (979 bp) chr RDEB01027718.1 (979 bp) chr RDEB01027719.1 (979 bp) chr RDEB01027720.1 (976 bp) chr RDEB01027721.1 (968 bp) chr RDEB01027722.1 (963 bp) chr RDEB01027723.1 (960 bp) chr RDEB01027724.1 (956 bp) chr RDEB01027725.1 (952 bp) chr RDEB01027726.1 (945 bp) chr RDEB01027727.1 (944 bp) chr RDEB01027728.1 (942 bp) chr RDEB01027729.1 (942 bp) chr RDEB01027730.1 (939 bp) chr RDEB01027731.1 (937 bp) chr RDEB01027732.1 (932 bp) chr RDEB01027733.1 (931 bp) chr RDEB01027734.1 (925 bp) chr RDEB01027735.1 (920 bp) chr RDEB01027736.1 (918 bp) chr RDEB01027737.1 (917 bp) chr RDEB01027738.1 (915 bp) chr RDEB01027739.1 (911 bp) chr RDEB01027740.1 (910 bp) chr RDEB01027741.1 (901 bp) chr RDEB01027742.1 (897 bp) chr RDEB01027743.1 (891 bp) chr RDEB01027744.1 (890 bp) chr RDEB01027745.1 (890 bp) chr RDEB01027746.1 (888 bp) chr RDEB01027747.1 (883 bp) chr RDEB01027748.1 (879 bp) chr RDEB01027749.1 (875 bp) chr RDEB01027750.1 (874 bp) chr RDEB01027751.1 (869 bp) chr RDEB01027752.1 (866 bp) chr RDEB01027753.1 (866 bp) chr RDEB01027754.1 (864 bp) chr RDEB01027755.1 (863 bp) chr RDEB01027756.1 (852 bp) chr RDEB01027757.1 (852 bp) chr RDEB01027758.1 (850 bp) chr RDEB01027759.1 (848 bp) chr RDEB01027760.1 (846 bp) chr RDEB01027761.1 (841 bp) chr RDEB01027762.1 (840 bp) chr RDEB01027763.1 (827 bp) chr RDEB01027764.1 (827 bp) chr RDEB01027765.1 (825 bp) chr RDEB01027766.1 (821 bp) chr RDEB01027767.1 (817 bp) chr RDEB01027768.1 (816 bp) chr RDEB01027769.1 (813 bp) chr RDEB01027770.1 (811 bp) chr RDEB01027771.1 (809 bp) chr RDEB01027772.1 (808 bp) chr RDEB01027773.1 (806 bp) chr RDEB01027774.1 (806 bp) chr RDEB01027775.1 (798 bp) chr RDEB01027776.1 (796 bp) chr RDEB01027777.1 (795 bp) chr RDEB01027778.1 (795 bp) chr RDEB01027779.1 (791 bp) chr RDEB01027780.1 (790 bp) chr RDEB01027781.1 (774 bp) chr RDEB01027782.1 (773 bp) chr RDEB01027783.1 (773 bp) chr RDEB01027784.1 (771 bp) chr RDEB01027785.1 (764 bp) chr RDEB01027786.1 (757 bp) chr RDEB01027787.1 (756 bp) chr RDEB01027788.1 (750 bp) chr RDEB01027789.1 (749 bp) chr RDEB01027790.1 (749 bp) chr RDEB01027791.1 (743 bp) chr RDEB01027792.1 (741 bp) chr RDEB01027793.1 (738 bp) chr RDEB01027794.1 (730 bp) chr RDEB01027795.1 (729 bp) chr RDEB01027796.1 (726 bp) chr RDEB01027797.1 (725 bp) chr RDEB01027798.1 (724 bp) chr RDEB01027799.1 (724 bp) chr RDEB01027800.1 (721 bp) chr RDEB01027801.1 (713 bp) chr RDEB01027802.1 (711 bp) chr RDEB01027803.1 (710 bp) chr RDEB01027804.1 (708 bp) chr RDEB01027805.1 (708 bp) chr RDEB01027806.1 (706 bp) chr RDEB01027807.1 (703 bp) chr RDEB01027808.1 (700 bp) chr RDEB01027809.1 (696 bp) chr RDEB01027810.1 (693 bp) chr RDEB01027811.1 (692 bp) chr RDEB01027812.1 (690 bp) chr RDEB01027813.1 (687 bp) chr RDEB01027814.1 (684 bp) chr RDEB01027815.1 (683 bp) chr RDEB01027816.1 (683 bp) chr RDEB01027817.1 (683 bp) chr RDEB01027818.1 (677 bp) chr RDEB01027819.1 (676 bp) chr RDEB01027820.1 (669 bp) chr RDEB01027821.1 (655 bp) chr RDEB01027822.1 (648 bp) chr RDEB01027823.1 (647 bp) chr RDEB01027824.1 (644 bp) chr RDEB01027825.1 (642 bp) chr RDEB01027826.1 (635 bp) chr RDEB01027827.1 (632 bp) chr RDEB01027828.1 (630 bp) chr RDEB01027829.1 (628 bp) chr RDEB01027830.1 (627 bp) chr RDEB01027831.1 (626 bp) chr RDEB01027832.1 (625 bp) chr RDEB01027833.1 (622 bp) chr RDEB01027834.1 (618 bp) chr RDEB01027835.1 (611 bp) chr RDEB01027836.1 (605 bp) chr RDEB01027837.1 (603 bp) chr RDEB01027838.1 (602 bp) chr RDEB01027839.1 (602 bp) chr RDEB01027840.1 (595 bp) chr RDEB01027841.1 (587 bp) chr RDEB01027842.1 (573 bp) chr RDEB01027843.1 (580 bp) chr RDEB01027844.1 (580 bp) chr RDEB01027845.1 (579 bp) chr RDEB01027846.1 (578 bp) chr RDEB01027847.1 (577 bp) chr RDEB01027848.1 (569 bp) chr RDEB01027849.1 (563 bp) chr RDEB01027850.1 (562 bp) chr RDEB01027851.1 (561 bp) chr RDEB01027852.1 (551 bp) chr RDEB01027853.1 (546 bp) chr RDEB01027854.1 (543 bp) chr RDEB01027855.1 (536 bp) chr RDEB01027856.1 (536 bp) chr RDEB01027857.1 (531 bp) chr RDEB01027858.1 (529 bp) chr RDEB01027859.1 (527 bp) chr RDEB01027860.1 (517 bp) chr RDEB01027861.1 (517 bp) chr RDEB01027862.1 (513 bp) chr RDEB01027863.1 (509 bp) chr RDEB01027864.1 (508 bp) chr RDEB01027865.1 (507 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth3_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth3_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth3_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth3_R1_001.fastq.gz to Meth3_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth3_R1_001.fastq.gz to Meth3_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth3_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth3_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth3_R2_001.fastq.gz to Meth3_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth3_R2_001.fastq.gz to Meth3_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth3_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth3_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth3_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth3_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth3_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth3_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth3_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21377:1000_1:N:0:GGACTTGG+NGCAGACG/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTAAAATATTTAAAATAAATAAATTAAAAATTATTAAATAAAAATTTATAAATTTAATAAATTAAATTTTTTTATTAATAAAATTAATTTAAATAATTATTATTATTATTAAATTATATATATAAAATTAATAAATATATTTTAAAAA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,F,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21377:1000_2:N:0:GGACTTGG+NGCAGACG/2 141 * 0 0 * * 0 0 AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth3_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth3_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21377:1000_1:N:0:GGACTTGG+NGCAGACG/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTAAAATATCTAAAACAAACAAATTAAAAACCATTAAATAAAAACTTACAAACCCAATAAACTAAATTTTCTCATCAATAAAACTAACTTAAACAACTACTACTATTACCAAATCACATACACAAAATCAACAAACATATTTTAAAAA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,F,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21377:1000_2:N:0:GGACTTGG+NGCAGACG/2 141 * 0 0 * * 0 0 GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth3_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth3_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21377:1000_1:N:0:GGACTTGG+NGCAGACG/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTAAAATATCTAAAACAAACAAATTAAAAACCATTAAATAAAAACTTACAAACCCAATAAACTAAATTTTCTCATCAATAAAACTAACTTAAACAACTACTACTATTACCAAATCACATACACAAAATCAACAAACATATTTTAAAAA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,F,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21377:1000_2:N:0:GGACTTGG+NGCAGACG/2 141 * 0 0 * * 0 0 GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth3_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth3_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21377:1000_1:N:0:GGACTTGG+NGCAGACG/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTAAAATATTTAAAATAAATAAATTAAAAATTATTAAATAAAAATTTATAAATTTAATAAATTAAATTTTTTTATTAATAAAATTAATTTAAATAATTATTATTATTATTAAATTATATATATAAAATTAATAAATATATTTTAAAAA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,F,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21377:1000_2:N:0:GGACTTGG+NGCAGACG/2 141 * 0 0 * * 0 0 AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth3_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth3_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth3_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9994 (99.94%) aligned concordantly 0 times 0 (0.00%) aligned concordantly exactly 1 time 6 (0.06%) aligned concordantly >1 times 0.06% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9995 (99.95%) aligned concordantly 0 times 4 (0.04%) aligned concordantly exactly 1 time 1 (0.01%) aligned concordantly >1 times 0.05% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9993 (99.93%) aligned concordantly 0 times 2 (0.02%) aligned concordantly exactly 1 time 5 (0.05%) aligned concordantly >1 times 0.07% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9998 (99.98%) aligned concordantly 0 times 0 (0.00%) aligned concordantly exactly 1 time 2 (0.02%) aligned concordantly >1 times 0.02% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth3_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth3_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth3_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth3_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 7 Mapping efficiency: 0.1% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9988 Sequence pairs did not map uniquely: 5 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 0 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 3 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 1 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 3 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 401 Total methylated C's in CpG context: 20 Total methylated C's in CHG context: 0 Total methylated C's in CHH context: 0 Total methylated C's in Unknown context: 0 Total unmethylated C's in CpG context: 52 Total unmethylated C's in CHG context: 94 Total unmethylated C's in CHH context: 235 Total unmethylated C's in Unknown context: 0 C methylated in CpG context: 27.8% C methylated in CHG context: 0.0% C methylated in CHH context: 0.0% Can't determine percentage of methylated Cs in unknown context (CN or CHN) if value was 0 Bismark completed in 0d 0h 0m 26s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth4_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth4_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-NCBI/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ chr RDEB01000001.1 (2051086 bp) chr RDEB01000002.1 (1931859 bp) chr RDEB01000003.1 (1909126 bp) chr RDEB01000004.1 (1580737 bp) chr RDEB01000005.1 (1562395 bp) chr RDEB01000006.1 (1561676 bp) chr RDEB01000007.1 (1468524 bp) chr RDEB01000008.1 (1449017 bp) chr RDEB01000009.1 (1288384 bp) chr RDEB01000010.1 (1267912 bp) chr RDEB01000011.1 (1226981 bp) chr RDEB01000012.1 (1203453 bp) chr RDEB01000013.1 (1196056 bp) chr RDEB01000014.1 (1161273 bp) chr RDEB01000015.1 (1155058 bp) chr RDEB01000016.1 (1154061 bp) chr RDEB01000017.1 (1126579 bp) chr RDEB01000018.1 (1112599 bp) chr RDEB01000019.1 (1105743 bp) chr RDEB01000020.1 (1047533 bp) chr RDEB01000021.1 (1042078 bp) chr RDEB01000022.1 (1027815 bp) chr RDEB01000023.1 (1026134 bp) chr RDEB01000024.1 (1017152 bp) chr RDEB01000025.1 (1013905 bp) chr RDEB01000026.1 (1011462 bp) chr RDEB01000027.1 (997532 bp) chr RDEB01000028.1 (977069 bp) chr RDEB01000029.1 (970043 bp) chr RDEB01000030.1 (959368 bp) chr RDEB01000031.1 (946529 bp) chr RDEB01000032.1 (941419 bp) chr RDEB01000033.1 (938138 bp) chr RDEB01000034.1 (914659 bp) chr RDEB01000035.1 (910955 bp) chr RDEB01000036.1 (910339 bp) chr RDEB01000037.1 (907300 bp) chr RDEB01000038.1 (906231 bp) chr RDEB01000039.1 (898108 bp) chr RDEB01000040.1 (891924 bp) chr RDEB01000041.1 (881484 bp) chr RDEB01000042.1 (873709 bp) chr RDEB01000043.1 (872072 bp) chr RDEB01000044.1 (860338 bp) chr RDEB01000045.1 (852749 bp) chr RDEB01000046.1 (845408 bp) chr RDEB01000047.1 (844817 bp) chr RDEB01000048.1 (841333 bp) chr RDEB01000049.1 (838287 bp) chr RDEB01000050.1 (837738 bp) chr RDEB01000051.1 (831214 bp) chr RDEB01000052.1 (821654 bp) chr RDEB01000053.1 (807789 bp) chr RDEB01000054.1 (804604 bp) chr RDEB01000055.1 (801587 bp) chr RDEB01000056.1 (789434 bp) chr RDEB01000057.1 (791485 bp) chr RDEB01000058.1 (791387 bp) chr RDEB01000059.1 (787461 bp) chr RDEB01000060.1 (785475 bp) chr RDEB01000061.1 (776585 bp) chr RDEB01000062.1 (765173 bp) chr RDEB01000063.1 (762781 bp) chr RDEB01000064.1 (756547 bp) chr RDEB01000065.1 (750445 bp) chr RDEB01000066.1 (750425 bp) chr RDEB01000067.1 (748716 bp) chr RDEB01000068.1 (744853 bp) chr RDEB01000069.1 (743781 bp) chr RDEB01000070.1 (736536 bp) chr RDEB01000071.1 (735828 bp) chr RDEB01000072.1 (735810 bp) chr RDEB01000073.1 (734211 bp) chr RDEB01000074.1 (727944 bp) chr RDEB01000075.1 (714259 bp) chr RDEB01000076.1 (710645 bp) chr RDEB01000077.1 (709730 bp) chr RDEB01000078.1 (706098 bp) chr RDEB01000079.1 (702875 bp) chr RDEB01000080.1 (697409 bp) chr RDEB01000081.1 (697225 bp) chr RDEB01000082.1 (696462 bp) chr RDEB01000083.1 (691775 bp) chr RDEB01000084.1 (689230 bp) chr RDEB01000085.1 (689149 bp) chr RDEB01000086.1 (685932 bp) chr RDEB01000087.1 (683424 bp) chr RDEB01000088.1 (683185 bp) chr RDEB01000089.1 (682905 bp) chr RDEB01000090.1 (680182 bp) chr RDEB01000091.1 (670709 bp) chr RDEB01000092.1 (670410 bp) chr RDEB01000093.1 (668648 bp) chr RDEB01000094.1 (668448 bp) chr RDEB01000095.1 (664016 bp) chr RDEB01000096.1 (659099 bp) chr RDEB01000097.1 (657048 bp) chr RDEB01000098.1 (656749 bp) chr RDEB01000099.1 (652702 bp) chr RDEB01000100.1 (651628 bp) chr RDEB01000101.1 (651613 bp) chr RDEB01000102.1 (650710 bp) chr RDEB01000103.1 (647275 bp) chr RDEB01000104.1 (646764 bp) chr RDEB01000105.1 (646518 bp) chr RDEB01000106.1 (646260 bp) chr RDEB01000107.1 (644930 bp) chr RDEB01000108.1 (642161 bp) chr RDEB01000109.1 (640493 bp) chr RDEB01000110.1 (638532 bp) chr RDEB01000111.1 (637376 bp) chr RDEB01000112.1 (633474 bp) chr RDEB01000113.1 (628029 bp) chr RDEB01000114.1 (627396 bp) chr RDEB01000115.1 (627002 bp) chr RDEB01000116.1 (626913 bp) chr RDEB01000117.1 (625838 bp) chr RDEB01000118.1 (622393 bp) chr RDEB01000119.1 (621998 bp) chr RDEB01000120.1 (621618 bp) chr RDEB01000121.1 (611718 bp) chr RDEB01000122.1 (599855 bp) chr RDEB01000123.1 (592820 bp) chr RDEB01000124.1 (590584 bp) chr RDEB01000125.1 (589842 bp) chr RDEB01000126.1 (585859 bp) chr RDEB01000127.1 (580331 bp) chr RDEB01000128.1 (579729 bp) chr RDEB01000129.1 (579409 bp) chr RDEB01000130.1 (578342 bp) chr RDEB01000131.1 (577645 bp) chr RDEB01000132.1 (576140 bp) chr RDEB01000133.1 (573363 bp) chr RDEB01000134.1 (565908 bp) chr RDEB01000135.1 (561686 bp) chr RDEB01000136.1 (560038 bp) chr RDEB01000137.1 (559863 bp) chr RDEB01000138.1 (559035 bp) chr RDEB01000139.1 (553853 bp) chr RDEB01000140.1 (551847 bp) chr RDEB01000141.1 (547763 bp) chr RDEB01000142.1 (546238 bp) chr RDEB01000143.1 (544418 bp) chr RDEB01000144.1 (537790 bp) chr RDEB01000145.1 (540332 bp) chr RDEB01000146.1 (533656 bp) chr RDEB01000147.1 (506090 bp) chr RDEB01000148.1 (528813 bp) chr RDEB01000149.1 (528059 bp) chr RDEB01000150.1 (524987 bp) chr RDEB01000151.1 (524665 bp) chr RDEB01000152.1 (524542 bp) chr RDEB01000153.1 (524444 bp) chr RDEB01000154.1 (523657 bp) chr RDEB01000155.1 (523369 bp) chr RDEB01000156.1 (522933 bp) chr RDEB01000157.1 (520578 bp) chr RDEB01000158.1 (520359 bp) chr RDEB01000159.1 (519025 bp) chr RDEB01000160.1 (518877 bp) chr RDEB01000161.1 (518178 bp) chr RDEB01000162.1 (517381 bp) chr RDEB01000163.1 (516614 bp) chr RDEB01000164.1 (515333 bp) chr RDEB01000165.1 (514473 bp) chr RDEB01000166.1 (511146 bp) chr RDEB01000167.1 (509320 bp) chr RDEB01000168.1 (507709 bp) chr RDEB01000169.1 (505001 bp) chr RDEB01000170.1 (504139 bp) chr RDEB01000171.1 (502923 bp) chr RDEB01000172.1 (500821 bp) chr RDEB01000173.1 (500143 bp) chr RDEB01000174.1 (500037 bp) chr RDEB01000175.1 (497662 bp) chr RDEB01000176.1 (496263 bp) chr RDEB01000177.1 (494501 bp) chr RDEB01000178.1 (493784 bp) chr RDEB01000179.1 (493278 bp) chr RDEB01000180.1 (492261 bp) chr RDEB01000181.1 (491357 bp) chr RDEB01000182.1 (488687 bp) chr RDEB01000183.1 (488175 bp) chr RDEB01000184.1 (484913 bp) chr RDEB01000185.1 (484851 bp) chr RDEB01000186.1 (483566 bp) chr RDEB01000187.1 (482557 bp) chr RDEB01000188.1 (481052 bp) chr RDEB01000189.1 (479513 bp) chr RDEB01000190.1 (479412 bp) chr RDEB01000191.1 (479346 bp) chr RDEB01000192.1 (478195 bp) chr RDEB01000193.1 (478158 bp) chr RDEB01000194.1 (478095 bp) chr RDEB01000195.1 (475869 bp) chr 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RDEB01027851.1 (561 bp) chr RDEB01027852.1 (551 bp) chr RDEB01027853.1 (546 bp) chr RDEB01027854.1 (543 bp) chr RDEB01027855.1 (536 bp) chr RDEB01027856.1 (536 bp) chr RDEB01027857.1 (531 bp) chr RDEB01027858.1 (529 bp) chr RDEB01027859.1 (527 bp) chr RDEB01027860.1 (517 bp) chr RDEB01027861.1 (517 bp) chr RDEB01027862.1 (513 bp) chr RDEB01027863.1 (509 bp) chr RDEB01027864.1 (508 bp) chr RDEB01027865.1 (507 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth4_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth4_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth4_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth4_R1_001.fastq.gz to Meth4_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth4_R1_001.fastq.gz to Meth4_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth4_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth4_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth4_R2_001.fastq.gz to Meth4_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth4_R2_001.fastq.gz to Meth4_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth4_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth4_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth4_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth4_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth4_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth4_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth4_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21522:1000_1:N:0:AAGTCCAA+NATGAGTA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNGGTGGGGTAGTAATGATTATTGGTGGGTTGATTTTTTTGTTTTTTATTATTGGGTTGATTGGTTATTATTTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATAAGTTTAAATTTTGTATGTTGTTTTATGTTTGAAAAGAGGGG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,:F:,:FF,F,:FF,,FFF,,,,FF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21522:1000_2:N:0:AAGTCCAA+NATGAGTA/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAAATAATAACCAATCAACCCAATAATAAAAAACAAAAAAATCAACCCACCAATAATCATTACTACCCCACCCAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATTACTCATAATATAAATCTCAATAATCACCATATCATTAAAAAC FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,:FFFFF,F,:,: YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth4_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth4_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21522:1000_1:N:0:AAGTCCAA+NATGAGTA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNAATAAAATAATAATAATTATTAATAAATTAATTTTTTTATTTTTTATTATTAAATTAATTAATTATTATTCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACAAATCCAAATCTCATATACCATCTTATACTTAAAAAAAAAAA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,:F:,:FF,F,:FF,,FFF,,,,FF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21522:1000_2:N:0:AAGTCCAA+NATGAGTA/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGAATAATAATTAATTAATTTAATAATAAAAAATAAAAAAATTAATTTATTAATAATTATTATTATTTTATTTAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTATTTATAGTGTAGATTTTGGTGGTTGTTGTATTATTAAGAAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,:FFFFF,F,:,: YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth4_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth4_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21522:1000_1:N:0:AAGTCCAA+NATGAGTA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNAATAAAATAATAATAATTATTAATAAATTAATTTTTTTATTTTTTATTATTAAATTAATTAATTATTATTCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACAAATCCAAATCTCATATACCATCTTATACTTAAAAAAAAAAA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,:F:,:FF,F,:FF,,FFF,,,,FF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21522:1000_2:N:0:AAGTCCAA+NATGAGTA/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGAATAATAATTAATTAATTTAATAATAAAAAATAAAAAAATTAATTTATTAATAATTATTATTATTTTATTTAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTATTTATAGTGTAGATTTTGGTGGTTGTTGTATTATTAAGAAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,:FFFFF,F,:,: YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth4_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth4_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21522:1000_1:N:0:AAGTCCAA+NATGAGTA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNGGTGGGGTAGTAATGATTATTGGTGGGTTGATTTTTTTGTTTTTTATTATTGGGTTGATTGGTTATTATTTGAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATAAGTTTAAATTTTGTATGTTGTTTTATGTTTGAAAAGAGGGG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,:F:,:FF,F,:FF,,FFF,,,,FF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21522:1000_2:N:0:AAGTCCAA+NATGAGTA/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAAATAATAACCAATCAACCCAATAATAAAAAACAAAAAAATCAACCCACCAATAATCATTACTACCCCACCCAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATTACTCATAATATAAATCTCAATAATCACCATATCATTAAAAAC FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF,:FFFFF,F,:,: YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth4_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth4_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth4_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9994 (99.94%) aligned concordantly 0 times 2 (0.02%) aligned concordantly exactly 1 time 4 (0.04%) aligned concordantly >1 times 0.06% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9993 (99.93%) aligned concordantly 0 times 1 (0.01%) aligned concordantly exactly 1 time 6 (0.06%) aligned concordantly >1 times 0.07% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9993 (99.93%) aligned concordantly 0 times 2 (0.02%) aligned concordantly exactly 1 time 5 (0.05%) aligned concordantly >1 times 0.07% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9991 (99.91%) aligned concordantly 0 times 4 (0.04%) aligned concordantly exactly 1 time 5 (0.05%) aligned concordantly >1 times 0.09% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth4_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth4_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth4_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth4_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 10 Mapping efficiency: 0.1% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9982 Sequence pairs did not map uniquely: 8 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 4 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 2 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 3 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 1 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 659 Total methylated C's in CpG context: 8 Total methylated C's in CHG context: 2 Total methylated C's in CHH context: 0 Total methylated C's in Unknown context: 0 Total unmethylated C's in CpG context: 110 Total unmethylated C's in CHG context: 151 Total unmethylated C's in CHH context: 388 Total unmethylated C's in Unknown context: 0 C methylated in CpG context: 6.8% C methylated in CHG context: 1.3% C methylated in CHH context: 0.0% Can't determine percentage of methylated Cs in unknown context (CN or CHN) if value was 0 Bismark completed in 0d 0h 0m 26s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth5_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth5_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-NCBI/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ chr RDEB01000001.1 (2051086 bp) chr RDEB01000002.1 (1931859 bp) chr RDEB01000003.1 (1909126 bp) chr RDEB01000004.1 (1580737 bp) chr RDEB01000005.1 (1562395 bp) chr RDEB01000006.1 (1561676 bp) chr RDEB01000007.1 (1468524 bp) chr RDEB01000008.1 (1449017 bp) chr RDEB01000009.1 (1288384 bp) chr RDEB01000010.1 (1267912 bp) chr RDEB01000011.1 (1226981 bp) chr RDEB01000012.1 (1203453 bp) chr RDEB01000013.1 (1196056 bp) chr RDEB01000014.1 (1161273 bp) chr RDEB01000015.1 (1155058 bp) chr RDEB01000016.1 (1154061 bp) chr RDEB01000017.1 (1126579 bp) chr RDEB01000018.1 (1112599 bp) chr RDEB01000019.1 (1105743 bp) chr RDEB01000020.1 (1047533 bp) chr RDEB01000021.1 (1042078 bp) chr RDEB01000022.1 (1027815 bp) chr RDEB01000023.1 (1026134 bp) chr RDEB01000024.1 (1017152 bp) chr RDEB01000025.1 (1013905 bp) chr RDEB01000026.1 (1011462 bp) chr RDEB01000027.1 (997532 bp) chr RDEB01000028.1 (977069 bp) chr RDEB01000029.1 (970043 bp) chr RDEB01000030.1 (959368 bp) chr RDEB01000031.1 (946529 bp) chr RDEB01000032.1 (941419 bp) chr RDEB01000033.1 (938138 bp) chr RDEB01000034.1 (914659 bp) chr RDEB01000035.1 (910955 bp) chr RDEB01000036.1 (910339 bp) chr RDEB01000037.1 (907300 bp) chr RDEB01000038.1 (906231 bp) chr RDEB01000039.1 (898108 bp) chr RDEB01000040.1 (891924 bp) chr RDEB01000041.1 (881484 bp) chr RDEB01000042.1 (873709 bp) chr RDEB01000043.1 (872072 bp) chr RDEB01000044.1 (860338 bp) chr RDEB01000045.1 (852749 bp) chr RDEB01000046.1 (845408 bp) chr RDEB01000047.1 (844817 bp) chr RDEB01000048.1 (841333 bp) chr RDEB01000049.1 (838287 bp) chr RDEB01000050.1 (837738 bp) chr RDEB01000051.1 (831214 bp) chr RDEB01000052.1 (821654 bp) chr RDEB01000053.1 (807789 bp) chr RDEB01000054.1 (804604 bp) chr RDEB01000055.1 (801587 bp) chr RDEB01000056.1 (789434 bp) chr RDEB01000057.1 (791485 bp) chr RDEB01000058.1 (791387 bp) chr RDEB01000059.1 (787461 bp) chr RDEB01000060.1 (785475 bp) chr RDEB01000061.1 (776585 bp) chr RDEB01000062.1 (765173 bp) chr RDEB01000063.1 (762781 bp) chr RDEB01000064.1 (756547 bp) chr RDEB01000065.1 (750445 bp) chr RDEB01000066.1 (750425 bp) chr RDEB01000067.1 (748716 bp) chr 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RDEB01027709.1 (1001 bp) chr RDEB01027710.1 (998 bp) chr RDEB01027711.1 (996 bp) chr RDEB01027712.1 (991 bp) chr RDEB01027713.1 (989 bp) chr RDEB01027714.1 (986 bp) chr RDEB01027715.1 (981 bp) chr RDEB01027716.1 (980 bp) chr RDEB01027717.1 (979 bp) chr RDEB01027718.1 (979 bp) chr RDEB01027719.1 (979 bp) chr RDEB01027720.1 (976 bp) chr RDEB01027721.1 (968 bp) chr RDEB01027722.1 (963 bp) chr RDEB01027723.1 (960 bp) chr RDEB01027724.1 (956 bp) chr RDEB01027725.1 (952 bp) chr RDEB01027726.1 (945 bp) chr RDEB01027727.1 (944 bp) chr RDEB01027728.1 (942 bp) chr RDEB01027729.1 (942 bp) chr RDEB01027730.1 (939 bp) chr RDEB01027731.1 (937 bp) chr RDEB01027732.1 (932 bp) chr RDEB01027733.1 (931 bp) chr RDEB01027734.1 (925 bp) chr RDEB01027735.1 (920 bp) chr RDEB01027736.1 (918 bp) chr RDEB01027737.1 (917 bp) chr RDEB01027738.1 (915 bp) chr RDEB01027739.1 (911 bp) chr RDEB01027740.1 (910 bp) chr RDEB01027741.1 (901 bp) chr RDEB01027742.1 (897 bp) chr RDEB01027743.1 (891 bp) chr RDEB01027744.1 (890 bp) chr RDEB01027745.1 (890 bp) chr RDEB01027746.1 (888 bp) chr RDEB01027747.1 (883 bp) chr RDEB01027748.1 (879 bp) chr RDEB01027749.1 (875 bp) chr RDEB01027750.1 (874 bp) chr RDEB01027751.1 (869 bp) chr RDEB01027752.1 (866 bp) chr RDEB01027753.1 (866 bp) chr RDEB01027754.1 (864 bp) chr RDEB01027755.1 (863 bp) chr RDEB01027756.1 (852 bp) chr RDEB01027757.1 (852 bp) chr RDEB01027758.1 (850 bp) chr RDEB01027759.1 (848 bp) chr RDEB01027760.1 (846 bp) chr RDEB01027761.1 (841 bp) chr RDEB01027762.1 (840 bp) chr RDEB01027763.1 (827 bp) chr RDEB01027764.1 (827 bp) chr RDEB01027765.1 (825 bp) chr RDEB01027766.1 (821 bp) chr RDEB01027767.1 (817 bp) chr RDEB01027768.1 (816 bp) chr RDEB01027769.1 (813 bp) chr RDEB01027770.1 (811 bp) chr RDEB01027771.1 (809 bp) chr RDEB01027772.1 (808 bp) chr RDEB01027773.1 (806 bp) chr RDEB01027774.1 (806 bp) chr RDEB01027775.1 (798 bp) chr RDEB01027776.1 (796 bp) chr RDEB01027777.1 (795 bp) chr RDEB01027778.1 (795 bp) chr RDEB01027779.1 (791 bp) chr RDEB01027780.1 (790 bp) chr RDEB01027781.1 (774 bp) chr RDEB01027782.1 (773 bp) chr RDEB01027783.1 (773 bp) chr RDEB01027784.1 (771 bp) chr RDEB01027785.1 (764 bp) chr RDEB01027786.1 (757 bp) chr RDEB01027787.1 (756 bp) chr RDEB01027788.1 (750 bp) chr RDEB01027789.1 (749 bp) chr RDEB01027790.1 (749 bp) chr RDEB01027791.1 (743 bp) chr RDEB01027792.1 (741 bp) chr RDEB01027793.1 (738 bp) chr RDEB01027794.1 (730 bp) chr RDEB01027795.1 (729 bp) chr RDEB01027796.1 (726 bp) chr RDEB01027797.1 (725 bp) chr RDEB01027798.1 (724 bp) chr RDEB01027799.1 (724 bp) chr RDEB01027800.1 (721 bp) chr RDEB01027801.1 (713 bp) chr RDEB01027802.1 (711 bp) chr RDEB01027803.1 (710 bp) chr RDEB01027804.1 (708 bp) chr RDEB01027805.1 (708 bp) chr RDEB01027806.1 (706 bp) chr RDEB01027807.1 (703 bp) chr RDEB01027808.1 (700 bp) chr RDEB01027809.1 (696 bp) chr RDEB01027810.1 (693 bp) chr RDEB01027811.1 (692 bp) chr RDEB01027812.1 (690 bp) chr RDEB01027813.1 (687 bp) chr RDEB01027814.1 (684 bp) chr RDEB01027815.1 (683 bp) chr RDEB01027816.1 (683 bp) chr RDEB01027817.1 (683 bp) chr RDEB01027818.1 (677 bp) chr RDEB01027819.1 (676 bp) chr RDEB01027820.1 (669 bp) chr RDEB01027821.1 (655 bp) chr RDEB01027822.1 (648 bp) chr RDEB01027823.1 (647 bp) chr RDEB01027824.1 (644 bp) chr RDEB01027825.1 (642 bp) chr RDEB01027826.1 (635 bp) chr RDEB01027827.1 (632 bp) chr RDEB01027828.1 (630 bp) chr RDEB01027829.1 (628 bp) chr RDEB01027830.1 (627 bp) chr RDEB01027831.1 (626 bp) chr RDEB01027832.1 (625 bp) chr RDEB01027833.1 (622 bp) chr RDEB01027834.1 (618 bp) chr RDEB01027835.1 (611 bp) chr RDEB01027836.1 (605 bp) chr RDEB01027837.1 (603 bp) chr RDEB01027838.1 (602 bp) chr RDEB01027839.1 (602 bp) chr RDEB01027840.1 (595 bp) chr RDEB01027841.1 (587 bp) chr RDEB01027842.1 (573 bp) chr RDEB01027843.1 (580 bp) chr RDEB01027844.1 (580 bp) chr RDEB01027845.1 (579 bp) chr RDEB01027846.1 (578 bp) chr RDEB01027847.1 (577 bp) chr RDEB01027848.1 (569 bp) chr RDEB01027849.1 (563 bp) chr RDEB01027850.1 (562 bp) chr RDEB01027851.1 (561 bp) chr RDEB01027852.1 (551 bp) chr RDEB01027853.1 (546 bp) chr RDEB01027854.1 (543 bp) chr RDEB01027855.1 (536 bp) chr RDEB01027856.1 (536 bp) chr RDEB01027857.1 (531 bp) chr RDEB01027858.1 (529 bp) chr RDEB01027859.1 (527 bp) chr RDEB01027860.1 (517 bp) chr RDEB01027861.1 (517 bp) chr RDEB01027862.1 (513 bp) chr RDEB01027863.1 (509 bp) chr RDEB01027864.1 (508 bp) chr RDEB01027865.1 (507 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth5_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth5_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth5_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth5_R1_001.fastq.gz to Meth5_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth5_R1_001.fastq.gz to Meth5_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth5_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth5_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth5_R2_001.fastq.gz to Meth5_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth5_R2_001.fastq.gz to Meth5_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth5_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth5_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth5_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth5_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth5_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth5_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth5_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21829:1000_1:N:0:ATCCACTG+NGGTGCGT/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNATAAAAATTATTTATATATATTTATAATTAATTTATAATAAAAATTATATTATATATTATAATATAAATAAATTATTAAAAATTATATTATATTATTTAAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATATTTATTGATTTTGT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21829:1000_2:N:0:ATCCACTG+NGGTGCGT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TAAATAATATAATATAATTTTTAATAATTTATTTATATTATAATATATAATATAATTTTTATTATAAATTAATTATAAATATATATAAATAATTTTTCTCAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATACACACCTATATAAAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF::FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF:FFFF:F: YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth5_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth5_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21829:1000_1:N:0:ATCCACTG+NGGTGCGT/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNATAAAAATCACCCACATACATCTACAACTAACCCATAATAAAAACCATACTACACACCACAACATAAATAAACTACTAAAAATTACACCACACCATCCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACATCCACTAATCTCAT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21829:1000_2:N:0:ATCCACTG+NGGTGCGT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGGATGGTGTGGTGTAATTTTTAGTAGTTTATTTATGTTGTGGTGTGTAGTATGGTTTTTATTATGGGTTAGTTGTAGATGTATGTGGGTGATTTTTTTTGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTATGTATTTGTGTAGAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF::FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF:FFFF:F: YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth5_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth5_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21829:1000_1:N:0:ATCCACTG+NGGTGCGT/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNATAAAAATCACCCACATACATCTACAACTAACCCATAATAAAAACCATACTACACACCACAACATAAATAAACTACTAAAAATTACACCACACCATCCAAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACATCCACTAATCTCAT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21829:1000_2:N:0:ATCCACTG+NGGTGCGT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGGATGGTGTGGTGTAATTTTTAGTAGTTTATTTATGTTGTGGTGTGTAGTATGGTTTTTATTATGGGTTAGTTGTAGATGTATGTGGGTGATTTTTTTTGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTATGTATTTGTGTAGAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF::FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF:FFFF:F: YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth5_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth5_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21829:1000_1:N:0:ATCCACTG+NGGTGCGT/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNATAAAAATTATTTATATATATTTATAATTAATTTATAATAAAAATTATATTATATATTATAATATAAATAAATTATTAAAAATTATATTATATTATTTAAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATATTTATTGATTTTGT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21829:1000_2:N:0:ATCCACTG+NGGTGCGT/2 141 * 0 0 * * 0 0 TAAATAATATAATATAATTTTTAATAATTTATTTATATTATAATATATAATATAATTTTTATTATAAATTAATTATAAATATATATAAATAATTTTTCTCAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATACACACCTATATAAAT FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF::FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFF:FFFF:F: YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth5_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth5_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth5_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9991 (99.91%) aligned concordantly 0 times 1 (0.01%) aligned concordantly exactly 1 time 8 (0.08%) aligned concordantly >1 times 0.09% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9993 (99.93%) aligned concordantly 0 times 2 (0.02%) aligned concordantly exactly 1 time 5 (0.05%) aligned concordantly >1 times 0.07% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9987 (99.87%) aligned concordantly 0 times 6 (0.06%) aligned concordantly exactly 1 time 7 (0.07%) aligned concordantly >1 times 0.13% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9992 (99.92%) aligned concordantly 0 times 2 (0.02%) aligned concordantly exactly 1 time 6 (0.06%) aligned concordantly >1 times 0.08% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth5_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth5_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth5_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth5_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 14 Mapping efficiency: 0.1% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9977 Sequence pairs did not map uniquely: 9 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 2 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 6 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 3 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 3 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 898 Total methylated C's in CpG context: 21 Total methylated C's in CHG context: 0 Total methylated C's in CHH context: 2 Total methylated C's in Unknown context: 0 Total unmethylated C's in CpG context: 145 Total unmethylated C's in CHG context: 158 Total unmethylated C's in CHH context: 572 Total unmethylated C's in Unknown context: 0 C methylated in CpG context: 12.7% C methylated in CHG context: 0.0% C methylated in CHH context: 0.3% Can't determine percentage of methylated Cs in unknown context (CN or CHN) if value was 0 Bismark completed in 0d 0h 0m 27s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth6_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth6_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-NCBI/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ chr RDEB01000001.1 (2051086 bp) chr RDEB01000002.1 (1931859 bp) chr RDEB01000003.1 (1909126 bp) chr RDEB01000004.1 (1580737 bp) chr RDEB01000005.1 (1562395 bp) chr RDEB01000006.1 (1561676 bp) chr RDEB01000007.1 (1468524 bp) chr RDEB01000008.1 (1449017 bp) chr RDEB01000009.1 (1288384 bp) chr RDEB01000010.1 (1267912 bp) chr RDEB01000011.1 (1226981 bp) chr RDEB01000012.1 (1203453 bp) chr RDEB01000013.1 (1196056 bp) chr RDEB01000014.1 (1161273 bp) chr RDEB01000015.1 (1155058 bp) chr RDEB01000016.1 (1154061 bp) chr RDEB01000017.1 (1126579 bp) chr RDEB01000018.1 (1112599 bp) chr RDEB01000019.1 (1105743 bp) chr RDEB01000020.1 (1047533 bp) chr RDEB01000021.1 (1042078 bp) chr RDEB01000022.1 (1027815 bp) chr RDEB01000023.1 (1026134 bp) chr RDEB01000024.1 (1017152 bp) chr RDEB01000025.1 (1013905 bp) chr RDEB01000026.1 (1011462 bp) chr RDEB01000027.1 (997532 bp) chr RDEB01000028.1 (977069 bp) chr RDEB01000029.1 (970043 bp) chr RDEB01000030.1 (959368 bp) chr RDEB01000031.1 (946529 bp) chr RDEB01000032.1 (941419 bp) chr RDEB01000033.1 (938138 bp) chr RDEB01000034.1 (914659 bp) chr RDEB01000035.1 (910955 bp) chr 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RDEB01027709.1 (1001 bp) chr RDEB01027710.1 (998 bp) chr RDEB01027711.1 (996 bp) chr RDEB01027712.1 (991 bp) chr RDEB01027713.1 (989 bp) chr RDEB01027714.1 (986 bp) chr RDEB01027715.1 (981 bp) chr RDEB01027716.1 (980 bp) chr RDEB01027717.1 (979 bp) chr RDEB01027718.1 (979 bp) chr RDEB01027719.1 (979 bp) chr RDEB01027720.1 (976 bp) chr RDEB01027721.1 (968 bp) chr RDEB01027722.1 (963 bp) chr RDEB01027723.1 (960 bp) chr RDEB01027724.1 (956 bp) chr RDEB01027725.1 (952 bp) chr RDEB01027726.1 (945 bp) chr RDEB01027727.1 (944 bp) chr RDEB01027728.1 (942 bp) chr RDEB01027729.1 (942 bp) chr RDEB01027730.1 (939 bp) chr RDEB01027731.1 (937 bp) chr RDEB01027732.1 (932 bp) chr RDEB01027733.1 (931 bp) chr RDEB01027734.1 (925 bp) chr RDEB01027735.1 (920 bp) chr RDEB01027736.1 (918 bp) chr RDEB01027737.1 (917 bp) chr RDEB01027738.1 (915 bp) chr RDEB01027739.1 (911 bp) chr RDEB01027740.1 (910 bp) chr RDEB01027741.1 (901 bp) chr RDEB01027742.1 (897 bp) chr RDEB01027743.1 (891 bp) chr RDEB01027744.1 (890 bp) chr RDEB01027745.1 (890 bp) chr RDEB01027746.1 (888 bp) chr RDEB01027747.1 (883 bp) chr RDEB01027748.1 (879 bp) chr RDEB01027749.1 (875 bp) chr RDEB01027750.1 (874 bp) chr RDEB01027751.1 (869 bp) chr RDEB01027752.1 (866 bp) chr RDEB01027753.1 (866 bp) chr RDEB01027754.1 (864 bp) chr RDEB01027755.1 (863 bp) chr RDEB01027756.1 (852 bp) chr RDEB01027757.1 (852 bp) chr RDEB01027758.1 (850 bp) chr RDEB01027759.1 (848 bp) chr RDEB01027760.1 (846 bp) chr RDEB01027761.1 (841 bp) chr RDEB01027762.1 (840 bp) chr RDEB01027763.1 (827 bp) chr RDEB01027764.1 (827 bp) chr RDEB01027765.1 (825 bp) chr RDEB01027766.1 (821 bp) chr RDEB01027767.1 (817 bp) chr RDEB01027768.1 (816 bp) chr RDEB01027769.1 (813 bp) chr RDEB01027770.1 (811 bp) chr RDEB01027771.1 (809 bp) chr RDEB01027772.1 (808 bp) chr RDEB01027773.1 (806 bp) chr RDEB01027774.1 (806 bp) chr RDEB01027775.1 (798 bp) chr RDEB01027776.1 (796 bp) chr RDEB01027777.1 (795 bp) chr RDEB01027778.1 (795 bp) chr RDEB01027779.1 (791 bp) chr RDEB01027780.1 (790 bp) chr RDEB01027781.1 (774 bp) chr RDEB01027782.1 (773 bp) chr RDEB01027783.1 (773 bp) chr RDEB01027784.1 (771 bp) chr RDEB01027785.1 (764 bp) chr RDEB01027786.1 (757 bp) chr RDEB01027787.1 (756 bp) chr RDEB01027788.1 (750 bp) chr RDEB01027789.1 (749 bp) chr RDEB01027790.1 (749 bp) chr RDEB01027791.1 (743 bp) chr RDEB01027792.1 (741 bp) chr RDEB01027793.1 (738 bp) chr RDEB01027794.1 (730 bp) chr RDEB01027795.1 (729 bp) chr RDEB01027796.1 (726 bp) chr RDEB01027797.1 (725 bp) chr RDEB01027798.1 (724 bp) chr RDEB01027799.1 (724 bp) chr RDEB01027800.1 (721 bp) chr RDEB01027801.1 (713 bp) chr RDEB01027802.1 (711 bp) chr RDEB01027803.1 (710 bp) chr RDEB01027804.1 (708 bp) chr RDEB01027805.1 (708 bp) chr RDEB01027806.1 (706 bp) chr RDEB01027807.1 (703 bp) chr RDEB01027808.1 (700 bp) chr RDEB01027809.1 (696 bp) chr RDEB01027810.1 (693 bp) chr RDEB01027811.1 (692 bp) chr RDEB01027812.1 (690 bp) chr RDEB01027813.1 (687 bp) chr RDEB01027814.1 (684 bp) chr RDEB01027815.1 (683 bp) chr RDEB01027816.1 (683 bp) chr RDEB01027817.1 (683 bp) chr RDEB01027818.1 (677 bp) chr RDEB01027819.1 (676 bp) chr RDEB01027820.1 (669 bp) chr RDEB01027821.1 (655 bp) chr RDEB01027822.1 (648 bp) chr RDEB01027823.1 (647 bp) chr RDEB01027824.1 (644 bp) chr RDEB01027825.1 (642 bp) chr RDEB01027826.1 (635 bp) chr RDEB01027827.1 (632 bp) chr RDEB01027828.1 (630 bp) chr RDEB01027829.1 (628 bp) chr RDEB01027830.1 (627 bp) chr RDEB01027831.1 (626 bp) chr RDEB01027832.1 (625 bp) chr RDEB01027833.1 (622 bp) chr RDEB01027834.1 (618 bp) chr RDEB01027835.1 (611 bp) chr RDEB01027836.1 (605 bp) chr RDEB01027837.1 (603 bp) chr RDEB01027838.1 (602 bp) chr RDEB01027839.1 (602 bp) chr RDEB01027840.1 (595 bp) chr RDEB01027841.1 (587 bp) chr RDEB01027842.1 (573 bp) chr RDEB01027843.1 (580 bp) chr RDEB01027844.1 (580 bp) chr RDEB01027845.1 (579 bp) chr RDEB01027846.1 (578 bp) chr RDEB01027847.1 (577 bp) chr RDEB01027848.1 (569 bp) chr RDEB01027849.1 (563 bp) chr RDEB01027850.1 (562 bp) chr RDEB01027851.1 (561 bp) chr RDEB01027852.1 (551 bp) chr RDEB01027853.1 (546 bp) chr RDEB01027854.1 (543 bp) chr RDEB01027855.1 (536 bp) chr RDEB01027856.1 (536 bp) chr RDEB01027857.1 (531 bp) chr RDEB01027858.1 (529 bp) chr RDEB01027859.1 (527 bp) chr RDEB01027860.1 (517 bp) chr RDEB01027861.1 (517 bp) chr RDEB01027862.1 (513 bp) chr RDEB01027863.1 (509 bp) chr RDEB01027864.1 (508 bp) chr RDEB01027865.1 (507 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth6_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth6_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth6_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth6_R1_001.fastq.gz to Meth6_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth6_R1_001.fastq.gz to Meth6_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth6_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth6_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth6_R2_001.fastq.gz to Meth6_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth6_R2_001.fastq.gz to Meth6_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth6_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth6_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth6_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth6_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth6_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth6_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth6_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21992:1000_1:N:0:GCTTGTCA+NAACATAC/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNGGTTGAAGTTTATTTGGATTTATGTTATTTGTTGGTGGTGTTAAAGAGGTTGAAAATGGTTGTTAAAGGGTTTTTTTAATTTAAGAAAAAGTGGTTTTTTGGTGTTGGTTGTATGAGGATTGGATTTAAGATGTTGATGTTTTGAGAT F#FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:F:FFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21992:1000_2:N:0:GCTTGTCA+NAACATAC/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAAAACATCAACATCTTAAATCCAATCCTCATACAACCAACACCAAAAAACCACTTTTTCTTAAATTAAAAAAACCCTTTAACAACCATTTTCAACCTCTTTAACACCACCAACAAATAACATAAATCCAAATAAACTTCAACCCAAAAT FFF,FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth6_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth6_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21992:1000_1:N:0:GCTTGTCA+NAACATAC/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNAATTAAAATTTATTTAAATTTATATTATTTATTAATAATATTAAAAAAATTAAAAATAATTATTAAAAAATTTTTTTAATTTAAAAAAAAATAATTTTTTAATATTAATTATATAAAAATTAAATTTAAAATATTAATATTTCAAAAT F#FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:F:FFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21992:1000_2:N:0:GCTTGTCA+NAACATAC/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGAAATATTAATATTTTAAATTTAATTTTTATATAATTAATATTAAAAAATTATTTTTTTTTAAATTAAAAAAATTTTTTAATAATTATTTTTAATTTTTTTAATATTATTAATAAATAATATAAATTTAAATAAATTTTAATTTAAGAT FFF,FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth6_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth6_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21992:1000_1:N:0:GCTTGTCA+NAACATAC/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNAATTAAAATTTATTTAAATTTATATTATTTATTAATAATATTAAAAAAATTAAAAATAATTATTAAAAAATTTTTTTAATTTAAAAAAAAATAATTTTTTAATATTAATTATATAAAAATTAAATTTAAAATATTAATATTTCAAAAT F#FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:F:FFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21992:1000_2:N:0:GCTTGTCA+NAACATAC/2 141 * 0 0 * * 0 0 TGAAATATTAATATTTTAAATTTAATTTTTATATAATTAATATTAAAAAATTATTTTTTTTTAAATTAAAAAAATTTTTTAATAATTATTTTTAATTTTTTTAATATTATTAATAAATAATATAAATTTAAATAAATTTTAATTTAAGAT FFF,FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth6_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth6_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21992:1000_1:N:0:GCTTGTCA+NAACATAC/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNGGTTGAAGTTTATTTGGATTTATGTTATTTGTTGGTGGTGTTAAAGAGGTTGAAAATGGTTGTTAAAGGGTTTTTTTAATTTAAGAAAAAGTGGTTTTTTGGTGTTGGTTGTATGAGGATTGGATTTAAGATGTTGATGTTTTGAGAT F#FFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:F:FFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21992:1000_2:N:0:GCTTGTCA+NAACATAC/2 141 * 0 0 * * 0 0 CAAAACATCAACATCTTAAATCCAATCCTCATACAACCAACACCAAAAAACCACTTTTTCTTAAATTAAAAAAACCCTTTAACAACCATTTTCAACCTCTTTAACACCACCAACAAATAACATAAATCCAAATAAACTTCAACCCAAAAT FFF,FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFF:FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFF YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth6_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth6_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth6_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9986 (99.86%) aligned concordantly 0 times 3 (0.03%) aligned concordantly exactly 1 time 11 (0.11%) aligned concordantly >1 times 0.14% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9985 (99.85%) aligned concordantly 0 times 3 (0.03%) aligned concordantly exactly 1 time 12 (0.12%) aligned concordantly >1 times 0.15% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9985 (99.85%) aligned concordantly 0 times 4 (0.04%) aligned concordantly exactly 1 time 11 (0.11%) aligned concordantly >1 times 0.15% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9985 (99.85%) aligned concordantly 0 times 4 (0.04%) aligned concordantly exactly 1 time 11 (0.11%) aligned concordantly >1 times 0.15% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth6_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth6_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth6_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth6_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 15 Mapping efficiency: 0.1% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9968 Sequence pairs did not map uniquely: 17 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 4 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 5 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 3 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 3 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 1034 Total methylated C's in CpG context: 16 Total methylated C's in CHG context: 1 Total methylated C's in CHH context: 3 Total methylated C's in Unknown context: 0 Total unmethylated C's in CpG context: 190 Total unmethylated C's in CHG context: 190 Total unmethylated C's in CHH context: 634 Total unmethylated C's in Unknown context: 0 C methylated in CpG context: 7.8% C methylated in CHG context: 0.5% C methylated in CHH context: 0.5% Can't determine percentage of methylated Cs in unknown context (CN or CHN) if value was 0 Bismark completed in 0d 0h 0m 26s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth7_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth7_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-NCBI/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ chr RDEB01000001.1 (2051086 bp) chr RDEB01000002.1 (1931859 bp) chr RDEB01000003.1 (1909126 bp) chr RDEB01000004.1 (1580737 bp) chr RDEB01000005.1 (1562395 bp) chr RDEB01000006.1 (1561676 bp) chr RDEB01000007.1 (1468524 bp) chr RDEB01000008.1 (1449017 bp) chr RDEB01000009.1 (1288384 bp) chr RDEB01000010.1 (1267912 bp) chr RDEB01000011.1 (1226981 bp) chr RDEB01000012.1 (1203453 bp) chr RDEB01000013.1 (1196056 bp) chr RDEB01000014.1 (1161273 bp) chr RDEB01000015.1 (1155058 bp) chr RDEB01000016.1 (1154061 bp) chr RDEB01000017.1 (1126579 bp) chr RDEB01000018.1 (1112599 bp) chr RDEB01000019.1 (1105743 bp) chr RDEB01000020.1 (1047533 bp) chr RDEB01000021.1 (1042078 bp) chr RDEB01000022.1 (1027815 bp) chr RDEB01000023.1 (1026134 bp) chr RDEB01000024.1 (1017152 bp) chr RDEB01000025.1 (1013905 bp) chr RDEB01000026.1 (1011462 bp) chr RDEB01000027.1 (997532 bp) chr RDEB01000028.1 (977069 bp) chr RDEB01000029.1 (970043 bp) chr RDEB01000030.1 (959368 bp) chr RDEB01000031.1 (946529 bp) chr RDEB01000032.1 (941419 bp) chr RDEB01000033.1 (938138 bp) chr RDEB01000034.1 (914659 bp) chr RDEB01000035.1 (910955 bp) chr RDEB01000036.1 (910339 bp) chr RDEB01000037.1 (907300 bp) chr RDEB01000038.1 (906231 bp) chr RDEB01000039.1 (898108 bp) chr RDEB01000040.1 (891924 bp) chr RDEB01000041.1 (881484 bp) chr RDEB01000042.1 (873709 bp) chr RDEB01000043.1 (872072 bp) chr RDEB01000044.1 (860338 bp) chr RDEB01000045.1 (852749 bp) chr RDEB01000046.1 (845408 bp) chr RDEB01000047.1 (844817 bp) chr RDEB01000048.1 (841333 bp) chr RDEB01000049.1 (838287 bp) chr RDEB01000050.1 (837738 bp) chr RDEB01000051.1 (831214 bp) chr RDEB01000052.1 (821654 bp) chr RDEB01000053.1 (807789 bp) chr RDEB01000054.1 (804604 bp) chr RDEB01000055.1 (801587 bp) chr RDEB01000056.1 (789434 bp) chr RDEB01000057.1 (791485 bp) chr RDEB01000058.1 (791387 bp) chr RDEB01000059.1 (787461 bp) chr RDEB01000060.1 (785475 bp) chr RDEB01000061.1 (776585 bp) chr RDEB01000062.1 (765173 bp) chr RDEB01000063.1 (762781 bp) chr RDEB01000064.1 (756547 bp) chr RDEB01000065.1 (750445 bp) chr RDEB01000066.1 (750425 bp) chr RDEB01000067.1 (748716 bp) chr RDEB01000068.1 (744853 bp) chr RDEB01000069.1 (743781 bp) chr RDEB01000070.1 (736536 bp) chr RDEB01000071.1 (735828 bp) chr RDEB01000072.1 (735810 bp) chr RDEB01000073.1 (734211 bp) chr RDEB01000074.1 (727944 bp) chr RDEB01000075.1 (714259 bp) chr RDEB01000076.1 (710645 bp) chr RDEB01000077.1 (709730 bp) chr RDEB01000078.1 (706098 bp) chr RDEB01000079.1 (702875 bp) chr RDEB01000080.1 (697409 bp) chr RDEB01000081.1 (697225 bp) chr RDEB01000082.1 (696462 bp) chr RDEB01000083.1 (691775 bp) chr RDEB01000084.1 (689230 bp) chr RDEB01000085.1 (689149 bp) chr RDEB01000086.1 (685932 bp) chr RDEB01000087.1 (683424 bp) chr RDEB01000088.1 (683185 bp) chr RDEB01000089.1 (682905 bp) chr RDEB01000090.1 (680182 bp) chr RDEB01000091.1 (670709 bp) chr RDEB01000092.1 (670410 bp) chr RDEB01000093.1 (668648 bp) chr RDEB01000094.1 (668448 bp) chr RDEB01000095.1 (664016 bp) chr RDEB01000096.1 (659099 bp) chr RDEB01000097.1 (657048 bp) chr RDEB01000098.1 (656749 bp) chr RDEB01000099.1 (652702 bp) chr RDEB01000100.1 (651628 bp) chr RDEB01000101.1 (651613 bp) chr RDEB01000102.1 (650710 bp) chr RDEB01000103.1 (647275 bp) chr RDEB01000104.1 (646764 bp) chr RDEB01000105.1 (646518 bp) chr RDEB01000106.1 (646260 bp) chr RDEB01000107.1 (644930 bp) chr RDEB01000108.1 (642161 bp) chr RDEB01000109.1 (640493 bp) chr RDEB01000110.1 (638532 bp) chr RDEB01000111.1 (637376 bp) chr RDEB01000112.1 (633474 bp) chr RDEB01000113.1 (628029 bp) chr RDEB01000114.1 (627396 bp) chr RDEB01000115.1 (627002 bp) chr RDEB01000116.1 (626913 bp) chr RDEB01000117.1 (625838 bp) chr RDEB01000118.1 (622393 bp) chr RDEB01000119.1 (621998 bp) chr RDEB01000120.1 (621618 bp) chr RDEB01000121.1 (611718 bp) chr RDEB01000122.1 (599855 bp) chr RDEB01000123.1 (592820 bp) chr RDEB01000124.1 (590584 bp) chr RDEB01000125.1 (589842 bp) chr RDEB01000126.1 (585859 bp) chr RDEB01000127.1 (580331 bp) chr RDEB01000128.1 (579729 bp) chr RDEB01000129.1 (579409 bp) chr RDEB01000130.1 (578342 bp) chr RDEB01000131.1 (577645 bp) chr 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RDEB01027780.1 (790 bp) chr RDEB01027781.1 (774 bp) chr RDEB01027782.1 (773 bp) chr RDEB01027783.1 (773 bp) chr RDEB01027784.1 (771 bp) chr RDEB01027785.1 (764 bp) chr RDEB01027786.1 (757 bp) chr RDEB01027787.1 (756 bp) chr RDEB01027788.1 (750 bp) chr RDEB01027789.1 (749 bp) chr RDEB01027790.1 (749 bp) chr RDEB01027791.1 (743 bp) chr RDEB01027792.1 (741 bp) chr RDEB01027793.1 (738 bp) chr RDEB01027794.1 (730 bp) chr RDEB01027795.1 (729 bp) chr RDEB01027796.1 (726 bp) chr RDEB01027797.1 (725 bp) chr RDEB01027798.1 (724 bp) chr RDEB01027799.1 (724 bp) chr RDEB01027800.1 (721 bp) chr RDEB01027801.1 (713 bp) chr RDEB01027802.1 (711 bp) chr RDEB01027803.1 (710 bp) chr RDEB01027804.1 (708 bp) chr RDEB01027805.1 (708 bp) chr RDEB01027806.1 (706 bp) chr RDEB01027807.1 (703 bp) chr RDEB01027808.1 (700 bp) chr RDEB01027809.1 (696 bp) chr RDEB01027810.1 (693 bp) chr RDEB01027811.1 (692 bp) chr RDEB01027812.1 (690 bp) chr RDEB01027813.1 (687 bp) chr RDEB01027814.1 (684 bp) chr RDEB01027815.1 (683 bp) chr RDEB01027816.1 (683 bp) chr RDEB01027817.1 (683 bp) chr RDEB01027818.1 (677 bp) chr RDEB01027819.1 (676 bp) chr RDEB01027820.1 (669 bp) chr RDEB01027821.1 (655 bp) chr RDEB01027822.1 (648 bp) chr RDEB01027823.1 (647 bp) chr RDEB01027824.1 (644 bp) chr RDEB01027825.1 (642 bp) chr RDEB01027826.1 (635 bp) chr RDEB01027827.1 (632 bp) chr RDEB01027828.1 (630 bp) chr RDEB01027829.1 (628 bp) chr RDEB01027830.1 (627 bp) chr RDEB01027831.1 (626 bp) chr RDEB01027832.1 (625 bp) chr RDEB01027833.1 (622 bp) chr RDEB01027834.1 (618 bp) chr RDEB01027835.1 (611 bp) chr RDEB01027836.1 (605 bp) chr RDEB01027837.1 (603 bp) chr RDEB01027838.1 (602 bp) chr RDEB01027839.1 (602 bp) chr RDEB01027840.1 (595 bp) chr RDEB01027841.1 (587 bp) chr RDEB01027842.1 (573 bp) chr RDEB01027843.1 (580 bp) chr RDEB01027844.1 (580 bp) chr RDEB01027845.1 (579 bp) chr RDEB01027846.1 (578 bp) chr RDEB01027847.1 (577 bp) chr RDEB01027848.1 (569 bp) chr RDEB01027849.1 (563 bp) chr RDEB01027850.1 (562 bp) chr RDEB01027851.1 (561 bp) chr RDEB01027852.1 (551 bp) chr RDEB01027853.1 (546 bp) chr RDEB01027854.1 (543 bp) chr RDEB01027855.1 (536 bp) chr RDEB01027856.1 (536 bp) chr RDEB01027857.1 (531 bp) chr RDEB01027858.1 (529 bp) chr RDEB01027859.1 (527 bp) chr RDEB01027860.1 (517 bp) chr RDEB01027861.1 (517 bp) chr RDEB01027862.1 (513 bp) chr RDEB01027863.1 (509 bp) chr RDEB01027864.1 (508 bp) chr RDEB01027865.1 (507 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth7_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth7_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth7_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth7_R1_001.fastq.gz to Meth7_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth7_R1_001.fastq.gz to Meth7_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth7_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth7_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth7_R2_001.fastq.gz to Meth7_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth7_R2_001.fastq.gz to Meth7_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth7_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth7_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth7_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth7_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth7_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth7_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth7_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:22209:1000_1:N:0:CAAGCTAG+NCATAGCG/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTTAATGTTTTATATAATAAATAATGTATTATATTTTATATTGAAATTTAAATTAAATATGAAAAAAAATATTTTGTTATATATATATATTTTTTGATAATTAAATATAATAATTAAAATTTTTTTAGATTGGAAGAGTATATGTTTG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:22209:1000_2:N:0:CAAGCTAG+NCATAGCG/2 141 * 0 0 * * 0 0 AAAAAAATTTTAATTATTATATTTAATTATCAAAAAATATATATATATAACAAAATATTTTTTTTCATATTTAATTTAAATTTCAATATAAAATATAATACATTATTTATTATATAAAACATTAAAAAAAATCAAAAAAACATCATCTAA FFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFF:,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFF,FFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth7_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth7_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:22209:1000_1:N:0:CAAGCTAG+NCATAGCG/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNCCCAACACCTTACACAATAAACAACACACTACATTCTACATCAAAACTTAAATCAAATACAAAAAAAAACATCTCACCATATATACATACCCTCCAATAATCAAACATAACAATTAAAACTCCCCTAAATCAAAAAAACACACATCTA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:22209:1000_2:N:0:CAAGCTAG+NCATAGCG/2 141 * 0 0 * * 0 0 AGGGGAGTTTTAATTGTTATGTTTGATTATTGGAGGGTATGTATATATGGTGAGATGTTTTTTTTTGTATTTGATTTAAGTTTTGATGTAGAATGTAGTGTGTTGTTTATTGTGTAAGGTGTTGGGGGAGATTGGAAGAGTGTTGTTTAG FFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFF:,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFF,FFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth7_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth7_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:22209:1000_1:N:0:CAAGCTAG+NCATAGCG/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNCCCAACACCTTACACAATAAACAACACACTACATTCTACATCAAAACTTAAATCAAATACAAAAAAAAACATCTCACCATATATACATACCCTCCAATAATCAAACATAACAATTAAAACTCCCCTAAATCAAAAAAACACACATCTA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:22209:1000_2:N:0:CAAGCTAG+NCATAGCG/2 141 * 0 0 * * 0 0 AGGGGAGTTTTAATTGTTATGTTTGATTATTGGAGGGTATGTATATATGGTGAGATGTTTTTTTTTGTATTTGATTTAAGTTTTGATGTAGAATGTAGTGTGTTGTTTATTGTGTAAGGTGTTGGGGGAGATTGGAAGAGTGTTGTTTAG FFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFF:,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFF,FFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth7_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth7_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:22209:1000_1:N:0:CAAGCTAG+NCATAGCG/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTTTAATGTTTTATATAATAAATAATGTATTATATTTTATATTGAAATTTAAATTAAATATGAAAAAAAATATTTTGTTATATATATATATTTTTTGATAATTAAATATAATAATTAAAATTTTTTTAGATTGGAAGAGTATATGTTTG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:22209:1000_2:N:0:CAAGCTAG+NCATAGCG/2 141 * 0 0 * * 0 0 AAAAAAATTTTAATTATTATATTTAATTATCAAAAAATATATATATATAACAAAATATTTTTTTTCATATTTAATTTAAATTTCAATATAAAATATAATACATTATTTATTATATAAAACATTAAAAAAAATCAAAAAAACATCATCTAA FFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFF:,FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFF,FFF YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth7_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth7_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth7_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9994 (99.94%) aligned concordantly 0 times 4 (0.04%) aligned concordantly exactly 1 time 2 (0.02%) aligned concordantly >1 times 0.06% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9984 (99.84%) aligned concordantly 0 times 10 (0.10%) aligned concordantly exactly 1 time 6 (0.06%) aligned concordantly >1 times 0.16% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9994 (99.94%) aligned concordantly 0 times 4 (0.04%) aligned concordantly exactly 1 time 2 (0.02%) aligned concordantly >1 times 0.06% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9986 (99.86%) aligned concordantly 0 times 4 (0.04%) aligned concordantly exactly 1 time 10 (0.10%) aligned concordantly >1 times 0.14% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth7_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth7_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth7_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth7_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 15 Mapping efficiency: 0.1% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9974 Sequence pairs did not map uniquely: 11 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 2 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 3 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 2 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 8 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 955 Total methylated C's in CpG context: 76 Total methylated C's in CHG context: 3 Total methylated C's in CHH context: 12 Total methylated C's in Unknown context: 0 Total unmethylated C's in CpG context: 55 Total unmethylated C's in CHG context: 171 Total unmethylated C's in CHH context: 638 Total unmethylated C's in Unknown context: 1 C methylated in CpG context: 58.0% C methylated in CHG context: 1.7% C methylated in CHH context: 1.8% C methylated in unknown context (CN or CHN): 0.0% Bismark completed in 0d 0h 0m 26s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth8_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth8_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-NCBI/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ chr RDEB01000001.1 (2051086 bp) chr RDEB01000002.1 (1931859 bp) chr RDEB01000003.1 (1909126 bp) chr RDEB01000004.1 (1580737 bp) chr RDEB01000005.1 (1562395 bp) chr RDEB01000006.1 (1561676 bp) chr RDEB01000007.1 (1468524 bp) chr RDEB01000008.1 (1449017 bp) chr RDEB01000009.1 (1288384 bp) chr RDEB01000010.1 (1267912 bp) chr RDEB01000011.1 (1226981 bp) chr RDEB01000012.1 (1203453 bp) chr RDEB01000013.1 (1196056 bp) chr RDEB01000014.1 (1161273 bp) chr RDEB01000015.1 (1155058 bp) chr RDEB01000016.1 (1154061 bp) chr RDEB01000017.1 (1126579 bp) chr RDEB01000018.1 (1112599 bp) chr RDEB01000019.1 (1105743 bp) chr RDEB01000020.1 (1047533 bp) chr RDEB01000021.1 (1042078 bp) chr RDEB01000022.1 (1027815 bp) chr RDEB01000023.1 (1026134 bp) chr RDEB01000024.1 (1017152 bp) chr RDEB01000025.1 (1013905 bp) chr RDEB01000026.1 (1011462 bp) chr RDEB01000027.1 (997532 bp) chr RDEB01000028.1 (977069 bp) chr RDEB01000029.1 (970043 bp) chr RDEB01000030.1 (959368 bp) chr RDEB01000031.1 (946529 bp) chr RDEB01000032.1 (941419 bp) chr RDEB01000033.1 (938138 bp) chr RDEB01000034.1 (914659 bp) chr RDEB01000035.1 (910955 bp) chr 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(1104 bp) chr RDEB01027675.1 (1096 bp) chr RDEB01027676.1 (1093 bp) chr RDEB01027677.1 (1092 bp) chr RDEB01027678.1 (1084 bp) chr RDEB01027679.1 (1084 bp) chr RDEB01027680.1 (1079 bp) chr RDEB01027681.1 (1078 bp) chr RDEB01027682.1 (1076 bp) chr RDEB01027683.1 (1076 bp) chr RDEB01027684.1 (1072 bp) chr RDEB01027685.1 (1071 bp) chr RDEB01027686.1 (1064 bp) chr RDEB01027687.1 (1063 bp) chr RDEB01027688.1 (1060 bp) chr RDEB01027689.1 (1055 bp) chr RDEB01027690.1 (1046 bp) chr RDEB01027691.1 (1042 bp) chr RDEB01027692.1 (1042 bp) chr RDEB01027693.1 (1041 bp) chr RDEB01027694.1 (1041 bp) chr RDEB01027695.1 (1040 bp) chr RDEB01027696.1 (1038 bp) chr RDEB01027697.1 (1029 bp) chr RDEB01027698.1 (1028 bp) chr RDEB01027699.1 (1026 bp) chr RDEB01027700.1 (1024 bp) chr RDEB01027701.1 (1019 bp) chr RDEB01027702.1 (1019 bp) chr RDEB01027703.1 (1012 bp) chr RDEB01027704.1 (1010 bp) chr RDEB01027705.1 (1009 bp) chr RDEB01027706.1 (1008 bp) chr RDEB01027707.1 (1004 bp) chr RDEB01027708.1 (1002 bp) chr RDEB01027709.1 (1001 bp) chr RDEB01027710.1 (998 bp) chr RDEB01027711.1 (996 bp) chr RDEB01027712.1 (991 bp) chr RDEB01027713.1 (989 bp) chr RDEB01027714.1 (986 bp) chr RDEB01027715.1 (981 bp) chr RDEB01027716.1 (980 bp) chr RDEB01027717.1 (979 bp) chr RDEB01027718.1 (979 bp) chr RDEB01027719.1 (979 bp) chr RDEB01027720.1 (976 bp) chr RDEB01027721.1 (968 bp) chr RDEB01027722.1 (963 bp) chr RDEB01027723.1 (960 bp) chr RDEB01027724.1 (956 bp) chr RDEB01027725.1 (952 bp) chr RDEB01027726.1 (945 bp) chr RDEB01027727.1 (944 bp) chr RDEB01027728.1 (942 bp) chr RDEB01027729.1 (942 bp) chr RDEB01027730.1 (939 bp) chr RDEB01027731.1 (937 bp) chr RDEB01027732.1 (932 bp) chr RDEB01027733.1 (931 bp) chr RDEB01027734.1 (925 bp) chr RDEB01027735.1 (920 bp) chr RDEB01027736.1 (918 bp) chr RDEB01027737.1 (917 bp) chr RDEB01027738.1 (915 bp) chr RDEB01027739.1 (911 bp) chr RDEB01027740.1 (910 bp) chr RDEB01027741.1 (901 bp) chr RDEB01027742.1 (897 bp) chr RDEB01027743.1 (891 bp) chr RDEB01027744.1 (890 bp) chr RDEB01027745.1 (890 bp) chr RDEB01027746.1 (888 bp) chr RDEB01027747.1 (883 bp) chr RDEB01027748.1 (879 bp) chr RDEB01027749.1 (875 bp) chr RDEB01027750.1 (874 bp) chr RDEB01027751.1 (869 bp) chr RDEB01027752.1 (866 bp) chr RDEB01027753.1 (866 bp) chr RDEB01027754.1 (864 bp) chr RDEB01027755.1 (863 bp) chr RDEB01027756.1 (852 bp) chr RDEB01027757.1 (852 bp) chr RDEB01027758.1 (850 bp) chr RDEB01027759.1 (848 bp) chr RDEB01027760.1 (846 bp) chr RDEB01027761.1 (841 bp) chr RDEB01027762.1 (840 bp) chr RDEB01027763.1 (827 bp) chr RDEB01027764.1 (827 bp) chr RDEB01027765.1 (825 bp) chr RDEB01027766.1 (821 bp) chr RDEB01027767.1 (817 bp) chr RDEB01027768.1 (816 bp) chr RDEB01027769.1 (813 bp) chr RDEB01027770.1 (811 bp) chr RDEB01027771.1 (809 bp) chr RDEB01027772.1 (808 bp) chr RDEB01027773.1 (806 bp) chr RDEB01027774.1 (806 bp) chr RDEB01027775.1 (798 bp) chr RDEB01027776.1 (796 bp) chr RDEB01027777.1 (795 bp) chr RDEB01027778.1 (795 bp) chr RDEB01027779.1 (791 bp) chr RDEB01027780.1 (790 bp) chr RDEB01027781.1 (774 bp) chr RDEB01027782.1 (773 bp) chr RDEB01027783.1 (773 bp) chr RDEB01027784.1 (771 bp) chr RDEB01027785.1 (764 bp) chr RDEB01027786.1 (757 bp) chr RDEB01027787.1 (756 bp) chr RDEB01027788.1 (750 bp) chr RDEB01027789.1 (749 bp) chr RDEB01027790.1 (749 bp) chr RDEB01027791.1 (743 bp) chr RDEB01027792.1 (741 bp) chr RDEB01027793.1 (738 bp) chr RDEB01027794.1 (730 bp) chr RDEB01027795.1 (729 bp) chr RDEB01027796.1 (726 bp) chr RDEB01027797.1 (725 bp) chr RDEB01027798.1 (724 bp) chr RDEB01027799.1 (724 bp) chr RDEB01027800.1 (721 bp) chr RDEB01027801.1 (713 bp) chr RDEB01027802.1 (711 bp) chr RDEB01027803.1 (710 bp) chr RDEB01027804.1 (708 bp) chr RDEB01027805.1 (708 bp) chr RDEB01027806.1 (706 bp) chr RDEB01027807.1 (703 bp) chr RDEB01027808.1 (700 bp) chr RDEB01027809.1 (696 bp) chr RDEB01027810.1 (693 bp) chr RDEB01027811.1 (692 bp) chr RDEB01027812.1 (690 bp) chr RDEB01027813.1 (687 bp) chr RDEB01027814.1 (684 bp) chr RDEB01027815.1 (683 bp) chr RDEB01027816.1 (683 bp) chr RDEB01027817.1 (683 bp) chr RDEB01027818.1 (677 bp) chr RDEB01027819.1 (676 bp) chr RDEB01027820.1 (669 bp) chr RDEB01027821.1 (655 bp) chr RDEB01027822.1 (648 bp) chr RDEB01027823.1 (647 bp) chr RDEB01027824.1 (644 bp) chr RDEB01027825.1 (642 bp) chr RDEB01027826.1 (635 bp) chr RDEB01027827.1 (632 bp) chr RDEB01027828.1 (630 bp) chr RDEB01027829.1 (628 bp) chr RDEB01027830.1 (627 bp) chr RDEB01027831.1 (626 bp) chr RDEB01027832.1 (625 bp) chr RDEB01027833.1 (622 bp) chr RDEB01027834.1 (618 bp) chr RDEB01027835.1 (611 bp) chr RDEB01027836.1 (605 bp) chr RDEB01027837.1 (603 bp) chr RDEB01027838.1 (602 bp) chr RDEB01027839.1 (602 bp) chr RDEB01027840.1 (595 bp) chr RDEB01027841.1 (587 bp) chr RDEB01027842.1 (573 bp) chr RDEB01027843.1 (580 bp) chr RDEB01027844.1 (580 bp) chr RDEB01027845.1 (579 bp) chr RDEB01027846.1 (578 bp) chr RDEB01027847.1 (577 bp) chr RDEB01027848.1 (569 bp) chr RDEB01027849.1 (563 bp) chr RDEB01027850.1 (562 bp) chr RDEB01027851.1 (561 bp) chr RDEB01027852.1 (551 bp) chr RDEB01027853.1 (546 bp) chr RDEB01027854.1 (543 bp) chr RDEB01027855.1 (536 bp) chr RDEB01027856.1 (536 bp) chr RDEB01027857.1 (531 bp) chr RDEB01027858.1 (529 bp) chr RDEB01027859.1 (527 bp) chr RDEB01027860.1 (517 bp) chr RDEB01027861.1 (517 bp) chr RDEB01027862.1 (513 bp) chr RDEB01027863.1 (509 bp) chr RDEB01027864.1 (508 bp) chr RDEB01027865.1 (507 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth8_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth8_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth8_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth8_R1_001.fastq.gz to Meth8_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth8_R1_001.fastq.gz to Meth8_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth8_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth8_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth8_R2_001.fastq.gz to Meth8_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth8_R2_001.fastq.gz to Meth8_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth8_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth8_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth8_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth8_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth8_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth8_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth8_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23674:1000_1:N:0:TGGATCGA+NTGCGATA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTAATTTATTTATTTTTTTTTATAAAAATTTTTTAAATAAAAAAATTGATGATATTAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTGGATTGAATTTTGTATTTTTGAATTTGTATGAAAAAAGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:,:,,:,,,,,,,,,,,,:FFF,,,,F:FFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23674:1000_2:N:0:TGGATCGA+NTGCGATA/2 141 * 0 0 * * 0 0 AATATCATCAATTTTTTTATTTAAAAAATTTTTATAAAAAAAAATAAATAAATTAAAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATTATCACACATATTAATAACAAAAAAAACCAAATCAATTAAAAACAAAAAAAAAAAAAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF::FFFFF:FFF::FFFF:FF,,,,,,,,,F,F:F,F,,,,,,,,,,,:F:,:,,,F:FFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth8_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth8_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23674:1000_1:N:0:TGGATCGA+NTGCGATA/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNCAATCTATCTATCTCTCTCTACAAAAACCCCCCAAATAAAAAAATCAACAACACCAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACTAAATCAAATCTCATATTCCCAAATCTACATAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:,:,,:,,,,,,,,,,,,:FFF,,,,F:FFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23674:1000_2:N:0:TGGATCGA+NTGCGATA/2 141 * 0 0 * * 0 0 GGTGTTGTTGATTTTTTTATTTGGGGGGTTTTTGTAGAGAGAGATAGATAGATTGAGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTATTGTATGTGTTGATGGTGGGGGGGGTTGGATTAATTAAAAATGGGGGGGGGGGGGGGG FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF::FFFFF:FFF::FFFF:FF,,,,,,,,,F,F:F,F,,,,,,,,,,,:F:,:,,,F:FFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth8_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth8_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23674:1000_1:N:0:TGGATCGA+NTGCGATA/1 77 * 0 0 * * 0 0 CNCAATCTATCTATCTCTCTCTACAAAAACCCCCCAAATAAAAAAATCAACAACACCAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTCCAATCACTAAATCAAATCTCATATTCCCAAATCTACATAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:,:,,:,,,,,,,,,,,,:FFF,,,,F:FFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23674:1000_2:N:0:TGGATCGA+NTGCGATA/2 141 * 0 0 * * 0 0 GGTGTTGTTGATTTTTTTATTTGGGGGGTTTTTGTAGAGAGAGATAGATAGATTGAGAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAAGAGTGTTATTGTATGTGTTGATGGTGGGGGGGGTTGGATTAATTAAAAATGGGGGGGGGGGGGGGG FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF::FFFFF:FFF::FFFF:FF,,,,,,,,,F,F:F,F,,,,,,,,,,,:F:,:,,,F:FFFFFFFFFFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth8_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth8_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:23674:1000_1:N:0:TGGATCGA+NTGCGATA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTAATTTATTTATTTTTTTTTATAAAAATTTTTTAAATAAAAAAATTGATGATATTAGATTGGAAGAGTATATGTTTGAATTTTAGTTATTGGATTGAATTTTGTATTTTTGAATTTGTATGAAAAAAGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFF:,:,,:,,,,,,,,,,,,:FFF,,,,F:FFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:23674:1000_2:N:0:TGGATCGA+NTGCGATA/2 141 * 0 0 * * 0 0 AATATCATCAATTTTTTTATTTAAAAAATTTTTATAAAAAAAAATAAATAAATTAAAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAAAAATATTATCACACATATTAATAACAAAAAAAACCAAATCAATTAAAAACAAAAAAAAAAAAAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFF:FFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFF::FFFFF:FFF::FFFF:FF,,,,,,,,,F,F:F,F,,,,,,,,,,,:F:,:,,,F:FFFFFFFFFFFF YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth8_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth8_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth8_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9993 (99.93%) aligned concordantly 0 times 2 (0.02%) aligned concordantly exactly 1 time 5 (0.05%) aligned concordantly >1 times 0.07% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9993 (99.93%) aligned concordantly 0 times 3 (0.03%) aligned concordantly exactly 1 time 4 (0.04%) aligned concordantly >1 times 0.07% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9995 (99.95%) aligned concordantly 0 times 2 (0.02%) aligned concordantly exactly 1 time 3 (0.03%) aligned concordantly >1 times 0.05% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9996 (99.96%) aligned concordantly 0 times 1 (0.01%) aligned concordantly exactly 1 time 3 (0.03%) aligned concordantly >1 times 0.04% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth8_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth8_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth8_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth8_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 9 Mapping efficiency: 0.1% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9985 Sequence pairs did not map uniquely: 6 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 1 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 3 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 2 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 3 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 633 Total methylated C's in CpG context: 84 Total methylated C's in CHG context: 0 Total methylated C's in CHH context: 6 Total methylated C's in Unknown context: 0 Total unmethylated C's in CpG context: 29 Total unmethylated C's in CHG context: 123 Total unmethylated C's in CHH context: 391 Total unmethylated C's in Unknown context: 0 C methylated in CpG context: 74.3% C methylated in CHG context: 0.0% C methylated in CHH context: 1.5% Can't determine percentage of methylated Cs in unknown context (CN or CHN) if value was 0 Bismark completed in 0d 0h 0m 26s ==================== Bismark run complete ==================== Use of uninitialized value $path_to_bowtie in concatenation (.) or string at /gscratch/srlab/programs/Bismark-0.21.0/bismark line 6893. Bowtie 2 seems to be working fine (tested command 'bowtie2 --version' [2.1.0]) Output format is BAM (default) Alignments will be written out in BAM format. Samtools found here: '/gscratch/srlab/programs/samtools-1.4/bin/samtools' Reference genome folder provided is /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ (absolute path is '/gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/)' FastQ format assumed (by default) Processing sequences up to read no. 10000 from the input file Each Bowtie 2 instance is going to be run with 4 threads. Please monitor performance closely and tune down if necessary! Input files to be analysed (in current folder '/gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01'): /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth9_R1_001.fastq.gz /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth9_R2_001.fastq.gz Library was specified to be not strand-specific (non-directional), therefore alignments to all four possible bisulfite strands (OT, CTOT, OB and CTOB) will be reported Output will be written into the directory: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01/Mcap_test06-NCBI/ Setting parallelization to single-threaded (default) Summary of all aligner options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Current working directory is: /gscratch/scrubbed/sr320/030520-fr01 Now reading in and storing sequence information of the genome specified in: /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ chr RDEB01000001.1 (2051086 bp) chr RDEB01000002.1 (1931859 bp) chr RDEB01000003.1 (1909126 bp) chr RDEB01000004.1 (1580737 bp) chr RDEB01000005.1 (1562395 bp) chr RDEB01000006.1 (1561676 bp) chr RDEB01000007.1 (1468524 bp) chr RDEB01000008.1 (1449017 bp) chr RDEB01000009.1 (1288384 bp) chr RDEB01000010.1 (1267912 bp) chr RDEB01000011.1 (1226981 bp) chr RDEB01000012.1 (1203453 bp) chr RDEB01000013.1 (1196056 bp) chr RDEB01000014.1 (1161273 bp) chr RDEB01000015.1 (1155058 bp) chr RDEB01000016.1 (1154061 bp) chr RDEB01000017.1 (1126579 bp) chr RDEB01000018.1 (1112599 bp) chr RDEB01000019.1 (1105743 bp) chr RDEB01000020.1 (1047533 bp) chr RDEB01000021.1 (1042078 bp) chr RDEB01000022.1 (1027815 bp) chr RDEB01000023.1 (1026134 bp) chr RDEB01000024.1 (1017152 bp) chr RDEB01000025.1 (1013905 bp) chr RDEB01000026.1 (1011462 bp) chr RDEB01000027.1 (997532 bp) chr RDEB01000028.1 (977069 bp) chr RDEB01000029.1 (970043 bp) chr RDEB01000030.1 (959368 bp) chr RDEB01000031.1 (946529 bp) chr RDEB01000032.1 (941419 bp) chr RDEB01000033.1 (938138 bp) chr RDEB01000034.1 (914659 bp) chr RDEB01000035.1 (910955 bp) chr RDEB01000036.1 (910339 bp) chr RDEB01000037.1 (907300 bp) chr RDEB01000038.1 (906231 bp) chr RDEB01000039.1 (898108 bp) chr RDEB01000040.1 (891924 bp) chr RDEB01000041.1 (881484 bp) chr RDEB01000042.1 (873709 bp) chr RDEB01000043.1 (872072 bp) chr RDEB01000044.1 (860338 bp) chr RDEB01000045.1 (852749 bp) chr RDEB01000046.1 (845408 bp) chr RDEB01000047.1 (844817 bp) chr RDEB01000048.1 (841333 bp) chr RDEB01000049.1 (838287 bp) chr RDEB01000050.1 (837738 bp) chr RDEB01000051.1 (831214 bp) chr RDEB01000052.1 (821654 bp) chr RDEB01000053.1 (807789 bp) chr RDEB01000054.1 (804604 bp) chr RDEB01000055.1 (801587 bp) chr RDEB01000056.1 (789434 bp) chr RDEB01000057.1 (791485 bp) chr RDEB01000058.1 (791387 bp) chr RDEB01000059.1 (787461 bp) chr RDEB01000060.1 (785475 bp) chr RDEB01000061.1 (776585 bp) chr RDEB01000062.1 (765173 bp) chr RDEB01000063.1 (762781 bp) chr RDEB01000064.1 (756547 bp) chr RDEB01000065.1 (750445 bp) chr RDEB01000066.1 (750425 bp) chr RDEB01000067.1 (748716 bp) chr RDEB01000068.1 (744853 bp) chr RDEB01000069.1 (743781 bp) chr RDEB01000070.1 (736536 bp) chr RDEB01000071.1 (735828 bp) chr RDEB01000072.1 (735810 bp) chr RDEB01000073.1 (734211 bp) chr RDEB01000074.1 (727944 bp) chr RDEB01000075.1 (714259 bp) chr RDEB01000076.1 (710645 bp) chr RDEB01000077.1 (709730 bp) chr RDEB01000078.1 (706098 bp) chr RDEB01000079.1 (702875 bp) chr RDEB01000080.1 (697409 bp) chr RDEB01000081.1 (697225 bp) chr RDEB01000082.1 (696462 bp) chr RDEB01000083.1 (691775 bp) chr RDEB01000084.1 (689230 bp) chr RDEB01000085.1 (689149 bp) chr RDEB01000086.1 (685932 bp) chr RDEB01000087.1 (683424 bp) chr RDEB01000088.1 (683185 bp) chr RDEB01000089.1 (682905 bp) chr RDEB01000090.1 (680182 bp) chr RDEB01000091.1 (670709 bp) chr RDEB01000092.1 (670410 bp) chr RDEB01000093.1 (668648 bp) chr RDEB01000094.1 (668448 bp) chr RDEB01000095.1 (664016 bp) chr RDEB01000096.1 (659099 bp) chr RDEB01000097.1 (657048 bp) chr RDEB01000098.1 (656749 bp) chr RDEB01000099.1 (652702 bp) chr RDEB01000100.1 (651628 bp) chr RDEB01000101.1 (651613 bp) chr RDEB01000102.1 (650710 bp) chr RDEB01000103.1 (647275 bp) chr RDEB01000104.1 (646764 bp) chr RDEB01000105.1 (646518 bp) chr RDEB01000106.1 (646260 bp) chr RDEB01000107.1 (644930 bp) chr RDEB01000108.1 (642161 bp) chr RDEB01000109.1 (640493 bp) chr RDEB01000110.1 (638532 bp) chr RDEB01000111.1 (637376 bp) chr RDEB01000112.1 (633474 bp) chr RDEB01000113.1 (628029 bp) chr RDEB01000114.1 (627396 bp) chr RDEB01000115.1 (627002 bp) chr RDEB01000116.1 (626913 bp) chr RDEB01000117.1 (625838 bp) chr RDEB01000118.1 (622393 bp) chr RDEB01000119.1 (621998 bp) chr RDEB01000120.1 (621618 bp) chr RDEB01000121.1 (611718 bp) chr RDEB01000122.1 (599855 bp) chr RDEB01000123.1 (592820 bp) chr RDEB01000124.1 (590584 bp) chr RDEB01000125.1 (589842 bp) chr RDEB01000126.1 (585859 bp) chr RDEB01000127.1 (580331 bp) chr RDEB01000128.1 (579729 bp) chr RDEB01000129.1 (579409 bp) chr RDEB01000130.1 (578342 bp) chr RDEB01000131.1 (577645 bp) chr RDEB01000132.1 (576140 bp) chr RDEB01000133.1 (573363 bp) chr RDEB01000134.1 (565908 bp) chr RDEB01000135.1 (561686 bp) chr RDEB01000136.1 (560038 bp) chr RDEB01000137.1 (559863 bp) chr RDEB01000138.1 (559035 bp) chr RDEB01000139.1 (553853 bp) chr RDEB01000140.1 (551847 bp) chr RDEB01000141.1 (547763 bp) chr RDEB01000142.1 (546238 bp) chr RDEB01000143.1 (544418 bp) chr RDEB01000144.1 (537790 bp) chr RDEB01000145.1 (540332 bp) chr RDEB01000146.1 (533656 bp) chr RDEB01000147.1 (506090 bp) chr RDEB01000148.1 (528813 bp) chr RDEB01000149.1 (528059 bp) chr RDEB01000150.1 (524987 bp) chr RDEB01000151.1 (524665 bp) chr RDEB01000152.1 (524542 bp) chr RDEB01000153.1 (524444 bp) chr RDEB01000154.1 (523657 bp) chr RDEB01000155.1 (523369 bp) chr RDEB01000156.1 (522933 bp) chr RDEB01000157.1 (520578 bp) chr RDEB01000158.1 (520359 bp) chr RDEB01000159.1 (519025 bp) chr RDEB01000160.1 (518877 bp) chr RDEB01000161.1 (518178 bp) chr RDEB01000162.1 (517381 bp) chr RDEB01000163.1 (516614 bp) chr 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bp) chr RDEB01027816.1 (683 bp) chr RDEB01027817.1 (683 bp) chr RDEB01027818.1 (677 bp) chr RDEB01027819.1 (676 bp) chr RDEB01027820.1 (669 bp) chr RDEB01027821.1 (655 bp) chr RDEB01027822.1 (648 bp) chr RDEB01027823.1 (647 bp) chr RDEB01027824.1 (644 bp) chr RDEB01027825.1 (642 bp) chr RDEB01027826.1 (635 bp) chr RDEB01027827.1 (632 bp) chr RDEB01027828.1 (630 bp) chr RDEB01027829.1 (628 bp) chr RDEB01027830.1 (627 bp) chr RDEB01027831.1 (626 bp) chr RDEB01027832.1 (625 bp) chr RDEB01027833.1 (622 bp) chr RDEB01027834.1 (618 bp) chr RDEB01027835.1 (611 bp) chr RDEB01027836.1 (605 bp) chr RDEB01027837.1 (603 bp) chr RDEB01027838.1 (602 bp) chr RDEB01027839.1 (602 bp) chr RDEB01027840.1 (595 bp) chr RDEB01027841.1 (587 bp) chr RDEB01027842.1 (573 bp) chr RDEB01027843.1 (580 bp) chr RDEB01027844.1 (580 bp) chr RDEB01027845.1 (579 bp) chr RDEB01027846.1 (578 bp) chr RDEB01027847.1 (577 bp) chr RDEB01027848.1 (569 bp) chr RDEB01027849.1 (563 bp) chr RDEB01027850.1 (562 bp) chr RDEB01027851.1 (561 bp) chr RDEB01027852.1 (551 bp) chr RDEB01027853.1 (546 bp) chr RDEB01027854.1 (543 bp) chr RDEB01027855.1 (536 bp) chr RDEB01027856.1 (536 bp) chr RDEB01027857.1 (531 bp) chr RDEB01027858.1 (529 bp) chr RDEB01027859.1 (527 bp) chr RDEB01027860.1 (517 bp) chr RDEB01027861.1 (517 bp) chr RDEB01027862.1 (513 bp) chr RDEB01027863.1 (509 bp) chr RDEB01027864.1 (508 bp) chr RDEB01027865.1 (507 bp) Single-core mode: setting pid to 1 Paired-end alignments will be performed ======================================= The provided filenames for paired-end alignments are /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth9_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth9_R2_001.fastq.gz Input files are in FastQ format Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth9_R1_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth9_R1_001.fastq.gz to Meth9_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth9_R1_001.fastq.gz to Meth9_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth9_R1_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Processing reads up to sequence no. 10000 from /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth9_R2_001.fastq.gz Writing a C -> T converted version of the input file Meth9_R2_001.fastq.gz to Meth9_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq Writing a G -> A converted version of the input file Meth9_R2_001.fastq.gz to Meth9_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Created C -> T as well as G -> A converted versions of the FastQ file Meth9_R2_001.fastq.gz (10001 sequences in total) Input files are Meth9_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth9_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth9_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth9_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq (FastQ) Now running 4 individual instances of Bowtie 2 against the bisulfite genome of /gscratch/srlab/sr320/data/froger/Mcap_Genome_02/ with the specified options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2CTgenome (reading in sequences from Meth9_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth9_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21612:1000_1:N:0:AGTTCAGG+NCAACAGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTAAATTATTTTTTAAAATATTAAATTTAAAATTTTTTATAATAATTAATTTATATTATTAATTTATTAATAATATTAAATTATTTTATTATATTTTTTTATAGAGAGATTGGAAGAGTAGTAGATTGGAAGAGTATATATTTGAATTT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21612:1000_2:N:0:AGTTCAGG+NCAACAGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 ACTACTCTTCCAATCTCTCTATAAAAAAATATAATAAAATAATTTAATATTATTAATAAATTAATAATATAAATTAATTATTATAAAAAATTTTAAATTTAATATTTTAAAAAATAATTTAAAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFF:FFFF:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFF,:FFFFFFFFFFF,FFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FF:FFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2GAgenome (reading in sequences from Meth9_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth9_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --norc)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21612:1000_1:N:0:AGTTCAGG+NCAACAGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNCAAACTACTTTTCAAAACATCAAATTTAAAACTCTTTACAACAACCAATTTACATTATCAACTCATTAATAATACTAAATTACCTTATCATACTCTCTCACAAAAAAATCAAAAAAACAATAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTC F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21612:1000_2:N:0:AGTTCAGG+NCAACAGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 ATTGTTTTTTTGATTTTTTTGTGAGAGAGTATGATAAGGTAATTTAGTATTATTAATGAGTTGATAATGTAAATTGGTTGTTGTAAAGAGTTTTAAATTTGATGTTTTGAAAAGTAGTTTGAAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFF:FFFF:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFF,:FFFFFFFFFFF,FFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FF:FFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for GAread1CTread2CTgenome (reading in sequences from Meth9_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq and Meth9_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21612:1000_1:N:0:AGTTCAGG+NCAACAGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNCAAACTACTTTTCAAAACATCAAATTTAAAACTCTTTACAACAACCAATTTACATTATCAACTCATTAATAATACTAAATTACCTTATCATACTCTCTCACAAAAAAATCAAAAAAACAATAAATCAAAAAAACACACATCTAAACTC F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21612:1000_2:N:0:AGTTCAGG+NCAACAGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 ATTGTTTTTTTGATTTTTTTGTGAGAGAGTATGATAAGGTAATTTAGTATTATTAATGAGTTGATAATGTAAATTGGTTGTTGTAAAGAGTTTTAAATTTGATGTTTTGAAAAGTAGTTTGAAAGATTGGAAGAGTGTTGTGTAGGGAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFF:FFFF:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFF,:FFFFFFFFFFF,FFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FF:FFFF YT:Z:UP Now starting a Bowtie 2 paired-end alignment for CTread1GAread2GAgenome (reading in sequences from Meth9_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth9_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, with the options: -q --score-min L,0,-0.2 -p 4 --reorder --ignore-quals --no-mixed --no-discordant --dovetail --maxins 500 --nofw)) Found first alignment: A00387:192:GW191111360th:4:1101:21612:1000_1:N:0:AGTTCAGG+NCAACAGA/1 77 * 0 0 * * 0 0 TNTAAATTATTTTTTAAAATATTAAATTTAAAATTTTTTATAATAATTAATTTATATTATTAATTTATTAATAATATTAAATTATTTTATTATATTTTTTTATAGAGAGATTGGAAGAGTAGTAGATTGGAAGAGTATATATTTGAATTT F#FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF YT:Z:UP A00387:192:GW191111360th:4:1101:21612:1000_2:N:0:AGTTCAGG+NCAACAGA/2 141 * 0 0 * * 0 0 ACTACTCTTCCAATCTCTCTATAAAAAAATATAATAAAATAATTTAATATTATTAATAAATTAATAATATAAATTAATTATTATAAAAAATTTTAAATTTAATATTTTAAAAAATAATTTAAAAAATCAAAAAAACATCATATAAAAAAA FFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFFFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF:FFF:FFFF:FFFF:FFFFFFFFFFFFFFFFF,:FFFFFFFFFFF,FFFFFFFF:FFFFFFFFFFFFFFF,FFFFFFFFFFFFFFFFFFF,FF:FFFF YT:Z:UP >>> Writing bisulfite mapping results to Meth9_R1_001_bismark_bt2_pe.bam <<< Reading in the sequence files /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth9_R1_001.fastq.gz and /gscratch/scrubbed/sr320/froger-raw/00_fastq/Meth9_R2_001.fastq.gz 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9996 (99.96%) aligned concordantly 0 times 2 (0.02%) aligned concordantly exactly 1 time 2 (0.02%) aligned concordantly >1 times 0.04% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9994 (99.94%) aligned concordantly 0 times 1 (0.01%) aligned concordantly exactly 1 time 5 (0.05%) aligned concordantly >1 times 0.06% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9996 (99.96%) aligned concordantly 0 times 1 (0.01%) aligned concordantly exactly 1 time 3 (0.03%) aligned concordantly >1 times 0.04% overall alignment rate 10000 reads; of these: 10000 (100.00%) were paired; of these: 9997 (99.97%) aligned concordantly 0 times 0 (0.00%) aligned concordantly exactly 1 time 3 (0.03%) aligned concordantly >1 times 0.03% overall alignment rate Processed 10000 sequences in total Successfully deleted the temporary files Meth9_R1_001.fastq.gz_C_to_T.fastq, Meth9_R1_001.fastq.gz_G_to_A.fastq, Meth9_R2_001.fastq.gz_C_to_T.fastq and Meth9_R2_001.fastq.gz_G_to_A.fastq Final Alignment report ====================== Sequence pairs analysed in total: 10000 Number of paired-end alignments with a unique best hit: 5 Mapping efficiency: 0.1% Sequence pairs with no alignments under any condition: 9989 Sequence pairs did not map uniquely: 6 Sequence pairs which were discarded because genomic sequence could not be extracted: 0 Number of sequence pairs with unique best (first) alignment came from the bowtie output: CT/GA/CT: 1 ((converted) top strand) GA/CT/CT: 3 (complementary to (converted) top strand) GA/CT/GA: 1 (complementary to (converted) bottom strand) CT/GA/GA: 0 ((converted) bottom strand) Final Cytosine Methylation Report ================================= Total number of C's analysed: 335 Total methylated C's in CpG context: 18 Total methylated C's in CHG context: 2 Total methylated C's in CHH context: 0 Total methylated C's in Unknown context: 0 Total unmethylated C's in CpG context: 29 Total unmethylated C's in CHG context: 56 Total unmethylated C's in CHH context: 230 Total unmethylated C's in Unknown context: 0 C methylated in CpG context: 38.3% C methylated in CHG context: 3.4% C methylated in CHH context: 0.0% Can't determine percentage of methylated Cs in unknown context (CN or CHN) if value was 0 Bismark completed in 0d 0h 0m 26s ==================== Bismark run complete ====================